林木种子检验技术规程DB22／T 838-2018.pdf

ICS 65.020.40 B 61 备案号：60771-2018 DB22 吉林省地方标准 DB22/T 8382018 代替 DB22/T 838-1995林木种子检验技术规程 The rule for forest tree seed testing 2018-07-30发布 2018-08-30实施吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 8382018 I 目 次 前言.I 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 抽样.1 5 检验方法.1 5.1 净度测定.1 5.2 重量测定.1 5.3 发芽测定.1 5.4 生活力测定.2 5.5 优良度测定.2 5.6 含水率测定.2 5.7 种子健康状况测定.2 5.8 X射线检验.2 5.9 SSR 标记检验.2 6 质量检验证书.2 附录A（规范性附录）种批和样品重量表.3 附录B（规范性附录）种子检验技术条件表.7 附录 C（规范性附录）生活力的四唑测定技术条件.10 附录D（规范性附录）优良种子鉴别条件.18 附录 E（规范性附录）SSR 标记检验.21 DB22/T 8382018 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。本标准代替 DB22/T 8381995 林木种子检验技术规程。本标准与 DB22/T 8381995相比,除编辑性修改外,主要技术变化如下：增加了术语和定义（见 3）；删除了原标准与国标相同的 22 个树种，增加了我省造林绿化的重要乡土树种、绿化灌木树种和经济林树种增加 56 个（见附录 A）；发芽测定技术条件删除了原标准与国标相同的 21 个树种，增加了 23 个树种（见附录 B）；染色试验技术条件删除了原标准与国标相同的 11 个树种，增加了 22 个树种（见表 C.1）；优良度测定技术条件删除了原标准与国标相同的 10 个树种，新增 23 个树种（见附录 D）；增加了 SSR标记检验（见附录 E）。本标准由吉林省林业厅提出并归口。本标准起草单位：吉林省林木种苗管理站。本标准主要起草人：李树春、王福维、肖振海、李晓光、蔡群、陶晶、曹广威、王江、胡佰策、任宣百、王芳、姜国云、黄立军、郎凤君、王聪慧、刘克俭、焉琪、孟军、段威、王景源、张济慈。本标准历次发布情况为:DB22/T 8381995。DB22/T 8382018 1 林木种子检验技术规程 1 范围 本标准规定了林木种子检验的抽样、检验方法、质量检验证书的内容和格式。本标准适用于林木种子检验。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 2772-1999 林木种子检验规程 3 术语和定义 GB/T 2772-1999 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1 分子标记 molecular mark 能反映生物个体或种群间基因差异的特异性DNA片断。3.2 SSR 标记 SSR mark 一种以特异PCR为基础的分子标记技术，也称微卫星DNA，是一类由几个核苷酸（一般1个6个）为重复单位组成的长达几十个核苷酸的串联重复序列。4 抽样 4.1 按 GB/T 2772-1999 规定执行。4.2 GB/T 2772-1999 未提及的树种按附录 A 规定执行。5 检验方法 5.1 净度测定 按 GB/T 2772-1999 规定执行。5.2 重量测定 按 GB/T 2772-1999 规定执行。5.3 发芽测定 5.3.1 按 GB/T 2772-1999 规定执行。DB22/T 8382018 2 5.3.2 GB/T 2772-1999 未提及的树种见附录 B。5.4 生活力测定 5.4.1 按 GB/T 2772-1999 规定执行。5.4.2 GB/T 2772-1999 未提及的树种见附录 C。5.5 优良度测定 5.5.1 按 GB/T 2772-1999 规定执行。5.5.2 GB/T 2772-1999 未提及的树种见附录 D。5.6 含水率测定 按 GB/T 2772-1999 规定执行。5.7 种子健康状况测定 按 GB/T 2772-1999 规定执行。5.8 X射线检验 按 GB/T 2772-1999 规定执行。5.9 SSR标记检验 检验方法见附录 E。6 质量检验证书 按 GB/T 2772-1999 规定执行。DB22/T 8382018 3 附 录 A（规范性附录）种批和样品重量表 种批和样品重量表见表 A.1。表A.1 种批和样品重量表 样品最低重量 g 顺序号 树 种 种批的最大重量 kg 送检样品 净度分析测定样品 1 板栗 Castanea mollissima BL.10000 300粒 300粒 2 白榆 Ulmus pumilal L.250 60 15 3 刺槐 Robinia pseudoacacia L.1000 200 100 4 赤松 Pinus densiftora Sieb.et Zucc.1000 60 25 5 臭松 Adiessibirica ledeb 1000 40 20 6 长白松 Pinus sylvestriformis 1000 60 25 7 枸杞 Lycium chinense Mill.250 15 15 8 长白落叶松 Larix olgensis Henry 1000 35 15 9 红皮云杉 Picea koraiensis Nakai 1000 60 15 10 红松 Pinus koraiensis Sieb.et Zucc.3500 1200 1000 11 胡枝子 Lespedeza bicolor Turcz.250 60 25 12 黄波罗 Phellodendron amurense Rupr.1000 85 50 13 百花花楸 Sorbus pohuashanensis 250 50 9 14 水榆花楸 Sorbus alnifolia(Sieb.et Zucc.)K.Koch 250 50 9 15 白桦 Betula platyphylla Suk.250 6 1 DB22/T 8382018 4 样品最低重量 g 顺序号 树 种 种批的最大重量 kg 送检样品 净度分析测定样品 16 核桃楸 Juglans mandshurica Maxim.10000 300 300 17 花棒（细枝岩黄蓍）Hedysarum scoparium 1000 200 100 18 日本落叶松 Larix kaempferi(Lamb.)Carr.1000 35 15 19 杉松（沙松）Abies holophylla Maxim 1000 250 150 20 沙棘 Hippophae rhamnoides Linn.1000 85 35 21 桑树 Morus alba L.250 20 5 22 水曲柳 Fraxinus mandshurica Rupr.1000 400 200 23 花曲柳 Fraxinus rhynchophylla Hance 1000 200 100 24 山荆子（山丁子）Malus baccata(L.)Borkh.1000 180 90 25 山梨 Pyrus ussuriensis Maxim.1000 180 90 26 山里红 Crataegus pinnatifida var.major N.E.Brown 1000 250 100 27 山杏 Armeniaca sibirica(L.)Lam.5000 500粒 500粒 28 文冠果 Xanthoceras sorbifolium Bunge 5000 500粒 500粒 29 小叶锦鸡儿 Caragana microphylla Lam.1000 200 100 30 鱼鳞云杉 Picea jezoensis var.microsperma 1000 40 15 33 山杨 Populus davidiana 250 5 2 34 大青杨 Populus ussuriensis Kom.250 5 2 35 小叶杨 Populus simonii Carr 250 5 2 42 青海云杉 Picea crassifolia Kom.1000 60 15 DB22/T 8382018 5 样品最低重量 g 顺序号 树 种 种批的最大重量 kg 送检样品 净度分析测定样品 43 苹果属 Malus Mill.1000 44 李属 Prunus L.45 茶条槭 Acer ginnala Maxim.1000 100 50 46 色木槭 Acer mono Maxim.1000 850 400 47 假色槭 Acer pseudo-sieboldianum(Pax.)Kom1000 100 50 48 青楷槭 Acer tegmentosum Maxim.1000 200 100 49 梓树 Catalpa ovata G.Don.250 20 5 50 复叶槭 Acer negundo L.1000 200 100 51 山楂 Crataegus pinnatifida Bunge 1000 200 100 52 五味子 Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.1000 100 50 53 山槐 Maackia amurensis Rupr.et Maxim.1000 100 50 54 紫丁香 Syringa oblate Lindl.1000 30 15 55 暴马丁香 Syringa reticulata var.mandshurica(Maxim.)Hara 1000 30 15 56 小叶丁香 Syringa microphylla Diels 1000 30 15 57 红瑞木 Cornus alba L.1000 100 50 58 接骨木 Sambucus williamsii Hance 250 30 10 59 金银木 Lonicera maackii(Rupr.)Maxim.1000 40 20 60 东北扁核木 Prinsepia sinensis Oliv.ex Beam 5000 2000 1000 61 鸡树条荚蒾 Viburnum opulus Linn.var.calvescens1000 250 150 DB22/T 8382018 6 样品最低重量 g 顺序号 树 种 种批的最大重量 kg 送检样品 净度分析测定样品 62 卫矛 Euonymus alatus(Thunb.)Sieb.1000 100 50 63 朝鲜崖柏 Thuja koraiensis Nakai 250 30 5 64 钻天柳 Chosenia arbutifolia(Pall.)A.Skv.250 5 2 65 蒙古黄榆 Ulmus macrocarpa var.mongolica 1000 30 15 66 白刺 Nitraria tangutorum Bor.1000 400 200 67 枫桦 Betula costata Trautv 250 10 1 68 春榆 Ulmus davidiana var.japonica Sarg.1000 30 15 69 裂叶榆 Ulmus laciniata(Trautv.)Mayr.1000 30 15 70 毛赤杨 Alnus sibirica var.hirsute(Turcz.)Koidz.250 5 1 71 柳叶绣线菊 Spiraea salicifolia L.250 5 1 72 珍珠绣线菊 Spiraea blumei G.Don 250 5 1 73 刺五加 Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxim.)Harms 1000 100 50 74 珍珠梅 Sorbaria sorbifolia(L.)A.Br.250 5 1 75 龙牙樬木 Aralia elata(Miq.)Seem.250 5 1 76 柽柳 Tamarix chinensis Lour.250 5 1 77 紫椴 Tilia amurensis Rupr.1000 850 350 78 糠椴 Tilia mandshutrca Rupr.et Maxim.1000 1000 500 DB22/T 8382018 7 附 录 B（规范性附录）种子检验技术条件表 发芽测定技术条件见表 B.1。表 B.1 发芽测定技术条件表 顺序号 树种 温度 初次计数 天 末次计数天 发芽床 备注 1 板栗 Castanea mollissima BL.2025 12 35 沙 0.5%KMnO4消毒20 min，45 浸种48 h 2 白榆 Ulmus pumilal L.2025 5 7 纸 3 刺槐 Robinia pseudoacacia L.2030 7 14 纸 始温85 90 水浸种24 h，余硬粒再处理1次2次 4 赤松 Pinus densiftora Sieb.et Zucc.2025 5 8 纸 每天光照8 min 5 臭松 Adiessibirica ledeb 2030 9 14 纸 冷冻25天 6 长白松（美人松）Pinus sylvestriformis 2025 5 8 纸 始温45 水浸种24 h7 枸杞 Lycium chinense Mill.20 7 21 纸 8 长白落叶松 Larix olgensis Henry 25 14 21 纸 始温45 水浸种24 h9 红皮云杉 Picea koraiensis Nakai 20，253014 21 纸 始温45 水浸种24 h10 胡枝子 Lespedeza bicolor Turcz.2025 3 5 纸 去掉果皮后擦破种皮，水浸24 h 11 白桦 Betula platyphylla Suk.2030 7 14 纸 12 山杨 Populus davidiana 2030 7 14 纸 13 大青杨 Populus ussuriensis Kom.2030 7 14 纸 14 小叶扬 Populus simonii Carr 2030 7 14 纸 15 梓树 Catalpa ovata G.Don.2030 3 7 纸 光照8 min DB22/T 8382018 8 顺序号 树种 温度 初次计数 天 末次计数天 发芽床 备注 16 山槐 Maackia amurensis Rupr.et Maxim.2030 7 14 纸 始温85 90 水浸种24 min，余硬粒再处理1次2次 17 紫丁香 Syringa oblate Lindl.2025 9 22 纸 18 暴马丁香 Syringa reticulata var.mandshurica(Maxim.)Hara 2025 9 22 纸 1 5 层积60天，10 20，层积10天 19 小叶丁香 Syringa microphylla Diels 2025 9 22 纸 20 钻天柳 Chosenia arbutifolia(Pall.)A.Skv.2025 1 4 纸 21 蒙古黄榆 Ulmus macrocarpa var.mongolica 25 15 30 纸 22 枫桦 Betula costata Trautv 2030 7 14 纸 23 春榆 Ulmus davidiana var.japonica Sarg.25 5 7 纸 24 裂叶榆 Ulmus laciniata(Trautv.)Mayr.25 5 7 纸 25 混沙处理 25 毛赤杨 Alnus sibirica var.hirsute(Turcz.)Koidz.30 4 6 纸 26 柳叶绣线菊 Spiraea salicifolia L.20 5 10 纸 27 珍珠绣线菊 Spiraea blumei G.Don 20 5 10 纸 28 珍珠梅 Sorbaria sorbifolia(L.)A.Br.25 7 10 纸 29 柽柳 Tamarix chinensis Lour.2530 2 4 纸 30 花棒 Hedysarum scoparium Fisch et Mey.25 14 21 纸 始温45 水浸种24 h，去掉外种皮 DB22/T 8382018 9 顺序号 树种 温度 初次计数 天 末次计数天 发芽床 备注 31 日本落叶松 Larix kaempferi(Lamb.)Carr.20 14 21 纸 1 5 层积10天15天 32 杉松（沙松）Abies holophylla Maxim 2030 10 28 纸 33 沙棘 Hippophae rhamnoides Linn.25 10 19 纸 始温45 水浸种24 h34 桑树 Morus alba L.30 7 21 纸 35 小叶锦鸡儿 Caragana microphylla Lam.25 10 21 纸 36 鱼鳞松 Picea jezoensis Carr.2030 8 15 纸 37 油松 Pinus tabulaeformis Carr.25 10 21 纸 始温45 水浸种24 h38 栎属 Quercus spp.25 14 28 沙 39 樟子松 Pinus sylvestris var.mongolica Litv.25 10 18 纸 40 紫穗槐 Amorpha fruticosa L.25 7 15 纸 去外种皮，始温60 水浸种24 h 41 白杄 Picea meyeri Rehd.et wils.25 9 19 纸 42 青杄 Picea wilsonii Mast.2025 10 21 纸 43 青海云杉 Picea crassifolia Kom.25 10 21 纸 始温45 水浸种24 h44 朝鲜崖柏 Thuja koraiensis Nakai 25 14 28 纸 温水45 浸种48 h DB22/T 8382018 10 附 录 C（规范性附录）生活力的四唑测定技术条件 发芽测定技术条件见表C.1。表 C.1 生活力的四唑和靛蓝测定技术条件表 预处理 四唑染色测定 备注 顺序号 树种 方式、时间 染色前的准备 浓度%时间 h 鉴定的 准备 不染色的最大面积；靛蓝染色的最大面积。1 板栗 Castanea mollissima BL.温水浸48 h 取“胚方”0.51.0 34 1/4胚方子叶末端 2 刺槐 Robinia pseudoacacia 用80 始温水浸24 h 0.51.0 23 1/4子叶末端 4 红松 Pinus koraiensis Sieb.et Zucc.水浸48 h 除去种皮 0.51.0 2024 1）纵切种子使胚与胚乳露出；2）剥出种仁 无，包括胚乳 5 水曲柳 Fraxinus mandshurica Rupr.除去果皮及翅，温水浸48 h 避开胚中轴纵切种子，取出胚 0.51.0 2030 纵切种子 1/4顶端部分 6 山杏 Armeniaca sibirica(L.)Lam.打开核，取出种子，温水浸18 h 除去种皮，浸水，每小时换水一次，至少浸5h 0.51.0 34 将子叶展开 胚根尖端，1/3子叶顶端部分 7 文冠果 Xanthoceras sorbifolia Bunge 用浓硫酸浸种3，再用温水浸48 h 除去种皮 0.51.0 810 1/4子叶末端 8 白刺 Nitraria tangutorum Bor.60 温水浸泡24 h 去皮取胚 1.0 24 无 混沙层积01540天DB22/T 8382018 11 9 刺五加 Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxim.)Harms 温水浸种48 h 纵切 0.51.0 24 纵切种子 无 10 茶条槭 Acer ginnala Maxim.(A.theiferum Fang)温水浸18；3 5 预冷冻1014天天从果翅末端将果实切去1/60.51.0 2448 从果皮和种皮中取出胚 胚根尖端、子叶末端小面积坏死 11 接骨木 Sambucus williamsii Hance 温水浸种48 h 纵切 0.51.0 24 纵切种子成两片 无 12 红瑞木 Cornus alba L.去核温水24 h 纵切 0.51.0 2448 纵切种子成两片 无 13 龙牙樬木 Aralia elata(Miq.)Seem.温水浸种48 h 0.51.0 24 纵切种子成两片 无 14 紫椴 Tilia amurensis Rupr.除去果皮 切去黑斑及一薄片胚乳 0.51.0 2428 沿胚乳纵切，剥开外壳，轻轻挤压种子，使胚露出 无，在胚乳的表面上有微小坏死则除外 15 糠椴 Tilia mandshutrca Rupr.et Maxim.除去果皮 切去黑斑及一薄片胚乳 0.51.0 2428 沿胚乳纵切，剥开外壳，轻轻挤压种子，使胚露出 无，在胚乳的表面上有微小坏死则除外 16 金银木 Lonicera maackii(Rupr.)Maxim.温水48 h 纵切 0.51.0 2448 纵切种子成两片 无 DB22/T 8382018 12 17 东北扁核木 Prinsepia sinensis Oliv.ex Beam 去核 0.51.0 24 纵切种子成两片 无 18 鸡树条荚蒾 Viburnum opulus Linn.var.calvescens 温水浸48 h，沿纵轴切取有胚的一半染色剥去种皮 0.51.0 69 取出胚 无 19 卫矛 Euonymus alatus(Thunb.)Sieb.温水浸18 h 1）从顶端横切1/3；2）将胚乳纵切成两片，打开胚腔 0.51.0 2448 纵切胚乳，露出种胚 无，包括胚乳 20 五味子 Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.温水浸48 h 纵切成两片 0.51.0 24 纵切胚乳，露出种胚 无，包括胚乳 21 山楂 Crataegus pinnatifida Bunge 温水浸18 h 从末端切去1/3 0.5-1.0 1024 取出胚 胚根尖端，1/3子叶顶端部分，如在表面则为1/2 22 核桃楸 Juglans mandshurica Maxim.除去果皮及翅，温水浸48 h，冷水浸48 h 避开胚中轴纵切种子，取出胚，取“胚方”0.2 0.51.02030 34 纵切种子1/4顶端部分 1/4胚方子叶末端 23 李属 Prunus L.打开核，取出种子温水浸18 h 除去种皮，浸水，每小时换水一次，至少浸5 h 0.51.0 412 将子叶展开 胚根尖端，1/3子叶顶端部分 DB22/T 8382018 13 24 黄波罗（黄蘖）Phellodendron amurense Rupr.温水浸24 h 除去种皮 0.2 23 纵切种子使胚与胚乳露出；剥出种仁无，包括胚乳 25 百花花楸 Sorbus pohuashanensis 温水24 h 纵切 0.5 24 纵切种子取胚 无，包括胚乳 26 水榆花楸 Sorbus alnifolia(Sieb.et Zucc.)温水24 h 纵切 0.5 24 纵切种子取胚 无，包括胚乳 27 花曲柳 Fraxinus rhynchophylla Hance 除去果皮及翅，温水浸48 h 避开胚中轴纵切种子，取出胚 0.51.0 2030 纵切种子 1/4顶端部分 28 女贞 Ligustrum lucidum Ait.温水浸18 h 从末端1/4横切沿两边各纵切去一片 0.51.02024 1824 1)纵切通过胚和胚乳；2）除去种皮 无，包括胚乳 29 苹果属 Malus Mill.温水浸18 h 从末端切去1/3 0.51.0 2024 取出种胚胚根尖端，1/3子叶顶端部分，如在表面则为1/2 30 紫杉（东北红豆杉）Taxus cuspidata Sieb.et Zucc.温水浸18 h 1）末端1mm横切（包括一小块胚乳）；2）胚旁纵切0.51.0 2448 纵切胚乳，使胚乳露出 无，包括胚乳 DB22/T 8382018 14 31 山荆子（山丁子）Malus baccata(L.)Borkh.温水浸2448 h 从末端切去1/3，剥种仁 0.51.0 20 取出种胚胚根尖端，1/3子叶顶端部分，如在表面则为2/3 32 山梨 Pyrus ussuriensis Maxim.温水浸18 h 从末端切去1/3 0.51.0 1624 使胚露出胚根尖端，1/3子叶顶端部分 33 山里红 Crataegus pinnatifida var.major N.E.Brown 温水浸18 h 从末端切去1/3 0.51.0 1024 使胚露出胚根尖端，1/3子叶顶端部分，如在表面则为1/2 DB22/T 8382018 15 四唑染色示意图见表 C.2。表 C.2 四唑染色鉴定示意图 序号 树种及其种子染色示意图 说明 1 梓树 有生活力者：a）胚全部染色；b）胚根、胚轴染色，子叶3/4以上染色。2 女贞 有生活力者：a）胚全部染色；b）胚根、胚轴染色，子吉少量未染色；c）胚根和子叶均少量未染色。3 胡桃楸 有生活力者：a）胚全部染色；b）胚根、胚轴染色，子叶小面积未染色；c）胚根、胚轴染色，子叶散点状未染色。4 松属 有生活力者：胚乳、胚全部染色，仅有少部分胚乳染色较淡 5 槭树类 有生活力者：a）胚全部染色卜 b）胚根染色，子叶大部分染色。6 板栗 有生活力者：胚 根、下 胚轴和子叶完全染色，或子叶少部分未染色。DB22/T 8382018 16 序号 树种及其种子染色示意图 说明 7 水曲柳 有生活力者：胚根、胚轴、子叶均染色，或子叶少部分未 染 色。8 核桃楸 有生活力者：胚根、下胚轴、子叶均染色，或子叶少部分 未染 色。9 枸杞 有生活力者：a)胚 全 部染色；b)胚 根 染色，子叶少许未染色。10 黄波罗（黄檗）有生活力者：a)胚全部染色；b)胚根染色，子叶大部分染色。11 山杏 有生活力者：胚根、胚轴、子叶均染色.或子叶少部分未染色。DB22/T 8382018 17 序号 树种及其种子染色示意图 说明 12 山槐 有生活力者：a)胚根、下胚轴、子叶均染色；b)胚根、下胚轴全部染色，子叶少部分未染 色 或 部 分染色较淡。13 椴树 有生活力者；a)胚根、子叶全部染色；b)胚根染色，子叶大部分染色。14 文冠果 有生活力者：胚根、子叶均染色，或子叶少部分未染色。DB22/T 8382018 18 附 录 D（规范性附录）优良种子鉴别条件 优良种子鉴别见表 D.1。表 D.1 优良种子鉴别表 顺序号 树种 优良种子 1 杉松(沙松)Abies.holophylla Maxim.种粒饱满，胚乳、胚白色 2 落叶松(兴安落叶松)Lari gmelinii(Rupr.)Kuzen 种子腹面褐色，背面浅褐色，有光泽，胚、胚乳乳白色，饱满，有弹性 3 文冠果 Xanthoceras sorbifolium Bunge 种粒饱满，有光泽，胚白色 4 糠椴 Tilia mandshutrca Rupr.et Maxim.种粒饱满，干种解剖时，胚黄色，胚乳黄白色；浸种后解剖，胚淡黄色，胚乳白色；子叶舒展 5 紫椴 Tilia amurensis Rupr.种粒饱满，种皮深褐色；种仁淡黄白色，有弹性 6 槐树 Sophora japonica Linn.种粒饱满，子叶浅绿色，胚根黄色 7 刺槐 Robinia pseudoacacia Linn.种粒饱满，发育正常；种皮黑褐色或棕褐色，有光泽；子叶、胚根均为淡黄色 8 山杏 Armeniaca sibirica(L.)Lam.ansu Maxim.子叶乳白色，饱满，坚硬，胚根比子叶色白 9 小叶杨 Populus simonii Carr.种粒饱满，子叶白色 DB22/T 8382018 19 顺序号 树种 优良种子 10 黄波罗 Phellodendron amurense Rupr.种子黑褐色，饱满，有光泽；胚、胚乳均白色，有弹性，或胚淡黄色 11 山荆子 Malus baccata(L.)Borkh.种皮 有光泽，子叶、胚白色，饱浦；浸种后种仁白色，有新鲜感，质硬脆 12 枸杞 Lycium chinense Mill.种粒较饱满，胚、胚乳均白色 13 女贞 Ligustrum lucidum Alt.种粒饱满，胚、胚乳均白色 14 胡枝子 Lespedeza bicolor Turcz.叶褐色，饱满；种仁黄白色，饱满 15 核桃楸 Juglans mandshurica Maxim.内种皮淡黄色.有光泽；子叶淡黄白色，饱满，有弹性，具香味 16 沙棘 Hippophae rhamnoides Linn.胚根浅黄色，子叶乳白色，饱满，有弹性 17 花棒（细枝岩黄蓍）Hedysarum scoparium Fisch et Mey.种皮黄色，皮上有少量绒毛，种粒饱满；子叶较硬，黄色 18 皂角 Gleditsia sinensis Lam.种子黄褐色；胚根、子叶浅黄色，饱满，子叶多开展 19 花曲柳 Fraxinus rhynchophylla Hance 胚 白色或淡白色，有弹性；胚乳乳白色或淡蓝色，较硬 20 水曲柳 Fraxinus mandshurica Rupr.胚 白色或淡白色，有弹性，胚乳乳白色或淡蓝色，较硬 21 连翘 Forsythia suspensa(Thunb.)Vah.种皮棕黄、微红，种仁白色，饱满 22 卫矛 Euonymus alatus(Thunb.)Sieb.胚完整，新鲜，浅黄色或黄绿色，胚乳白色 23 梓树 种子灰色或灰棕色，饱满；子叶白色 24 板栗 Catalpa ovata G.Don.种壳栗褐色至浓褐色，饱满，坚硬，表面光洁；子叶浅黄色，较硬，有弹性及清香味，内外均无异状，胚芽键全，无黑点；子叶上虽有暗棕色条纹，但面积不超过1/4 DB22/T 8382018 20 顺序号 树种 优良种子 25 小叶锦鸡儿 Caragana microphylla Lam.种粒饱满，种皮棕褐色或灰褐色.子叶淡黄色 26 紫穗槐 Amorpha fruticosa Linn.叶赤褐色；种皮棕色或浅灰绿色；种仁鲜黄绿色，子叶和胚根均为淡黄色 27 五角枫 Acer mono Maxim.翅果褐色，饱浦；种仁嫩绿，饱满有弹性 28 茶条槭 Acer ginnala Maxim.翅果橙棕色，饱满，子叶黄色或浅黄绿色，胚根较白 29 青楷槭 Acer davidii Franch.翅果橙棕色，饱满；子叶黄色或浅黄绿色，胚根较白 30 黑松 Pinus thunbergii Parl.种粒饱满，种皮黑褐色或灰褐色；胚、胚乳白色，有松脂香味 31 樟子松 Pinus sylvestris var.mongolica Litv.种粒饱满，胚、胚乳白色，有弹性，具松脂香味 32 红松 Pinus koraiensis Sieb.et Zucc.种粒饱满，浅红棕色；胚、胚乳乳白色，饱满，有弹性，富松脂香味 33 赤松 Pinus densiftora Sieb.et Zucc.种皮赤褐色，胚、胚乳皆白色，有松脂香味，有弹性 34 青扦 Picea wilsonii Mast.种皮黑揭色或灰褐色，种粒饱满;胚、胚乳皆白色，有松脂香味;浸种后种仁膝胀，色鲜，质硬脆 35 白扦 Picea meyeri Rehd.et Wits.种皮黑褐色或灰褐色，种粒饱满；胚、胚乳皆白色，有松脂香味；漫种后种仁膨胀，色鲜，质硬脆 DB22/T 8382018 21 附 录 E（规范性附录）SSR标记检验 E.1 提取鉴定种子的DNA E.1.1 DNA所需溶液的配置 E.1.1.1 1 mol/L Tris-HCl 1 L:800 ml重蒸水中加入121.1 g Tris,用HCL调pH至8.5后定容至 1 L，灭菌。E.1.1.2 0.5 mol/L EDTA（pH=8）1 L:800 ml重蒸水中加入186.1 g EDTA-Na22H2O,用NaOH调pH至8.0，定容1 L。E.1.1.3 20%SDS 100 ml：在90 ml重蒸水中加入10 g SDS，加热至68 助溶，用盐酸调节pH至7.2，定容至100 ml。E.1.1.4 5 mol/L NaCl 1 L:750 ml重蒸水中加入292.2 gNaCl,溶解后定容1 L，灭菌。E.1.1.5 DNA提取缓冲液:a)100 mmol/L Tris-HCl pH 8.5；b)100 mmol/L NaCl；c)50 mmol/L EDTA pH 8.0；d)2%SDS；e)用NaOH调pH为9.0。E.1.1.6 100TAE 1 L:800 ml重蒸水中加入 121.1 g Tris,37.2 g EDTA-Na22H2O,用HCl调pH至8.0,定容，灭菌。E.1.1.7 50TAE 1 L:500 ml蒸馏水中加入242 g Tris,溶解后加100 ml 50 mmol/L EDTA（pH8.0）和57.1 ml冰醋酸，定容。E.1.1.8 RNase（去DNA酶的RNA酶）：用重蒸水溶解RNase,终浓度 10 mg/ml，煮沸 20 min，缓慢冷却，分装，-20 保存。E.1.1.9 5 mol/L 醋酸钾 100 ml pH7.0:称取29.4 g醋酸钾，溶于 60 ml重蒸水中，溶解后再加入11.5 ml醋酸，用重蒸水定容至 100 ml。E.1.2 DNA提取和纯化 E.1.2.1 取 0.5 g叶片，用液氮研磨成粉末后放入到 2 ml离心管中，加入1 ml预热的DNA提取缓冲液。E.1.2.2 加入-巯基乙醇20 l混匀，65 水浴 30 min60 min。E.1.2.3 加入 200 l 5 mol/L的KAc混匀，水浴 20 min，12000 rpm离心 15 min。E.1.2.4 取上清加等体积苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）混合液，5 min 后 12000 rpm离心 10 min。E.1.2.5 取上清液加入等体积氯仿：异戊醇（24：1）抽提，10000 rpm离心 10 min。E.1.2.6 取上清加等体积异丙醇（-20 冰箱提前预冷 0.5 h 以上）沉淀DNA。E.1.2.7 放于-20 冰箱30 min，12000 rpm离心 10 min，弃上清，用70%乙醇冲洗2次。E.1.2.8 控干，加 300 l 1TAE，完全溶解（50 水浴 10 min助溶）。E.1.2.9 加入2 l RNA酶于管中，放在37 水浴中 1 h或 2 h。E.1.2.10 加入等体积苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）混合液，5 min 后 10000 rpm离心 10 min。E.1.2.11 吸上清于另一1.5 ml离心管中。DB22/T 8382018 22 E.1.2.12 加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1）混合液，5 min后 10000 rpm离心10 min。E.1.2.13 吸取上清于1.5 ml离心管中，加1/10体积 3 mol/L NaAc。E.1.2.14 加入 2 倍体积无水乙醇（-20 冰箱提前预冷）混合，放入-20 冰箱 30 min。E.1.2.15 12000 rpm离心10 min，弃上清，用70%乙醇冲洗 2 次。E.1.3 DNA检测 用紫外分光光度计（Pharmcia,ULTROSPEC）测定DNA浓度，并取少量DNA样品用0.8%的Agrose 胶检测所提DNA的质量。E.2 引物设计 根据树种设计相应的SSR引物，并由公