软枣猕猴桃组织培养育苗技术规程DB1310／T 251—2021.pdf

ICS 6 5.0 2 0.0 1CCS B 0 51310廊 坊 市 地 方 标 准D B 1 3 1 0/T 2 5 1 2 0 2 1软 枣 猕 猴 桃 组 织 培 养 育 苗 技 术 规 程2 0 2 1-1 1-1 5 发 布 2 0 2 1-1 2-1 5 实 施廊 坊 市 市 场 监 督 管 理 局 发 布D B 1 3 1 0/T 2 5 1 2 0 2 1I前 言本 文 件 按 照 G B/T 1.1 2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分：标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定起 草。本 文 件 由 廊 坊 市 农 业 农 村 局 提 出。本 文 件 起 草 单 位：廊 坊 市 兴 延 科 技 服 务 有 限 公 司、廊 坊 师 范 学 院。本 文 件 主 要 起 草 人：苏 彦 苹、申 彦 平、冯 雪、王 秋 芬、褚 卓 栋、孙 艳 香、张 程 亮、梁 金 明、袁 志 刚、张 方 悦。D B 1 3 1 0/T 2 5 1 2 0 2 11软 枣 猕 猴 桃 组 织 培 养 育 苗 技 术 规 程1 范 围本 文 件 规 定 了 软 枣 猕 猴 桃 组 培 育 苗 的 术 语 和 定 义、培 养 基 制 备、初 代 培 养、继 代 培 养、炼 苗、移 栽、大 田 移 栽 及 管 理、苗 木 出 圃 标 准、保 管、包 装 及 运 输、技 术 档 案 管 理。本 文 件 适 用 于 廊 坊 及 气 候 相 近 地 区 软 枣 猕 猴 桃 组 织 培 养 育 苗 生 产。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款。其 中，注 日 期 的 引 用 文 件，仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件；不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本文 件。G B/T 6 0 0 1 1 9 8 5 育 苗 技 术 规 程G B 1 9 1 7 4 2 0 1 0 猕 猴 桃 苗 木L Y/T 1 8 8 2 2 0 1 0 林 木 组 织 培 养 育 苗 技 术 规 程3 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件。组 培 苗根 据 植 物 细 胞 全 能 性，将 植 物 的 体 细 胞、组 织 或 器 官 进 行 离 体 培 养，经 过 不 同 的 细 胞 分 化 途 径 重 建形 成 不 同 的 器 官，诱 导 培 育 出 的 完 整 植 株。外 植 体是 指 用 于 植 物 组 织 培 养 的 接 种 材 料，它 包 括 植 物 体 的 各 种 器 官、组 织、细 胞 和 原 生 质 体 等。继 代 培 养将 诱 导 产 生 的 芽、愈 伤 组 织、原 球 茎 或 胚 状 体 等 培 养 物 重 新 分 割，接 种 到 新 鲜 培 养 基 上 进 一 步 扩 大培 养 的 过 程。4 培 养 基 制 备培 养 基 配 方基 本 培 养 基 采 用 M S 培 养 基，具 体 的 外 植 体 诱 导 培 养 基 及 继 代 培 养 基 配 方 表 见 附 录 A。母 液 配 制D B 1 3 1 0/T 2 5 1 2 0 2 12按 照 L Y/T 1 8 8 2 2 0 1 0 林 木 组 织 培 养 育 苗 技 术 规 程 中 第 4 章 的 4.1 培 养 基 母 液 配 制 及 保 存 执 行。培 养 基 配 制根 据 培 养 基 配 方 与 培 养 基 配 制 量，按 比 例 吸 取 母 液 配 制 培 养 基 溶 液，每 加 一 种 母 液 搅 拌 均 匀 后 再 加入 第 二 种 母 液，并 加 入 0.7%的 凝 固 剂 与 3%的 蔗 糖，加 水 定 容 后 充 分 搅 拌 溶 解。将 配 制 好 的 培 养 基 溶 液 装入 不 锈 钢 锅，加 热 至 沸 腾，使 培 养 基 完 全 溶 解，然 后 用 1.0 m o l/L 盐 酸 或 1.0 m o l/L 氢 氧 化 钠 溶 液 调 整 p H值 至 5.8 6.0。培 养 基 加 热 溶 解 后 分 装 到 高 度 为 1 0 c m 1 5 c m 的 培 养 瓶 内，体 积 为 培 养 瓶 容 量 的 3 0%4 0%，密 封 后 备 用。培 养 基 灭 菌培 养 基 配 制 完 成 后，在 2 4 h 内 完 成 灭 菌。将 分 装 好 的 培 养 基 放 入 灭 菌 锅 内，严 格 按 灭 菌 锅 的 使 用 要求 操 作，灭 菌 气 压 0.1 1 M P a，温 度 1 2 1，灭 菌 时 间 2 0 m i n 2 5 m i n。培 养 基 灭 菌 完 成 后 待 温 度 下 降 到 8 0 以 下 取 出，放 置 在 实 验 台 上 保 存。培 养 基 保 存培 养 基 宜 现 配 现 用。确 需 保 存 时，应 放 置 在 干 净、避 光 的 室 内 进 行 保 存。室 温 2 5 以 下 保 存 应 在 7 d内 使 用 完，2 4 冷 藏 保 存 应 在 1 4 d 内 使 用 完。5 初 代 培 养外 植 体 采 集5.1.1 采 集 母 株 要 求采 集 母 株 为 种 质 优 良、性 状 稳 定、生 长 健 壮、无 病 虫 害 的 软 枣 猕 猴 桃 植 株。5.1.2 采 集 时 间 和 方 法4 月 至 9 月，选 择 连 续 2 d 以 上 晴 天 的 傍 晚，采 集 母 株 树 冠 外 围 中 上 部 幼 嫩 新 梢，剪 除 叶 片 作 为 外 植体 备 用；1 2 月 至 翌 年 3 月，采 集 一 年 生 枝 条，修 剪 成 2 0 c m 左 右 枝 段，流 水 冲 洗 后 将 其 下 端 浸 泡 在 盛 有 清水 的 容 器 中，在 2 3 2 5 培 养 箱 中 催 芽，每 2 d 3 d 换 一 次 水，待 叶 芽 萌 动 长 出 新 梢 后，采 集 幼 嫩 新梢 做 外 植 体。5.1.3 采 集 记 录采 集 后 标 明 品 种 名 称、采 集 地 点、采 集 时 间、采 集 人 等 信 息，建 立 信 息 档 案。外 植 体 处 理5.2.1 保 藏可 用 湿 润 毛 巾 等 保 湿 材 料 包 裹 后 保 存 0.5 h 4.0 h；用 泡 沫 保 鲜 箱 配 备 冰 袋 低 温 保 藏 4 8.0 h，注 意枝 条 不 可 直 接 接 触 冰 袋。5.2.2 预 处 理D B 1 3 1 0/T 2 5 1 2 0 2 13用 自 来 水 冲 洗 外 植 体 表 面，将 外 植 体 剪 成 4.0 c m 6.0 c m 的 带 芽 茎 段，放 入 装 有 0.3%0.5%中 性 洗洁 剂 水 溶 液 的 培 养 瓶 中，于 振 荡 培 养 箱 中 1 0 0 转/分 钟 慢 速 振 荡 3 0 m i n，再 用 流 水 冲 洗 茎 段 1.0 h 2.0 h。外 植 体 消 毒 及 接 种5.3.1 接 种 器 具 准 备5.3.1.1 超 净 工 作 台 消 毒接 种 前 使 用 7 5%酒 精 将 超 净 工 作 台 的 台 面 及 内 壁 擦 拭 干 净，然 后 启 动 超 净 工 作 台 并 开 启 紫 外 灯 消 毒3 0 m i n。关 闭 紫 外 灯 后 开 启 超 净 工 作 台 风 机，鼓 风 1 0 m i n 后 方 可 进 行 接 种 工 作。5.3.1.2 接 种 工 具 灭 菌接 种 剪、枪 状 镊、接 种 盘、烧 杯 等 接 种 工 具 可 提 前 用 高 压 灭 菌 锅 灭 菌，在 接 种 过 程 中 可 用 置 于 超 净工 作 台 上 的 酒 精 灯 或 电 热 消 毒 器 灭 菌。灭 菌 后 的 接 种 工 具 搁 置 在 无 菌 的 接 种 器 皿 上，待 冷 却 至 室 温 后 方可 使 用。5.3.2 外 植 体 消 毒用 7 5%酒 精 对 双 手 及 手 腕 消 毒，将 预 处 理 后 的 材 料 置 于 已 消 毒 的 超 净 工 作 台 上，剪 成 带 1 个 或 2 个 芽的 茎 段 置 于 已 灭 菌 的 烧 杯 中，先 用 7 5%酒 精 浸 泡 外 植 体 3 0 s，无 菌 水 清 洗 3 次，每 次 3 0 s，再 用 1 0%次 氯 酸钠 溶 液 灭 菌 1 0 m i n，无 菌 水 清 洗 3 次，每 次 3 0 s，用 无 菌 滤 纸 吸 干 外 植 体 表 面 的 水 分。也 可 选 用 其 它 外 植体 消 毒 化 学 药 品，按 L Y/T 1 8 8 2 2 0 1 0 的 有 关 规 定 执 行。5.3.3 接 种于 超 净 工 作 台 上 将 已 消 毒 的 外 植 体 茎 段 两 端 各 剪 掉 1 m m，垂 直 插 入 诱 导 培 养 基，每 个 培 养 瓶 接 种 3个 茎 段，均 匀 分 布，接 种 后 将 培 养 瓶 瓶 口 在 酒 精 灯 火 焰 上 灼 烧 1 s 2 s，迅 速 盖 好 瓶 盖，在 培 养 瓶 瓶 壁上 标 明 品 种 名 称、接 种 日 期、接 种 人 等 信 息，放 入 培 养 室 培 养。培 养 室 温 度 控 制 在（2 5 1），光 照强 度 为 1 5 0 0 l x 3 0 0 0 l x，光 照 时 数 为 1 6 h/d。6 继 代 培 养在 诱 导 培 养 基 中 培 养 2 0 d 3 0 d 出 芽 后，用 已 灭 菌 的 接 种 剪，将 芽 高 1.0 c m 以 上 的 不 定 芽 剪 下，切割 成 带 1 个 芽 的 茎 段，转 接 至 继 代 培 养 基 中。生 长 2 0 d 3 0 d 后，将 继 代 培 养 基 中 获 得 的 不 定 芽，再 次 转接 至 新 配 制 的 继 代 培 养 基 中。此 后 定 期 将 继 代 培 养 基 中 的 不 定 芽 分 割、转 接，扩 大 不 定 芽 数 量。7 炼 苗当 不 定 芽 高 度 达 3 c m 以 上 时，先 将 培 养 瓶 置 于 温 度 在 2 0 3 0 的 温 室 进 行 闭 瓶 炼 苗 3 d，再 打 开 培养 瓶 盖 炼 苗 2 d，炼 苗 期 间 避 免 强 光 直 射 和 高 温 灼 伤 瓶 苗。8 移 栽容 器D B 1 3 1 0/T 2 5 1 2 0 2 14容 器 规 格 为 直 径 5.0 c m 6.0 c m、高 度 1 0.0 c m 1 2.0 c m 的 塑 料 营 养 钵 或 无 纺 布 育 苗 袋。基 质将 蛭 石 和 泥 炭 土 按 1:1 体 积 比 混 合 均 匀，装 入 容 器 备 用。基 质 消 毒移 栽 前 1 d 2 d 用 5 0 0 倍 8 0 0 倍 的 5 0%多 菌 灵 溶 液 浇 透。温 室 移 栽 及 管 理8.4.1 温 室 移 栽移 栽 时 间 在 3 月 4 月 进 行。用 自 来 水 清 洗 干 净 不 定 芽 基 部 的 培 养 基，剪 去 部 分 老 叶 及 基 部 的 愈 伤 组织，只 留 两 叶 一 心，将 不 定 芽 基 部 用 1 m g/m L 的 萘 乙 酸 溶 液 速 蘸 5 s 1 0 s，快 速 移 栽 到 营 养 钵 或 育 苗 袋中，并 浇 透 水。移 栽 时 注 意 轻 拿 轻 放 以 免 损 伤 不 定 芽，移 栽 后 7 d 内 用 塑 料 薄 膜 或 保 鲜 膜 覆 盖 以 保 湿。8.4.2 温 湿 度 控 制移 栽 后 保 持 温 室 温 度 在 2 3 2 8，空 气 湿 度 8 5%以 上。8.4.3 水 肥 管 理移 栽 7 d 1 4 d 后 去 除 薄 膜，浇 水 以 见 干 见 湿 为 原 则，保 证 基 质 不 缺 水 即 可。移 栽 苗 长 出 新 叶 后，每隔 7 d 1 0 d 喷 施 1 次 叶 面 肥，连 续 喷 3 次 4 次。8.4.4 病 虫 害 防 治病 虫 害 防 治 遵 照 G B/T 6 0 0 1 1 9 8 5 的 要 求 执 行。9 大 田 移 栽 及 管 理温 室 幼 苗 高 1 0 c m 以 上 时，浇 一 次 透 水，选 择 在 风 小、光 照 弱 的 天 气 的 傍 晚，去 除 营 养 钵 或 育 苗 袋，将 带 土 坨 的 幼 苗 按 株 距 2 0 c m、行 距 4 0 c m 移 栽 到 大 田。移 栽 后 浇 一 次 透 水，以 后 根 据 土 壤 水 分 状 况 及 时灌 水。前 期 可 追 施 氮 肥，中 后 期 适 当 增 加 磷 钾 肥 的 使 用，并 做 好 病 虫 害 防 治 及 人 工 除 草 和 松 土。1 0 苗 木 出 圃 标 准侧 根 数 量 4 条，侧 根 长 度 2 0 c m，当 年 生 苗 主 干 高 度 1 0 0 c m、地 径 0.4 c m、主 干 完 全 木 质 化。1 1 保 管、包 装 及 运 输按 照 G B 1 9 1 7 4 2 0 1 0 中 第 7 章 执 行。1 2 技 术 档 案 管 理按 照 G B/T 6 0 0 1 1 9 8 5 中 第 1 3 章 执 行。D B 1 3 1 0/T 2 5 1 2 0 2 15附 录 A（资 料 性）软 枣 猕 猴 桃 组 培 苗 培 养 基 配 方 表A.1 软 枣 猕 猴 桃 组 培 苗 培 养 基 配 方 表 见 表 A.1。表 A.1 软 枣 猕 猴 桃 组 培 苗 培 养 基 配 方 表成分名称 药品名称 诱导培养基m g/L 继代培养基m g/L大量元素N H4N O38 2 5 1 6 5 0K N O39 5 0 1 9 0 0M g S O4 7 H2O 1 8 5 3 7 0K H2P O48 5 1 7 0C a C l2 2 H2O 1 6 5 3 3 0铁盐F e S O4 7 H2O 2 7.8 2 7.8N a2 E D T A 3 7.2 3 7.2微量元素M n S O4 4 H2O 2 2.3 2 2.3H3B O36.2 6.2Z n S O4 7 H2O 8.6 5 8.6 5K I 0.8 3 0.8 3C u S O4 5 H2O 0.0 2 5 0.0 2 5N a2M o O4 2 H2O 0.2 5 0.2 5C o C l2 6 H2O 0.0 2 5 0.0 2 5有机物甘氨酸 2 2盐酸硫胺素 0.1 0.1盐酸吡哆醇 0.5 0.5烟酸 0.5 0.5肌醇 1 0 0 1 0 0碳源 蔗糖 3 0 0 0 0 3 0 0 0 0植物生长 调节剂6-B A 0.5 0.5Z T 0.5-凝固剂 琼脂 7 0 0 0 7 0 0 0p H 6.0 6.0注：F e S O47 H2O 应先与N a2-E D T A 配合成络合物，然后才与其他溶液混合。