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IC S 6 5.0 2 0.2 0I C S 6 5.0 2 0.2 0C C S B 1 5DB23黑 龙 江 省 地 方 标 准D B 2 3/T 2 9 7 9 2 0 2 1大 豆 对 大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 抗 病 性鉴 定 技 术 规 程2 0 2 1-0 9-0 8 发 布 2 0 2 1-1 0-0 7 实 施黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局发 布D B 2 3/T 2 9 7 9 2 0 2 1I前 言本 文 件 按 照 G B/T 1.1-2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分：标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定 起草。请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利。本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 这 些 专 利 的 责 任。本 文 件 由 黑 龙 江 省 农 业 农 村 厅 提 出。本 文 件 由 黑 龙 江 省 农 业 标 准 化 技 术 委 员 会 归 口。本 文 件 起 草 单 位：中 国 科 学 院 东 北 地 理 与 农 业 生 态 研 究 所。本 文 件 主 要 起 草 人：许 艳 丽、陆 欣 春、韩 晓 增、潘 凤 娟、邹 文 秀、李 雪 光、战 丽 莉、严 君、陈 旭。D B 2 3/T 2 9 7 9 2 0 2 11大 豆 对 大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 抗 病 性 鉴 定 技 术 规 程1 范 围本 文 件 规 定 了 大 豆 对 由 大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 菌（P h o m o p s i s l o n g i c o l l a H o b b s）引 起 的 种 腐 病 抗 病 性 鉴定 术 语 和 定 义、病 原 菌 接 种 体 制 备、大 豆 种 子 要 求、大 豆 种 子 抗 病 性 鉴 定 和 大 豆 植 株 抗 病 性 鉴 定。本 文 件 适 用 于 大 豆 对 大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 抗 病 性 的 鉴 定 和 评 价。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款。其 中，注 日 期 的 引 用 文 件，仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件；不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本文 件。G B 4 4 0 4.2 粮 食 作 物 种 子 第 2 部 分：豆 类S N/T 4 8 6 5 大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 菌 检 疫 鉴 定 方 法3 术 语 和 定 义菌 丝 覆 盖 率是 指 在 大 豆 种 子 抗 病 性 鉴 定 中，大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 菌 接 种 的 种 子 中，菌 丝 全 部 覆 盖 的 种 子 数 占 供 试种 子 总 数 的 百 分 率。4 病 原 菌 接 种 体 制 备4.1 培 养 基 准 备病 原 菌 菌 株 纯 化 及 分 离 所 用 培 养 基 为 酸 性 P D A 培 养 基(A P D A)，配 方 为 马 铃 薯 2 0 0 g、葡 萄 糖 2 0 g、琼 脂 条 2 0 g，待 P D A 培 养 基 冷 却 到 4 5 5 0 时，用 过 滤 除 菌 的 8 5%乳 酸 调 节 p H 至 4.5 后 到 平 板。4.2 病 原 菌 接 种 体 制 备挑 取 少 量 活 化 的 大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 菌 菌 丝 到 A P D A 上，2 5 2 8 1 2 h 光 照 1 2 h 黑 暗 交 替 培 养，直 到 长 出 典 型 菌 落，并 符 合 S N/T 4 8 6 5 的 规 定。5 大 豆 种 子 要 求所 用 品 种 种 子 的 质 量 要 求 按 G B 4 4 0 4.2 的 规 定 执 行。6 大 豆 种 子 抗 病 性 鉴 定D B 2 3/T 2 9 7 9 2 0 2 126.1 鉴 定 方 法 和 公 式将 病 原 菌 接 种 于 APDA 培 养 基 平 板 上，2 5 暗 培 养 5 d 后，选 取 健 康 大 豆 种 子，经 7 5%酒 精 消 毒 3 m i n，用 无 菌 水 冲 洗 3 遍，放 置 于 灭 菌 的 滤 纸 上 稍 风 干，匀 距 摆 放 在 菌 落 边 缘，以 A P D A 培 养 基 上 不 接种 病 原 菌 的 大 豆 种 子 为 对 照，继 续 2 5 暗 培 养 5 d。每 皿 1 0 粒，重 复 3 次。接 种 后 第 4 d 和 第 5 d 分 别调 查 发 芽 种 子 数，第 5 d 调 查 被 菌 丝 覆 盖 的 大 豆 种 子 数，计 算 种 子 发 芽 势、发 芽 率 和 菌 丝 覆 盖 率。计 算 公 式：种 子 菌 丝 覆 盖 率(%)=(被 菌 丝 覆 盖 种 子 数/鉴 定 种 子 总 数)1 0 0发 芽 势(%)=发 芽 初 期(第 4 d)正 常 发 芽 种 子 数/鉴 定 种 子 总 数 1 0 0种 子 发 芽 率（%）=发 芽 终 期（第 5 d）全 部 正 常 发 芽 总 数 鉴 定 试 种 子 总 数 1 0 06.2 抗 病 评 价 标 准抗 病 标 准 以 种 子 菌 丝 覆 盖 率、种 子 发 芽 势 和 发 芽 率 降 低 率 综 合 评 定，即 如 果 种 子 菌 丝 覆 盖 率 高 于8 0.0%时，以 种 子 菌 丝 覆 盖 率 为 主 要 评 价 指 标，如 种 子 菌 丝 覆 盖 率 低 于 8 0.0%时，以 种 子 发 芽 势 和发 芽 率 降 低 为 主 要 指 标。标 准 如 下：种 子 菌 丝 覆 盖 率，种 子 发 芽 势 和 发 芽 率 降 低低 于 4 0.0%：抗 病 品 种；4 0.0%5 9.9%：中 抗 品 种；6 0.0%7 9.9%：中 感 品 种；8 0.0%9 9.9 0%：感 病 品 种；1 0 0.0%：高 感 品 种。记 录 见 附 录 表 A。7 大 豆 植 株 抗 病 性 鉴 定7.1 植 株 准 备采 用 苗 期 切 顶 端 接 种 法。在 温 室 花 盆 中 播 种 大 豆，待 大 豆 植 株 的 第 一 片 三 出 复 叶 展 平 时，在 茎 节 点下 面 的 横 切 面 上 将 茎 秆 剪 断，下 部 植 株 用 于 接 种。7.2 鉴 定 方 法将 病 原 菌 在 A P D A 培 养 基 平 板 上 2 5 暗 培 养 1 0 d，在 菌 落 边 缘 用 打 孔 器 打 取 直 径 为 5 m m的 菌 丝 块 贴 于 刚 剪 断 的 植 株 茎 秆 横 切 面 上，用 封 口 膜 包 住 接 种 体 和 植 株 茎 秆 横 切 面，套 塑 料 袋 保 湿 4 8 h，接 种 3 0 株；以 直 径 5 m m 的 A P D A 培 养 基 块 贴 于 大 豆 植 株 茎 秆 横 切 面 作 对 照。7.3 抗 病 性 评 价 标 准接 种 后 2 d 取 下 接 种 体，接 种 后 7 d 测 量 大 豆 植 株 茎 病 斑 长 度，并 计 算 茎 病 斑 长 度 占 植 株 茎 长 度 的百 分 率。茎 病 斑 长 比 率（%）=（茎 病 斑 长 度 植 株 茎 长 度）1 0 0茎 病 斑 长 度 占 植 株 茎 长 度 的 百 分 率：低 于 4.0%：抗 病 品 种；4.0%5.9%：中 抗 品 种；D B 2 3/T 2 9 7 9 2 0 2 136.0%7.9%：中 感 品 种；8.0%9.9%：感 病 品 种；1 0.0%以 上：高 感 品 种。记 录 见 附 录 表 B。7.4 调 查 记 录详 细 记 载 调 查 方 法 和 鉴 定 过 程，并 记 录 存 档。D B 2 3/T 2 9 7 9 2 0 2 14附 录 A（资 料 性）大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 种 子 抗 病 性 鉴 定 记 载、评 价 表表 A.1 大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 种 子 抗 病 性 鉴 定 种 子 菌 丝 覆 盖 率 调 查 表接 种 日 期：鉴 定 地 点：调 查 日 期：调 查 人：记 录 人：单 位：鉴 定 编 号 重 复 鉴 定 种 子 数 被 菌 丝 覆 盖 种 子 数 种 子 菌 丝 覆 盖 率（%）II II I III II I III II I I表 A.2 大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 种 子 抗 病 性 鉴 定 种 子 发 芽 势 和 种 子 发 芽 率 调 查 表接 种 日 期：鉴 定 地 点：调 查 日 期：调 查 人：记 录 人：单 位：鉴 定编 号重 复 鉴 定种 子 数种 子 发 芽 数 种 子 发 芽 势（%）种 子 发 芽 率（%）接 种 第 4 d 接 种 第 5 dII II I III II I III II I ID B 2 3/T 2 9 7 9 2 0 2 15表 A.3 大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 种 子 抗 病 性 鉴 定 评 价 表接 种 日 期：鉴 定 地 点：调 查 日 期：调 查 人：记 录 人：单 位：鉴 定 编 号 鉴 定 品 种种 子 菌丝 覆 盖率（%）II II I I平 均降 低种 子 发芽 势（%）II II I I平 均降 低种 子 发芽 率（%）II II I I平 均降 低抗 病 性 级 别抗 病 性 评 价D B 2 3/T 2 9 7 9 2 0 2 16附 录 B（资 料 性）大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 植 株 抗 病 性 鉴 定 记 载、评 价 表表 B.1 大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 植 株 抗 病 性 鉴 定 茎 病 斑 长 度 调 查 表播 种 日 期：接 种 日 期：调 查 日 期：调 查 人：记 录 人：鉴 定 地 点：鉴 定编 号重 复 茎 病 斑 长 度（m m）植 株 茎 长 度（m m）茎 病 斑 长 占 植 株 茎 长百 分 比（%）II II I III II I III II I I表 B.2 大 豆 拟 茎 点 种 腐 病 植 株 抗 病 性 鉴 定 评 价 表鉴 定 编 号 鉴 定 品 种 茎 病 斑 长 占 植 株 茎 长 比 率（%）抗 病 性级 别抗 病 性评 价I I I I I I 平 均_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
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