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ICS 65.020 CCS B 16 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 5371.2 2021 粮食作物 种传病害 控制技术 规程 第 2 部分：谷子线 虫病 2021-04-26 发布 2021-05-26 实施 河 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB13/T 5371.2 2021 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标 准化 文件 的结 构 和起草 规则 的规 定起草。DB13/T 5371 粮食 作物 种 传病害 控制 技术 规程 分 为7个 部分：第1部 分：谷子 白发 病；第2部 分：谷子 线虫 病；第3部 分：谷子 粒黑 穗 病；第4部 分：玉米 丝黑 穗 病；第5部 分：小麦 散黑 穗 病；第6部 分：高粱 黑穗 病；第7部 分：糜子 黑穗 病。本文件 为DB13/T 5371的第2部分。本文件 由河 北省 农林 科学 院提出。本文件 起草 单位：河 北省 农林科 学院 谷子 研究 所。本文件 主要 起草 人：李志 勇、白辉、董志 平、马继芳、刘佳、王永 芳、全建章、刘磊、张梦 雅、勾建军、李 秀芹、毕 章宝、于卫 红、赵 跃峰、李瑞 德、蔡晓 玲、姜 红艳。DB13/T 5371.2 2021 1 粮 食作物 种传病害 控制技 术规程 第 2 部分：谷子线 虫病 1 范围 本文件 规定 了 谷 子线 虫病 的 病情 分级、控 制原 则和 控制技 术。本文件 适用 于 谷 子线 虫病 的控制。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注 日期 的引 用 文件，仅 该日 期对 应的 版本 适用于 本文 件；不注 日期 的引用 文件，其 最新 版本（包括 所有 的修 改单）适用于本 文件。GB/T 3543.2 农作 物种 子 检验规 程 扦样 GB 4404.1 粮 食作 物种 子 第1部 分：禾谷 类 GB/T 15671 农 作物 薄膜 包衣种 子技 术条 件 NY/T 1276 农 药安 全使 用 规范 总则 DB13/T 2338.5 谷 子抗 病 虫性鉴 定技 术规 程 第5部 分：线 虫病 3 术语与 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 谷子线 虫病 由贝西 滑刃 线虫（Aphelenchoides bessyi Christie）引发 的种 传病 害，土壤 也可传 播，属于 外寄生的 非系 统性 病害。线 虫随着 植株 的生 长逐 渐迁 移至穗 部，并大 量繁 殖，侵染花 器和 子房，致 使 子房受损、柱 头萎 缩，不能 结实。谷子 线虫 病症 状和 发生规 律见 附录A。3.2 种传病 害 以种子 携带 病原 物传 播为 主的病 害。3.3 无病种 子 不携带 谷子 线虫 病活 体线 虫的种 子。3.4 农田清 洁生 产 预防病 原物 污染 作物 或农 田土壤 的农 业生 产方 式。在作物 或农 田野 生寄 主上 的病原 物扩 散前 将 病部彻底 清理 出田 间，并进 行灭活 处理，减 少或 者消 除 病原 物 对 作物 或农 田土 壤等环境 的 污染。4 病情分 级 DB13/T 5371.2 2021 2 无病地 块：没有 谷子 线虫 病发生 的地 块；零星 发病 地块：谷子 线虫 病发 病率 在1%以 下；常发 地块：谷子线 虫病 发病 率在1%5%；重 病地 块：谷子 线虫 病 发病率 在5%以上。5 控制原 则 以生产 和使 用无 病种 子为 前提，农田 清洁 生产 为重 点，根 据病 情分 级对 不同 发生程 度的 地块 采 用分级治 理的 原则。多 措并 举控制 重病 地块；种 子处 理等技 术防 控常 发地 块；农田清 洁生 产控 制零 星 发生地块；重 点保 护无 病地 块。实 现地 块病 情逐 年降 级，由 点到 片再 到面，逐 步实现 不用 农药 控制 病 害的目的。6 控制技 术 6.1 无病种 子生 产 6.1.1 无病原 种（亲本）6.1.1.1 选用无 病原 种（亲本）常规谷 子品 种选 用无 病原 线虫的 原种 进行 繁种；谷 子杂交 种选 用无 病原 线虫 的不育 系和 恢复 系 进行制种。种 子质 量 应 符合GB 4404.1 的 规定。6.1.1.2 温汤浸 种 播种前，用55 56 温 水浸种10 min，晾干 后备 用。6.1.1.3 药剂处 理种 子 选用40%辛 硫磷 乳油，按 照 种子重 量的0.2%0.3%对 谷子原 种（亲本）进 行拌 种，避 光堆 闷4h 后晾干。药 剂使 用应 符合NY/T 1276 规 定，包衣 种子 质量 应符合GB/T 15671 规 定。6.1.2 建立无 病繁（制）种 基地 6.1.2.1 无病地 块繁（制）种 在无谷 子线 虫病 地块 建立 繁（制）种基 地，确保 繁（制）种田 周边300 m 之内 没 有谷子 线虫 病发 生。6.1.2.2 轮作倒 茬地 块繁（制）种 选用4 年内 没有 种植 谷子 的 田块作 为繁（制）种 田。6.1.3 农田清 洁生 产 在 灌浆 中期 拔除 田间 直立、不灌 浆或 部分 籽粒 灌浆 的暗褐 色谷 子线 虫病 病穗。带离 谷田，集中深埋（30 cm）或 烧毁。6.1.4 种子带 虫检 测 通过以 下技 术对 种子 带贝 西滑刃 线虫 情况 进行 检测，发现 种子 带线 虫则 不能 作为无 病种 子 使 用。6.1.4.1 田间目 测 DB13/T 5371.2 2021 3 谷子灌 浆期，观 察 田 间是 否有直 立、不灌 浆或 部分 籽粒灌 浆暗 褐色 谷子 线虫 病病穗。6.1.4.2 分离检 测 取适量 种子 放在 单层 纱布 或细纱 网内，把 包有 种子 的纱布 或纱 网放 在玻璃 漏 斗中，在漏 斗中 加 水使待检种子浸在水中，漏斗下接一段橡皮管，橡皮管由弹簧夹夹住。室温下静止12 h24 h，打开弹簧夹，收集 底部5 毫升 水样，线虫 数量 少时 可离 心富 集，显 微镜 下对 水样 进行 镜检。镜检 发现 线虫，视为种子 带线 虫。6.1.4.3 分子检 测 利用PCR 技 术对 种子 进行 贝 西滑刃 线虫 检测。种 子取 样 参照GB/T 3543.2 执行。检测技 术见 附录B。6.2 田间控 制技 术 根据谷 子线 虫病 在当 地的 发生情 况，因地 制宜 选用 下列相 应病 情级 别的 控制 技术。6.2.1 重病地 块控 制 6.2.1.1 土壤深 翻 谷子线 虫病 发生 严重 田块，秸秆 不应 作为 饲料 使用，谷子 收获 后深 翻30 cm。6.2.1.2 轮作倒 茬 实行4 年以 上轮 作。选择 玉 米、高 粱、大豆、花 生、蔬菜、甘薯、油 料等 非寄 主作物 进行 轮作。6.2.1.3 选用抗 病品 种 种植品 种应 符合DB13/T 2338.5的 规定。6.2.1.4 选用无 病种 子 禁止从 病区 调运 种子，选 用无病 原线 虫的 谷子 种子。种子 质量 应符 合GB 4404.1 的规 定。6.2.1.5 药剂处 理种 子 选用农 药对 谷子 常规 种子 和杂交 种子 进行 处理，方 法 同6.1.1.3。6.2.1.6 农田清 洁生 产 同6.1.3。6.2.2 常发地 块控 制 6.2.2.1 轮作倒 茬 实行3 年以 上轮 作。可选 择 轮作倒 茬的 作物 同6.2.1.2。6.2.2.2 选用抗 病品 种 同6.2.1.3。6.2.2.3 选用无 病种 子 同6.2.1.4。DB13/T 5371.2 2021 4 6.2.2.4 药剂处 理种 子 同6.2.1.5。6.2.2.5 农田清 洁生 产 同6.1.3。6.2.3 零星发 病地 块控 制 6.2.3.1 选用无 病种 子 同6.2.1.4。6.2.3.2 药剂处 理种 子 同6.2.1.5。6.2.3.3 农田清 洁生 产 同6.1.3。6.2.4 无病地 块保 护 6.2.4.1 选用无 病种 子 同6.2.1.4。6.2.4.2 药剂处 理种 子 同6.2.1.5。DB13/T 5371.2 2021 5 A A 附 录 A（资料 性）谷子线 虫病 症状 及发 病规 律 A.1 症状 谷子病 原线 虫可 感染 谷子 的根、茎、叶、叶鞘、花、穗和 籽粒，但 主要 为害 花器、子房，只 在 穗部表现 症状。感 病植 株的 花初呈 暗绿 色，渐变 黄褐 色，后 呈暗 褐色。发 病重 的植株 抽穗 后即 表现 症状。因大量 线虫 寄生 于花 部破 坏子房，因 而不 能开 花，即使开 花也 不能 结实，颖 片多张 开，籽粒 秕瘦，尖削，表 面光 滑有 光泽，病 穗瘦小，直 立不 下垂。发 病轻的 植株 症状 多不 明显，能开 花结 实，但只 有 靠近穗主 轴的 部分 小花 形成 浅褐色 的病 粒。不同 品种 症状差 异明 显。红秆 或紫 秆品种 的病 穗向 阳面 的 护颖在灌 浆至 乳熟 期变 为红 色或紫 色，以后 褪成 黄褐 色。而 绿秆 品种 无此 症状，直到 成熟 时护 颖仍 为 苍绿色。A.2 发病规 律 谷子线 虫病 主要 随种 子传 播，带 虫种 子是 主要 初侵 染源，秕谷 落入 土壤 或作 为饲料 制作 的粪 肥 也可传播。混 在土 壤中 或保 持在室 内的 线虫 至少 能存 活3年以 上。谷 子病 原线 虫 为外寄 生，谷子 播种 后，在谷粒、秕 籽的 壳皮 内侧 卷曲休 眠越 冬 的 成虫 和幼 虫遇湿 复苏，感染 胚 根及 幼芽，拔节 前大 部分 线 虫仍在根 部和 种壳 内，并 有少 量繁殖。拔节 后线 虫逐 渐向 叶鞘转 移，在 叶鞘 内侧 繁殖。适 当的 高温(25 30)能促使 线 虫更为活跃，若此时雨水较多，植物体表存在水膜，线虫可在植株体表水膜中迅速 迁移至地 上部 分，尤 其在 孕 穗以后,适 宜的 温湿 条件 及 穗 部丰 富的 营养，线虫 向 上迁移 更为 显著。谷子 苗期地上 部分 线虫 数量 一直 较少，而 幼穗 形成 后，线 虫 转移到 穗部 为害 并 大 量繁 殖，此时 线虫 繁殖 极快，开花末 期达 到高 峰，每穗 有12000 20000 条线 虫，造成子 房受 损、柱头 萎缩，不能 结实；至 谷子 成 熟时，又 以幼 虫、成虫 主要 在谷粒、秕 籽的 内外 颖内 侧休眠 越冬，而 护颖 内侧 线虫较 少，胚和 胚乳 内 没有线虫。在 生长 期间，特 别是在 穗期，线 虫能 随雨 水或植 株间 接触 而传 播到 临近的 健株 或健 穗上。另外，发 病轻 的病 穗仍 能正 常结实，为 此，病田中外观健康的穗粒，实际 也 可 能 潜 藏 着 休 眠 线 虫。线虫病 的轻 重，主要 取 决 于种子 带线 虫量 和穗 期雨 量大小、温 度及 品种 抗性，这些 发病 要素 同 时具备，则可 造成 毁灭 性为 害。一 般平 地重，山 地轻；粘土 地重，沙 土地 轻；积水洼 地重；早 播病 轻，晚播病 重。高温 高湿 有利 于线虫 活动 繁殖，尤 其是 开花灌 浆期 多雨，利 于线 虫在穗 部大 量繁 殖传 播，造成病 害大 发生 及减 产。不同谷 子品 种间 抗病 性有 差异。凡生 育期 长，特别 是孕穗 期到 灌浆 期长，而且穗码 紧、刚毛 长的 品种 发病重，反 之则 发病 轻。DB13/T 5371.2 2021 6 B B 附 录 B（资料 性）谷子种 子带 病原 线虫 分子 检测 B.1 检测方 法 每份谷 子种 子随 机抽 样3 次，每次 取20 粒，设 置3 次重 复，液 氮研 磨种 子至 粉末 状，提取 基 因组DNA。利用贝 西 滑刃 线 虫 特 异 性引 物GU-F/GU-R 对 基因 组DNA 进行PCR 扩增，利用1.2%琼 脂 糖 凝胶 进 行 电泳检测。检 测到245bp 的 特异 性 扩增片 段则 种子 带线 虫。B.2 贝西滑 刃线 虫 特 异性 引物 GU-F：GACACTGCAATCGCTTCGAC GU-R：ATCCGCAACCACAACTCACA B.3 PCR 扩 增体 系与 程序 25 L PCR反 应体 系：2Es Taq Master Mix 12.5 L、模板DNA 2.0 L、10 mol/L 上 下游 引物各1 L、灭菌ddH2O 8.5 L。PCR 扩 增程 序：94 预变 性2 min；94 变性30 s，56 退火30 s，72 延伸30 s，35 个循 环反应；最 后72 再延伸5 min。B.4 PCR 扩 增片 段核 苷酸 序列 GACACTGCAATCGCTTCGACGACATTCCGCAAGGTTGTCTAGGAGTGTTGTTGTTGTGCTCGTTGGATGCATTTGCGTGCGGAGTGCGCCGAGTGGGTCGATGTCGCTGCCGGAAGGGCGTATAGAGGACTCGGGTTTTCGGACTCGAGAATCCTGTGCGTTCGGATAGCAGGTGATGTTGGCTCGCTGTTGTGGAGTGCGGGTGAATTCGCGATGGGCGTCGGTTGTGAGTTGTGGTTGCGGAT _
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