猕猴桃雌雄种质分子身份证鉴定技术规程DB36／T 1415-2021.pdf

ICS 67.080.01 B 05 DB36 江 西 省 地 方 标 准 DB36/T 14152021 猕猴桃雌雄种质分子身份证鉴定技术规程 Identification of male and female germplasm of A c t i ni d i a by molecular identity card 2021-06-30发布 2022-01-01实施 江西省市场监督管理局 发 布 DB36/T 14152021 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 原理.1 5 试剂与试药.1 6 仪器设备.1 7 操作步骤.2 8 结果记录与判定.3 附录 A（资料性）主要试剂与试药.5 附录 B（资料性）主要仪器设备.7 附录 C（规范性）猕猴桃雌性种质特异性引物.8 附录 D（规范性）猕猴桃雄性种质特异性引物.11 附录 E（资料性）67份猕猴桃雌性种质分子身份证.14 附录 F（资料性）33份猕猴桃雄性种质分子身份证.16 DB36/T 14152021 II 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由江西省农业农村厅提出并归口。本文件主要起草单位：江西农业大学。本文件主要起草人：廖光联、徐小彪、黄春辉、钟敏、贾东峰、曲雪艳、吴茵、涂贵庆、朱壹、魏清江、辜青青、陈明。DB36/T 14152021 1 猕猴桃雌雄种质分子身份证鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了分子身份证鉴定猕猴桃（Actinidia）雌雄种质的术语和定义、原理、试剂与试药、仪器设备、检测及构建分子身份证方法。本文件适用于猕猴桃雌雄种质鉴定与分子身份证构建。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。NY/T 3639 中华猕猴桃品种鉴定 SSR分子标记法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 分子身份证 identity card 以特异性引物为探针，同猕猴桃细胞核DNA的酶切片段杂交，可以获得由多个位点上的等位基因组成的长度不等的杂交带，人为将同一位置条带在不同物种上的有无标记为1/0，构建成数字矩阵，同一物种间极少有两个品种（系）完全相同，故称为特异性分子身份证。3.2 相似度 similarity 供试品种分子身份证与对照分子身份证相似的程度。4 原理 利用CTAB法提取植株叶片DNA，与特异性引物混合后进行PCR仪扩增，并在丙烯酰胺凝胶进行分离和显现，采用人工读取条带的方式绘制1/0矩阵，构建成DNA分子身份证，最后统计供试品种和对照品种的相似度，根据相似度鉴别猕猴桃种质的真伪。5 试剂与试药 主要试剂与试药见附录A。DB36/T 14152021 2 6 仪器设备 主要仪器设备见附录B。7 操作步骤 7.1 样品制备 参照NY/T 3639执行。7.2 DNA 的提取 7.2.1 准备工作 水浴锅水浴加热至65，预热3%裂解液、洗液，两种液体使用前均需加入2%体积的-巯基乙醇（V/V）；-20预冷无水乙醇和75%乙醇（现配后预冷）。7.2.2 称样 称取0.10 g新鲜/硅胶干燥后的叶片样品于2 mL管子，磨样机磨成粉状。7.2.3 第一次洗涤 硅胶干燥后的叶片样品需要进行的步骤。向2mL管子中加入1 mL洗液，充分混匀，65水浴30 min，中间轻摇数次，使其充分混匀；随后10000 rpm/min 离心5 min。7.2.4 第二次洗涤 硅胶干燥后的叶片样品需要进行的步骤。弃上清液，向2 mL管子中加入1 mL洗液，充分混匀，65水浴30 min，中间轻摇数次，使其充分混匀；随后10000 rpm/min 离心5 min。7.2.5 裂解 弃上清液，向2 mL管子中加入1 mL CTAB裂解液，充分混匀，65水浴1 h以上，中间轻摇数次，使其充分混匀；冷却至室温，随后12000 rpm/min 离心10 min。7.2.6 第一次抽提 取上清液（可0.80 mL）于新的2 mL管子中，加入等体积抽提液1，摇床混匀10 min，随后12000 rpm/min离心10 min。7.2.7 第二次抽提 取上清液（可0.60 mL）于新的2 mL管子中，加入等体积抽提液2，摇床混匀10 min，随后12000 rpm/min离心10 min。7.2.8 沉淀 取上清液（可0.50 mL）于新的1.50 mL管子中，加入1/10体积NaAC，2.50倍体积的预冷的无水乙醇，-20沉淀30 min以上，随后4，10000 r rpm/min离心8 min。此步骤肉眼可见沉淀。7.2.9 漂洗 DB36/T 14152021 3 弃上清液，加入1 mL 75%无水乙醇，沉淀30 min。每隔30 min漂洗一次，共漂洗4次。7.2.10 干燥 打开盖子放入旋蒸仪，设定DAL模式，30，8 min，干燥至无液体即可（避免乙醇影响后续PCR），不可过度干燥。7.2.11 溶解 往每个管子中加入60 L RNA溶解酶（按RNase:TE缓冲液=3 l:1000 l配制）。4放置过夜后用超微分光光度计测定DNA质量。OD260/OD280的值在1.802.00时，表明DNA的纯度较好。测定后用TE缓冲液将DNA含量稀释至150 ng/l。7.3 PCR扩增 7.3.1 特异性引物 选用猕猴桃雌雄种质特异性引物（附录C、附录D）进行PCR扩增。7.3.2 扩增反应体系 包含2Taq PCR Mix 5 L；上下游引物各0.80 l；模板DNA 1 l；双蒸水2.40 l。7.3.3 扩增程序 94预变性3 min，94变性30 s，5262退火30 s，72延伸30 s，共28个34个循环，最后72延伸10 min于12保存。7.4 丙烯酰胺凝胶电泳 7.4.1 制胶 按顺序往150 mL烧杯加入双蒸水60 mL、5X TBE 20 mL、40%聚丙烯酰胺20 mL、APS 864 L、TEMED 76 L，搅拌均匀后灌入DNA序列分析电泳仪玻璃板中，排气泡后插入梳齿，凝固1 h后进行下一步。7.4.2 点样 拔出梳齿，用移液枪移取1 L PCR扩增产物，点入梳齿孔中；同时点入500 bp DNA marker及10 X Loading Buffer。7.4.3 跑胶 使用仪器为DYCZ-20G型DNA序列分析电泳仪，先50 V电压跑30 min，随后调为200 V，待10 X Loading Buffer 跑到接近玻璃板底部时结束。7.4.4 染色 采用快速银染法，将丙烯酰胺凝胶取下放入硝酸银溶液，浸染10 min。7.4.5 显影 从银染液中取出凝胶，用双蒸水冲洗干净后，放入显影液中显影，待条带全部显出，转入到清水中。DB36/T 14152021 4 8 结果记录与判定 8.1 结果记录 拍照记录并统计清晰的SSR条带，采用人工读带的方法，在Microsoft Excel中以二进制读带方式记录引物扩增的结果，同一位点上具有相同迁移率的条带记为1，无带记为0，记录位点位置（见附录E、附录F）。8.2 构建分子身份证 利用同一样品的不同引物条带读数绘制成1/0矩阵，构建成该品种的特异性分子身份证，如附录E、附录F所示。8.3 判定 根据相似度进行结果判定，相似度=（同一位点读数相同的数量/总位点数）*100%，相似度等于或大于99%，即可判定为在分子水平上是同一个样品。DB36/T 14152021 5 A A 附 录 A（资料性）主要试剂与试药 A.1 试剂-巯基乙醇，Tris，HCl，EDTA，NaOH，NaCl，PVP，CTAB，NaAC，无水乙醇，RNA裂解酶，琼脂糖，DNA核染液，Loading Buffer，硝酸银，甲醛，Na2CO3，2Taq PCR Mix，硼酸，过硫酸铵，丙烯酰胺，甲叉丙烯酰胺，TEMED。A.2 配制试剂（灭菌后使用）A.2.1 1 M Tris-HCl 称取12.11 g Tris，溶于水后定容至100 mL，用HCl调节pH为8。A.2.2 0.50 M EDTA 称取18.61 g EDTA，溶于水后定容至100 mL，用NaOH调节pH为8。A.2.3 洗液 1.46 g NaCl，25 mL 1 M Tris-HCl，10 mL 0.50 M EDTA，2 g PVP，溶于水后定容至100 mL。A.2.4 3%裂解液 称取3 g CTAB，8.19 g NaCl，10 mL 1 M Tris-HCl，4 mL 0.50 M EDTA，0.50 g PVP，溶于水后定容至100 mL。A.2.5 TE缓冲液 1 mL 1 M Tris-HCl，0.20 mL 0.50 M EDTA，溶于水后定容至100 mL。A.2.6 3 mol/L NaAC 称取40.82 g NaAC，溶于水后定容至100 mL。A.2.7 5X TBE Tris 54 g，硼酸27.50 g，20 mL EDTA，定容至1000 mL。A.2.8 10%过硫酸铵 过硫酸铵1 g溶于10 mL 双蒸水，4保存。A.2.9 40%聚丙烯酰胺 丙烯酰胺190 g，甲叉丙烯酰胺10 g，溶解后定容至500 mL。A.2.10 银染液 DB36/T 14152021 6 1 g硝酸银溶于1000 mL超纯水，定容至1000 mL即可，使用前加入2 mL甲醛。A.2.11 显影液 20 g NaOH，0.40 g Na2CO3，溶于1000 mL超纯水，定容至1000 mL即可。A.2.12 抽提液1 苯酚、氯仿、异戊醇按体积比为苯酚：氯仿：异戊醇=25:24:1配制。A.2.13 抽提液2 氯仿、异戊醇按体积比为氯仿：异戊醇=24:1配制。DB36/T 14152021 7 B B 附 录 B（资料性）主要仪器设备 B.1 电子分析天平 精确度万分之一。B.2 恒温水浴锅 最高温度100。B.3 离心机 最大离心速度12000 rpm/min。B.4 超微量紫外分光光度计 最大离心速度12000 rpm/min。B.5 PCR仪 常规。B.6 DNA序列分析电泳仪 220 V电压。B.7 摇床 最大转速200 rpm/min。B.8 旋蒸仪 常规。DB36/T 14152021 8 C C 附 录 C（规范性）猕猴桃雌性种质特异性引物 C.1 雌性种质特异性引物 雌性种质特异性引物见表C.1。表C.1 雌性种质特异性引物 引物 序列 退火温度 等位基因长度(bp)TGGCGACATGGTCTTCTTAG 27 TCCAAAGCATGCTCAACTTC 54 100150 CCAAGCTCATACACCCAATG 31 AGGTTGGCACTTGGAATAGG 57 200250 TTCCTTAATCCAGGGTCTCG 53 ACACAACAGATTGCAGGAGG 63 150200 GAGTCGGGAGCATAATTGGT 50 CGCATGGAAGGTCATAACAC 54 250300 GTGCTCCTCCGTCCATGTAT UDK97-408 CGTCCTCTCTTCGCCATTTA 64 100150 TGGTGTAAAGTCAAAAACAGCC UDK99-143 AGAAGATTTCATTGTCCTCCCT 59 100200 AAGAGCCATAGCTTATTCACCG UDK96-035 AAGTAAAGCCATTGTCATTGCA 60 100150 AACTAAGAAACGGGACCATTG 1 TATGTGGATGTCCCAGAAAAG 62 150200 CCCCTCATTGTAAAGCATCC 11 TTGTCACGGGCTTAGAATCC 62 150200 CCGTCTCAGCAGATGTCACTAT 15 GCAACTGCCCATAAGATTCC 52 150200 TACACCTGATGAGATGGACGAC 22 CCTGTGGCTGATGTTGAAAGT 54 200250 TCGAGTTACCTAGCTACTCCGC UDK96-040 CAAGGGAAGAAAATGTTGAACC 62 150200 GTAAGGTCATTTTTGCGAAAGG UDK96-053 TTTGTTGGGAGTAACGTGAGG 64 50100 TACGCAGTTTACTTCCTCTT A017 CATTCGGCACCACTTCTA 60.50 150200 A043 CCCATAGCCAACAACATC 59 150200 DB36/T 14152021 9 表C.1 雌性种质特异性引物(续)引物 序列 退火温度 等位基因长度(bp)CTTGACGCCTCTGAACAC TCCATTCCGCCCATCCTT A055 GTCCGACATTCTTGTGGTTCTG 60.50 100250 ATCTCCATCATCTCCACCTT A061 CAACGCCATCATTGTCCC 60 100150 GAAGCAACTCGCTACTAAG A069 AGCCTGTAACAACCCATT 60.50 100200 TTGCTCCAGTTTCCTTCT A080 TGCTATGGCACTCTATCC 60 150250 GAGCATACAGAGGGAAGA A103 ACTGGAGTGAAGGAGGGT 59 200300 CCTCATTCATTACCACCTCTT A105 ACACCGCTTCCGTCCATA 60.50 100200 CACCTGCTACACCGACAT A123 CCACAGCCGAAACCATAC 60.50 150300 ATACCGTGGACTTCATTC A124 ACATACCTTCAACGCTTC 60 150250 GTTTATTACACGCCTTCG A125 TGACAGCCCTCAACTACG 59 150200 CCCTATACCCACTCAATCA A138 TTCCACCTTCTTTCCATC 60 100250 ATGGCTTGACTGAGACTTG A167 TTCATCGTCGGTTGTAGC 58 150250 CTCCCTCGTAGCAGTTCA A186 CTCCAGCGATTCCTTCAC 60 100200 CCGCATCATAAGCCCAATC A191 TTGTCCACCGCCCACTTC 60 150300 ATACCCATCATCGGACAC A193 CTTCAAGCCCATTACCAC 61 150250 CGACTAAAATCTACAAGCAC EST-Ad01 GAAAACGAAATTAACACCA 62 200300 TTAAGATTGATCGGCACG EST-Ad03 CCTTCTGGATGAGGGTTT 61 250500 GTTAATTTGATCGGGATGG EST-Ad42 GAGGAGCTTGAGCTGCTAT 62 250400 ATACACTTGAAGCGCCGC UDK96-019 AAGCAGCCATGTCGATACG 57 100200 UDK96-028 TCCCCACACAACAACTCCTC 52 100200 DB36/T 14152021 10 表C.1 雌性种质特异性引物(续)引物 序列 退火温度 等位基因长度(bp)CATATGACCTGCACGTGC GGTTTGATCGGTCTTCGAAA UDK96-039 ATAAATGTGTGCCAGTGCGA 57 150200 GAGCGTAGAATGTGGCGG UDK97-420 CATTTGAAATGAGTCAAGCTGC 60.50 100150 AACGAAACAAAAGCCCTATTATC ST-Acd02 GCTTCAGATTCAGCCTCTGG 59 200300 TTCATCCCAATCCCTCATTC ST-Acd07 GACTTCTTCGTCGCCTCTG 58 200250 GATGGCTGACGAACAACA ST-Ad037 TCTGTCACGATCACCTCC 58 100200 CCACTCTTCGCCTCTCTTTCA UTH 03-04 AGTGGTTGTGTTGGGGTCTC 57 150200 DB36/T 14152021 11 D D 附 录 D（规范性）猕猴桃雄性种质特异性引物 D.1 雄性种质特异性引物 雄性种质特异性引物见表D.1。表D.1 雄性种质特异性引物 引物 序列 退火温度 等位基因长度(bp)TGGCGACATGGTCTTCTTAG 27 TCCAAAGCATGCTCAACTTC 54 100150 TTCCTTAATCCAGGGTCTCG 53 ACACAACAGATTGCAGGAGG 63 150200 GTGCTCCTCCGTCCATGTAT UDK97-408 CGTCCTCTCTTCGCCATTTA 64 100150 TGGTGTAAAGTCAAAAACAGCC UDK 99-143 AGAAGATTTCATTGTCCTCCCT 59 100200 AAGAGCCATAGCTTATTCACCG UDK 96-035 AAGTAAAGCCATTGTCATTGCA 60 100150 AACTAAGAAACGGGACCATTG 1 TATGTGGATGTCCCAGAAAAG 62 150200 GTTGTTGAGGTGATTGTTGATG 5 CAGTCAGCCAAGGACFAAGG 61 150200 ACTAACAGACAAAAACTGGGGG 13 ATGGAAGGAGATGGCGATG 58 200250 TTGAGGGCTTGATGAAAACC 14 GACGACGACGGAGATTACG 61 150200 CCGTCTCAGCAGATGTCACTAT 15 GCAACTGCCCATAAGATTCC 52 150200 TACACCTGATGAGATGGACGAC 22 CCTGTGGCTGATGTTGAAAGT 54 200250 GTAAGGTCATTTTTGCGAAAGG UDK96-053 TTTGTTGGGAGTAACGTGAGG 64 50100 DB36/T 14152021 12 表D.1 雄性种质特异性引物(续)引物 序列 退火温度 等位基因长度(bp)TACGCAGTTTACTTCCTCTT A017 CATTCGGCACCACTTCTA 60.50 150200 CCCATAGCCAACAACATC A043 CTTGACGCCTCTGAACAC 59 150200 TCCATTCCGCCCATCCTT A055 GTCCGACATTCTTGTGGTTCTG 60.50 100250 ATCTCCATCATCTCCACCTT A061 CAACGCCATCATTGTCCC 60 100150 GAAGCAACTCGCTACTAAG A069 AGCCTGTAACAACCCATT 60.50 100200 TTGCTCCAGTTTCCTTCT A080 TGCTATGGCACTCTATCC 60 150250 CCTCATTCATTACCACCTCTT A105 ACACCGCTTCCGTCCATA 60.50 100200 CACCTGCTACACCGACAT A123 CCACAGCCGAAACCATAC 60.50 150300 GTTTATTACACGCCTTCG A125 TGACAGCCCTCAACTACG 59 150200 CCCTATACCCACTCAATCA A138 TTCCACCTTCTTTCCATC 60 100250 ATGGCTTGACTGAGACTTG A167 TTCATCGTCGGTTGTAGC 58 150250 CTCCCTCGTAGCAGTTCA A186 CTCCAGCGATTCCTTCAC 60 100200 CCGCATCATAAGCCCAATC A191 TTGTCCACCGCCCACTTC 60 150300 ATACCCATCATCGGACAC A193 CTTCAAGCCCATTACCAC 61 150250 CGACTAAAATCTACAAGCAC ESTAD01 GAAAACGAAATTAACACCA 62 200300 TTAAGATTGATCGGCACG ESTAD03 CCTTCTGGATGAGGGTTT 61 250400 ESTAD42 GTTAATTTGATCGGGATGG 62 250400 DB36/T 14152021 13 表D.1 雄性种质特异性引物(续)引物 序列 退火温度 等位基因长度(bp)GAGGAGCTTGAGCTGCTAT ATACACTTGAAGCGCCGC UDK96-019 AAGCAGCCATGTCGATACG 57 100200 UDK96-039 GGTTTGATCGGTCTTCGAAA 57 150200 ATAAATGTGTGCCAGTGCGA UDK97-420 GAGCGTAGAATGTGGCGG 60.50 100150 CATTTGAAATGAGTCAAGCTGC UDK96-013 ACGTGACTTGGTTTTTGAAGG 55 150200 CACTCCGATCAGCTCTCCTC STACD02 AACGAAACAAAAGCCCTATTATC 59 200300 GCTTCAGATTCAGCCTCTGG STACD 07 TTCATCCCAATCCCTCATTC 58 200250 GACTTCTTCGTCGCCTCTG STAD037 GATGGCTGACGAACAACA 58 100200 TCTGTCACGATCACCTCC UTH 03-04 CCACTCTTCGCCTCTCTTTCA 57 150200 AGTGGTTGTGTTGGGGTCTC DB36/T 14152021 14 E E 附 录 E（资料性）67份猕猴桃雌性种质分子身份证 E.1 雄性种质特异性引物 67份猕猴桃雌性种质分子身份证见表E.1。表E.1 67 份猕猴桃雌性种质分子身份证 编号 品种 UDK96-035 FOR-13 EST-Ad42 UDK96-040 1 金 丰 000000000000000 00000000000 0000101000 0000000011100000 2 庐山香 000000000000000 00000000100 0000101000 0000010111101100 3 赣金 3 号 000000000000000 00000000000 0000000000 0000000001101000 4 宜黄 2 号 000000001100011 00101111111 1001111100 0010000011101010 5 苌金 1 号 000000000000000 00000000100 0000000000 0000000000001010 6 苌金 2 号 000000001001010 00001100111 0000000100 0000011111101010 7 苌金 4 号 000000001000011 00000110110 0000010100 0010000011100100 8 苌金 3 号 000000001001010 00110000100 1011110100 0001100011101010 9 武宁 2 号 000000000000000 00000001100 0000001000 0000000011001010 10 宜黄 1 号 000000001000010 00101000110 0000100100 0000011101001010 11 云海 2 号 000000001010010 00100000100 1000101100 0000001011001010 12 金 果 000000000000001 00000000000 0000100000 0000000011101010 13 金 艳 000000001001010 00111001100 0000101000 0000011111011010 14 井黄 1 号 000000001000010 00001100101 1000111100 0001010101011110 15 井黄 2 号 000000001001111 00001100101 1000111100 0000011101010000 16 井黄 3 号 000000001000000 00001100101 0000111100 0000010001001110 17 井黄 4 号 000000101101110 00001100101 0000111100 0000011001000010 18 奉黄 1 号 000000101101111 00101111101 1011111111 0011111101101010 19 奉黄 2 号 000001101001110 00001110100 0011111111 1000000011011011 20 奉黄 3 号 100000101101110 00110000100 1011111111 0001100001101010 21 奉黄 4 号 100000101001111 00000000100 0000111100 0000001010101011 22 宜黄 1 号 000000001001110 00111100110 0000000111 0010011111011010 23 宜黄 2 号 000000001100010 00100111111 0000111100 0000000010101010 24 武宁 1 号 000000000000010 00000000100 0000101000 0000000010100000 25 武宁 2 号 000000001010011 00001010101 1010111101 0001111111100000 26 武植 3 号 000000001010010 00011000100 1000111100 0000011000111000 27 武植 5 号 000000001001111 00000110001 1011011101 1011001011111111 28 山维 1 号 000000000000000 00000000000 1000100000 0000000000001100 29 云海 1 号 000000000000000 00110000100 0000111100 0011000011101110 DB36/T 14152021 15 表E.1 67份猕猴桃雌性种质分子身份证(续)编号 品种 UDK96-035 FOR-13 EST-Ad42 UDK96-040 30 金什1 号 000000001000010 00001100101 0000111100 0001000000001110 31 金 桃 000000001000010 00001100101 1000111100 0000001100011000 32 金 梅 000000001001010 00011100100 1011111111 0000011101101010 33 早 鲜 000000001001010 00010010101 0011111001 0110000001100101 34 魁 蜜 000000000000000 00000000000 0000111000 0000000000000000 35 翠 玉 000000000010000 00110001100 1001110100 1000011111110000 36 华 优 000000001001110 00110001100 0011110011 0000011111000000 37 金 桃 000000001000010 00001100101 0000010100 0000001100001000 38 红 华 000000001000011 00000000100 0000000100 0000000100010100 39 赣 红 000000000000000 00000000101 0000110100 0000000000000000 40 楚 红 000000001000010 00000000100 1000101100 0000011000100101 41 脆皮红香 000000001001110 00001110101 1000101100 0000000001100101 42 红 阳 000000001000010 00000000100 0000000000 0000000000010000 43 东 红 000000000000000 00000000100 0000000000 0000000000000000 44 奉野1 号 000000001000010 00001100100 1000111100 0000000000100101 45 红什2 号 000000000000001 00001000000 0000100100 0000000000000000 46 脐 红 000000001000010 00000000100 1000101100 0000000000010100 47 仙 红 000000000000000 00000000000 0000101100 0000000000000000 48 晚 红 000000000000000 00000000000 0000101000 0000000000000000 49 早 红 000000001000110 00000000100 0000000000 0000000000000000 50 金 魁 000000001000011 10110000100 0011101000 0000000011100000 51 徐 香 000000001100010 00110001100 1110000101 0000000011100000 52 翠 香 000000001000110 00000001100 0000101100 0000000001011111 53 米良1 号 000000001000110 00000000100 0011101100 0000000000110000 54 海沃德 000000001000000 00000000100 0000000000 0000000000000000 55 贵 长 000000000001010 00111000100 1100111100 0000011111100101 56 美实1 号 000000001000000 11100100100 0011001000 0000000001000000 57 武枣1 号 100000100000000 00010101100 0010001000 0000000001010000 58 长叶1 号 000000000000000 00000000000 0011001000 0000000000100000 59 华 特 100100101101110 00011000101 1110101011 0000000011111100 60 赣猕6 号 100100101101010 00011000101 1100101011 0111000011101000 61 麻毛4 号 011100101111010 00000000100 1100101011 0000000011101100 62 麻毛7 号 011100101111010 00000010100 1110101011 0000011111100000 63 赣绿2 号 100100101101111 00000010100 0010101000 0000000001001100 64 赣绿1 号 000100101101010 00000000100 1010101011 0111011111001100 65 麻毛13 号 100111101101011 00000010100 1011101011 0000011011101000 66 麻毛28 号 000111001101011 00000010100 1011101011 0000001001001000 67 低酚6 号 000101001000101 00000010100 1011101011 0000111001101100 DB36/T 14152021 16 F F 附 录 F（资料性）33份猕猴桃雄性种质分子身份证 F.1 雄性种质特异性引物 33份猕猴桃雄性种质分子身份证见表F.1。表F.1 33 份猕猴桃雄性种质分子身份证 编号 UDK96-053 UDK96-035 For13 UDK96-040 1 00011001010000 00011100000000000000 001110010110101010 01101100000000000000000 2 00011001010000 00010000000000000000 001110010110101010 01101100000000000000000 3 01010101000001 00101101100000001000 001110000010101110 01010000011001100000000 4 00100100000010 00101100100000001100 001010000010101100 01010000001000100000000 5 00111101000101 01101000000000000000 001010000010100000 01110000001100100010000 6 00011001010000 00011100000000000000 001111010110101010 01101100000100000010000 7 00110100000100 01000100000000000000 001110000010101110 00100000001100000010000 8 00110100000000 01000100000000000000 001110000010101110 00100000001100000010000 9 00100100000000 01000100000000000000 001110000010101110 00100000001100000010000 10 00011100000000 10011111000100100000 001010000000101000 01000000000111010000000 11 00100100000010 00101100100000001100 001010000010100000 01100000011010100000100 12 10010000100000 00001010101000000011 100110101000001011 10100100001100001010000 13 10010000100000 0000101010100000001