白掌种苗组培快繁技术规程DB50／T 1148-2021.pdf

I C S 6 5.0 2 0.9 9C C S B 6 2DB50重 庆 市 地 方 标 准D B 5 0/T 1 1 4 8 2 0 2 1白 掌 种 苗 组 培 快 繁 技 术 规 程2021-1 1-01 发 布 2 0 2 2-0 2-0 1 实 施重 庆 市 市 场 监 督 管 理 局发 布D B 5 0/T 1 1 4 8 2 0 2 1I前 言本 文 件 按 照 G B/T 1.1 2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分：标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定起 草。本 文 件 由 重 庆 市 农 业 农 村 委 员 会 提 出 并 归 口。本 文 件 起 草 单 位：重 庆 市 农 业 科 学 院。本 文 件 主 要 起 草 人 员：杨 小 艳、谢 树 章、王 忠 伟、韩 垚、林 清、吴 红、王 虹。D B 5 0/T 1 1 4 8 2 0 2 11白 掌 种 苗 组 培 快 繁 技 术 规 程1 范 围本 文 件 规 定 了 白 掌 种 苗 组 培 快 繁 的 设 施 设 备、操 作 流 程 等 技 术 要 求。本 文 件 适 用 于 白 掌 种 苗 的 生 产。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款。其 中，注 日 期 的 引 用 文 件，仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件；不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本文 件。G B/T 6 6 8 2 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法G B/T 8 3 2 1 农 药 合 理 使 用 准 则G B 1 9 4 8 9 实 验 室 生 物 安 全 通 用 要 求N Y/T 4 9 6 肥 料 合 理 使 用 准 则 通 则3 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件。3.1白 掌 S p a t h i p h y l l u m f l o r i b u n d u m又 名 白 鹤 芋、苞 叶 芋、银 苞 芋，为 天 南 星 科 白 鹤 芋 属 多 年 生 常 绿 草 本 花 卉。3.2组 培 快 繁 t i s s u e c u l t u r e a n d r a p i d p r o p a g a t i o n从 植 物 体 分 离 出 符 合 需 要 的 器 官 或 组 织 材 料，通 过 无 菌 操 作，在 人 工 控 制 条 件 下 进 行 离 体 培 养，在短 时 间 内 获 得 大 量 遗 传 性 一 致 个 体 的 方 法。3.3外 植 体 e x p l a n t从 自 然 生 长 的 活 体 植 物 上 获 取 的 用 于 建 立 植 物 组 培 快 繁 体 系 的 起 始 材 料。3.4组 培 苗 p l a n t l e t利 用 植 物 组 织、器 官 或 细 胞 等 作 为 起 始 材 料，通 过 植 物 组 织 培 养 方 式 生 产 获 得 的 植 株。4 缩 略 语D B 5 0/T X X X X X X2下 列 缩 略 语 适 用 于 本 文 件。6-B A：6-苄 基 腺 嘌 呤（6-b e n z y l a m i n o p u r i n e）I B A：吲 哚 丁 酸（3-i n d o l e b u t y r i c a c i d）M S：一 种 常 用 基 本 培 养 基（M u r a s h i g e 和 S k o o g（1 9 6 2）N A A：萘 乙 酸（n a p h t h y l e n e a c e t i c a c i d）T w e e n-2 0：聚 氧 乙 烯 失 水 山 梨 醇 单 月 桂 酸 酯（P o l y o x y e t h y-l e n e(2 0)S o r b a i t a n M o n o l a u r a t e）5 设 施 设 备5.1 设 施 要 求包 括 准 备 室、药 品 室、培 养 基 配 制 室、灭 菌 室、洗 涤 室、更 衣 室、接 种 室、培 养 室、驯 化 室 等，根据 生 产 工 艺 流 程（生 产 流 水 线）有 序 排 布。接 种 室 和 培 养 室 应 防 潮、隔 热 保 温、保 持 清 洁，定 期 进 行 环境 消 毒。周 边 环 境 应 干 燥、安 静、通 风 透 光、空 气 清 新。5.2 仪 器 设 备 要 求包 括 高 压 灭 菌 器、紫 外 灯、臭 氧 发 生 器、电 子 天 平、p H 计、冰 箱、微 波 炉、超 净 工 作 台、微 量 移液 器、接 种 器 具（电 热 杀 菌 器）、石 英 玻 璃 珠、枪 状 镊 子、手 术 刀 柄 刀 片、切 割 碟 子、温 度 计、光 照 培养 箱、培 养 架（包 括 日 光 灯）、调 速 振 荡 器、组 培 瓶、试 管、盛 装 器 皿（烧 杯、试 剂 瓶 等）、计 量 器 皿（量 筒、容 量 瓶 等）以 及 其 他 常 用 消 耗 品 等。仪 器 设 备 应 符 合 G B 1 9 4 8 9 的 规 定。6 组 培 快 繁 操 作 流 程6.1 接 种 前 准 备6.1.1 培 养 基 配 制 和 灭 菌6.1.1.1 培 养 基 配 制芽 诱 导 培 养 基：M S+1 m g/L 6-B A+0.0 5 m g/L N A A+3 0 g/L 蔗 糖+7 g/L 琼 脂，p H 值 为 5.6 5.8。继 代 增 殖 培 养 基：M S+0.4 m g/L 6-B A+0.0 5 m g/L I B A+3 0 g/L 蔗 糖+7 g/L 琼 脂，p H 值 为 5.6 5.8。生 根 培 养 基：1/2 M S+0.0 5 m g/L I B A+3 0 g/L 蔗 糖+7 g/L 琼 脂，p H 值 为 5.6 5.8。配 制 培 养 基 用 水 应 不 低 于 G B/T 6 6 8 2 规 定 的 三 级 水。6.1.1.2 培 养 基 灭 菌培 养 基 配 制 完 后，分 装 至 组 培 瓶 中。1 2 1 高 压 灭 菌 1 5 m i n 2 0 m i n，取 出 冷 却 备 用。6.1.2 超 净 工 作 台 消 毒超 净 工 作 台（或 洁 净 无 菌 接 种 室）提 前 3 0 m i n 打 开 紫 外 灯，灭 杀 菌 3 0 m i n 后 关 掉 紫 外 灯，然 后 开机 通 风，打 开 接 种 用 电 热 灭 菌 器，1 5 m i n 2 0 m i n 后 人 员 才 可 进 入 室 内。用 7 5%酒 精 擦 洗 超 净 工 作 台 台面 消 毒。6.1.3 接 种 人 员 准 备D B 5 0/T 1 1 4 8 2 0 2 13接 种 人 员 应 在 更 衣 室 更 换 拖 鞋、穿 白 大 褂（或 接 种 服），戴 上 帽 子 和 口 罩 后 进 入 接 种 室（或 经 过 风淋 室 后 进 入 接 种 室），操 作 前 和 操 作 中 经 常 用 7 5%酒 精 棉 球 擦 手。6.2 外 植 体 接 种6.2.1 外 植 体 的 选 择应 选 择 长 势 健 壮、叶 色 浓 绿 有 光 泽、花 朵 大、无 病 虫 害 的 优 良 植 株 带 侧 芽 的 当 年 生 茎 段。6.2.2 外 植 体 的 消 毒 灭 菌 处 理将 选 好 的 白 掌 侧 芽 茎 段 去 除 叶 片 后，用 自 来 水 冲 洗 干 净，切 除 在 外 暴 露 的 表 皮，用 7 5%酒 精 浸 泡 消毒 1 m i n，倒 出 酒 精 后，用 无 菌 蒸 馏 水 冲 洗 2 次，再 用 3%次 氯 酸 钠 溶 液（现 配 现 用、避 光）加 1 滴 2 滴T w e e n-2 0 消 毒 1 5 m i n 2 0 m i n，并 不 断 摇 动。将 次 氯 酸 钠 溶 液 倒 出，用 无 菌 蒸 馏 水 冲 洗 5 次 6 次，用 无 菌 滤 纸 吸 干 水 分。6.2.3 接 种 器 械 灭 菌接 种 器 械 先 用 7 5%酒 精 擦 拭，再 放 在 酒 精 灯 外 焰 上 灼 烤，时 间 1 0 s。若 使 用 接 种 用 电 热 灭 菌 器，接 种 器 械 先 用 7 5%酒 精 擦 拭，待 电 热 灭 菌 器 温 度 升 至 2 5 0 3 0 0，再 插 入 接 种 用 电 热 灭 菌 器 中 进 行灭 菌，第 一 次 灭 菌 3 m i n 4 m i n，以 后 每 次 使 用 灭 菌 1 5 s。6.2.4 外 植 体 接 种将 侧 芽 茎 段 平 放 在 无 菌 滤 纸 上，用 解 剖 刀 剥 掉 外 层 叶 片 后，切 取 顶 端 0.5 c m 0.8 c m 的 芽 组 织，接种 到 芽 诱 导 培 养 基 中。接 种 时 左 手 拿 组 培 瓶，右 手 轻 轻 取 下 盖 子，然 后 用 镊 子 将 材 料 送 入 瓶 中，轻 轻 一压，使 外 植 体 与 培 养 基 紧 密 接 触，并 使 外 植 体 在 瓶 内 均 匀 分 布。接 种 完 毕 立 即 盖 上 瓶 盖 并 做 好 标 记，注明 材 料 名 称、接 种 日 期、培 养 基 类 型、接 种 人 等 事 项。6.3 培 养6.3.1 芽 诱 导外 植 体 接 种 到 芽 诱 导 培 养 基 后，将 组 培 瓶 整 齐、均 匀 摆 放 在 培 养 架 上，温 度 2 5，光 照 强 度 2 0 0 0l x 3 0 0 0 l x，光 照 1 2 h，黑 暗 1 2 h，诱 导 时 间 为 4 0 d 6 0 d。培 养 期 间 定 期 观 察 材 料 生 长 情 况，并 作好 记 载，如 发 现 污 染，应 及 时 将 污 染 瓶 移 出 培 养 室，待 高 温 灭 菌 后 清 洗 或 丢 弃。6.3.2 继 代 增 殖 快 繁6.3.2.1 提 取 母 瓶应 仔 细 检 查，剔 除 污 染 母 瓶。6.3.2.2 取 苗先 打 开 组 培 瓶 盖，瓶 口 不 应 斜 向 外，将 取 出 的 白 掌 丛 生 苗 放 于 无 菌 的 碟 子 上 分 苗。6.3.2.3 切 苗 接 种用 解 剖 刀 将 白 掌 丛 生 苗 切 割 成 单 株 小 苗 或 小 团 块，每 个 小 团 块 3 株 4 株 小 芽 苗，将 小 苗 或 小 团 块接 种 到 继 代 增 殖 培 养 基 中，宜 接 种 6 株 8 株（团）/瓶。接 种 完 毕 后 做 好 标 记，注 明 材 料 名 称、接 种D B 5 0/T X X X X X X4日 期、培 养 基 类 型 等 事 项。培 养 室 温 度 为 2 5，光 照 强 度 2 0 0 0 l x 3 0 0 0 l x，光 照 1 2 h，黑 暗 1 2 h，3 0 d 继 代 一 次。6.3.3 生 根 壮 苗从 继 代 增 殖 瓶 苗 中 提 取 母 瓶，取 苗 放 置 于 无 菌 的 碟 子 上，分 苗 切 取 生 长 健 壮、叶 色 正 常、叶 片 舒 展、适 于 生 根 的 幼 苗 接 种 到 生 根 培 养 基 中，宜 接 种 1 0 株/瓶。接 种 完 毕 后 做 好 标 记，注 明 材 料 名 称、接 种 日期、培 养 基 类 型 等 事 项。光 照 强 度 2 0 0 0 l x 3 0 0 0 l x，光 照 1 2 h，黑 暗 1 2 h，3 0 d 后 检 查 幼 苗 基 部 新根 生 长 情 况。其 它 操 作 要 求 参 照 6.3.2。6.4 组 培 苗 炼 苗 与 移 栽 管 理6.4.1 组 培 苗 移 栽 要 求生 根 培 养 3 0 d 后，株 高 2.5 c m 5.0 c m；茎 干 粗 壮，不 徒 长；叶 数 3 片 5 片，叶 色 翠 绿，幼 苗基 部 长 出 3 条 以 上、长 1 c m 3 c m 的 新 根，根 系 粗 壮 有 活 力。6.4.2 炼 苗将 生 根 后 的 瓶 苗 移 出 培 养 室 放 入 驯 化 室 松 盖 炼 苗 2 d 以 上，炼 苗 时 温 度 为 2 0 2 8，空 气 湿 度为 6 0%8 0%，光 照 强 度 为 3 0 0 0 l x 5 0 0 0 l x，保 持 环 境 洁 净。6.4.3 移 栽 基 质 准 备用 粗 细 度 0 m m 1 0 m m 泥 炭 加 水 搅 拌 预 湿，相 对 含 水 量 为 5 5%6 0%。6.4.4 移 栽用 镊 子 轻 轻 取 出 组 培 幼 苗 并 洗 净 其 根 部 培 养 基，用 0.2%多 菌 灵+0.1%生 根 粉 溶 液 浸 泡 2 m i n 5 m i n后，种 植 至 装 有 基 质 的 5 0 孔 穴 盘（长 宽 2 8.5 c m 5 4 c m，孔 径 3 c m 3 c m）中，再 用 0.2%多 菌 灵+0.1%生 根 粉 溶 液 浇 透 基 质。6.4.5 移 栽 管 理用 薄 膜 和 遮 阳 率 7 5%的 遮 阳 网 盖 膜 保 湿 遮 光，空 气 湿 度 控 制 在 7 5%8 5%；1 4 d 后 撤 掉 薄 膜 和 遮 阳 网，不 应 强 光 直 晒，保 持 基 质 湿 润，养 护 温 度 为 2 5 2 8；当 小 苗 有 新 根 和 新 叶 长 出 时 开 始 施 肥。选 用肥 料 应 符 合 N Y/T 4 9 6 的 规 定，病 虫 害 防 治 选 用 农 药 应 符 合 G B/T 8 3 2 1 的 规 定。6.5 种 苗 出 圃当 种 苗 株 高 5 c m 8 c m，苗 健 壮 挺 拔，形 态 完 整，叶 数 5 片 1 0 片，叶 色 浓 绿 有 光 泽，根 系 成 团时 可 出 圃。