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ics ICS 97.195 Y 50 宣城市地方标准 DB3418 DB3418/T 0072019 毛笔笔锋 霉变的测 试方法 Test method for mould of writing brush 2019-03-20 发布 2019-04-20 实施 宣城市市场监督管理局 发布 DB3418/T 0072019 前 言 本标 准按 照 GB/T 1.1-2009 给出 的规 则起 草。本 标准 由安 徽省 文房 四宝标 准化 技术 委员 会提 出并归 口。本 标准 主要 起草 单位：宣城 市产 品质 量监 督检 验所。本标 准主 要起 草人：洪润、吴成、柳 叶、周万 鹏、童 伟。I DB3418/T 0072019 毛 笔笔锋 霉变的测 试方法 1 范围 本标准 规定 了毛 笔笔 锋霉 变的检 测方 法。本标准 适用 于毛 笔及 工艺 类似的 毛笔 笔 锋霉 变的 检测，不适 用其 他笔 类。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 1.1 标 准化 工作 导则 第1部分：标准 的结 构和 编写 GB 4789.2 食品 安全 国家标 准 食 品微 生物 学检验 菌落 总数 测定 3 设备和 材料 3.1 培养 箱：28 1。3.2 电子 天平：精 确度0.1 g。3.3 无菌 锥形 瓶：容量500 mL。3.4 无菌 吸管：1 mL、10 mL。3.5 无菌 试管：18 mm180 mm。3.6 旋涡 混合 器。3.7 无菌 平皿：直径90 mm。3.8 恒温 水浴 箱：46 1。3.9 显微 镜：10 倍100 倍。3.10 移 液枪 及移 液吸 管：100 L1 000 L、1 000 L10 000 L。4 培养基 和试 剂 4.1 蒸馏 水。4.2 生理 盐水：见 附录A.1。4.3 马 铃薯 葡萄 糖琼 脂：见附录A.2。4.4 孟加 拉红 琼脂：见 附录A.3。4.5 磷酸 盐缓 冲液：见 附录A.4。5 检验程 序 霉菌计 数法 检验 程序 见图1。1 DB3418/T 0072019 图 1 霉菌 平板 计数 法的 检 验程序 6 操作步 骤 6.1 样品 的稀 释 6.1.1 用无菌 剪刀 剪取至少3支待测 毛笔 笔锋，要求剪 取全部 毛笔笔 锋进行 混匀，称取 样品1 g，精确 至0.1 g，加入9 mL 无菌稀释 液(生 理盐 水或 磷酸 盐缓 冲液)，在 旋涡 混合 器中充分混合1 min2 min，制成1：10的样 品匀 液。6.1.2 用移 液枪 吸取1 mL 1：10样品 匀液 注入 含有9 mL 无菌稀释液 的试管 中，在旋 涡 混合 器上 混匀，此液为1：100 的样 品匀 液。6.1.3 按6.1.2操作 步骤，制备10倍递 增系 列稀 释样 品匀 液。每 递增 稀释 一次，换用1 支1 mL 无菌吸管。6.1.4 选择2 个3 个适宜稀 释度的样品匀 液，在进 行10 倍递增稀释的 同时，每 个 稀释度分别吸 取1 mL 样品匀液 于2 个无 菌平 皿内。同时分 别取1 mL 无菌稀释 液加入2个无 菌平 皿作 空白对 照。6.1.5 及时将冷却至46 的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂(可放置于46 土1 恒温水浴箱中保温)倾注 平皿 中，倾 注体 积为20 mL25 mL，同时均匀 转 动平 皿使 其混 合均 匀。将其 放 置于 水平 台面 待培养基 完全 凝固。6.2 培养 培养基 凝固 后，正置 平板，放 置于28 士1 培养箱 中 培养，观察 并记 录培 养至第120 h的 结果。6.3 霉菌 菌落 计数 用肉眼 或放大 镜观 察，记 录稀释 倍数 和相 应的 霉菌 菌落数。以 菌落 形成 单位(colony-forming units，CFU)表示。2 DB3418/T 0072019 选取菌 落数 在10 CFU150 CFU 的平板，根 据菌 落形 态计数 霉菌。霉 菌蔓 延生 长覆盖 整个 平板 记录为菌落 蔓延。7 结果与 报告 7.1 结果 7.1.1 计 算同 一稀 释度 的两个 平 板菌 落数 的平 均值，再将平 均值 乘以 相应 稀释 倍数。7.1.2 若 有两 个稀 释度 平板上 菌 落数 均在10 CFU150 CFU 之间，则按 照GB 4789.2的相 应规 定进 行计 算。7.1.3 若 所有平板 上菌落数 均大于150 CFU，则对稀 释度最高的 平板进行 计数，其他平板 可记录为 多不可计，结果 按平 均菌 落数 乘以最 高稀 释倍 数计 算。7.1.4 若所 有平 板上 菌落 数 均小于10 CFU，则应 按稀 释度最 低的 平均 菌落 数乘 以稀释 倍数 计算。7.1.5 若 所有 稀释 度平 板均无 菌 落生 长，则以 小于1 乘以 最 低稀 释倍 数计 算。7.1.6 若 所有 稀释 度的 平板菌 落 数均 不在10 CFU150 CFU 之间，其 中一 部分 小于10 CFU 或 大于150 CFU 时，则以 最接 近10 CFU 或150 CFU 的平 均菌 落数 乘以 稀释倍 数计 算。7.2 报告 7.2.1 菌落 数按“四舍 五入”原 则修 约。菌落 数在10 以内时，采用 一位 有效 数字 报 告；菌落 数在10100之间时，采用 两位 有效 数字 报 告。7.2.2 菌落数 大于 或等于100 时，前第3位数 字 采用“四舍五 入”原则 修约 后，取前2位数 字，后 面用0代替 位 数来 表示 结果；也可用10的指 数形 式来 表示，此 时 也按“四舍 五入”原则修 约，采用 两位 有效 数字。7.2.3 若空 白对 照平 板上 有 菌落出 现，则此 次检 测结 果无效。7.2.4 称 重取 样以CFU/g 为单位 报告。3 DB3418/T 0072019 附 录 A（规范 性附 录）培养基 和试 剂 A.1 生理 盐水 A.1.1 成分 氯化钠 8.5 g 蒸馏水 1 000 mL A.1.2 制法 氯化钠 加入 1 000 mL 蒸 馏水中，搅拌 至完 全溶 解，分 装后，121 灭菌 15 min，备用。A.2 马铃 薯葡 萄糖 琼脂 A.2.1 成分 马铃薯(去皮 切块)300 g 葡萄糖 20.0 g 琼脂 20.0 g 氯霉素 0.1 g 蒸馏水 1 000 mL A.2.2 制法 将 马 铃薯 去皮 切块，加 1 000 mL 蒸馏水，煮沸 10 min20 min。用纱 布过滤，补加蒸 馏水 至 1 000 mL。加入葡萄糖 和琼 脂，加热溶 解，分装 后，121 灭菌 15 min，备用。A.3 孟加 拉红 琼脂 A.3.1 成分 蛋白胨 5.0 g 葡萄糖 10.0 g 磷酸二 氢钾 1.0 g 硫酸镁(无水)0.5 g 琼脂 20.0 g 孟加拉 红 0.033 g 氯霉素 0.1 g 蒸馏水 1 000 mL A.3.1 制法 上 述 各成 分加 入蒸 馏水 中，加 热溶 解，补足 蒸馏 水至 1 000 mL，分装后，121 灭菌 15 min，避光保存 备用。A.4 磷酸 盐缓 冲液 A.4.1 成分 磷酸二 氢钾 34.0 g 4 DB3418/T 0072019 蒸馏水 500 mL A.4.2 制法 贮存液：称取 34.0 g 的磷 酸二氢 钾溶 于 500 mL 蒸馏水中，用大 约 175 mL 的 1 mol/L 氢氧化 钠溶液调 节 pH 至 7.2土0.1，用 蒸馏 水稀 释至 1 000 mL 后贮存于冰 箱。稀释液：取贮 存液 1.25 mL，用蒸馏 水稀释 至 1 000 mL，分装于适 宜容 器中，121 高压 灭菌 15 min。_ 5
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