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ICS 65.020.20 B 05 备案号：DB42 湖北省 地 方 标 准 DB42/T 1405 2018 湖北主要 药用植物 石斛组培 育苗技术 规程 Technical regulations of tissue culture for the main medicinal Dendrobium in Hubei（报批稿）2018-09-04 发布 2018-11-24 实施 湖 北 省 质 量 技 术 监 督 局 发布 DB42/T 1405 2018 I 目 次 前言.III 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 种 类选 择.1 5 种 苗繁 育.2 5.1 蒴果 采收.2 5.2 消毒 播种.2 5.3 增殖 培养.2 5.4 分化 培养.2 5.5 生根 培养.2 6 炼 苗与 健化.2 6.1 搭建 荫棚.2 6.2 炼苗.2 6.3 健化.3 7 病 虫害 防治.3 7.1 防治 原则.3 7.2 主要 病害 及防 治方 法.3 7.3 主要 虫害 及防 治方 法.3 8 种 苗出 圃.3 8.1 出圃 时间.3 8.2 种苗 规格.4 8.3 出圃 要求.4 附录A（资 料性 附录）药用石 斛主 要病 害防 治方 法.5 附录B（资 料性 附录）药用石 斛虫 害防 治方 法.6 DB42/T 1405 2018 II DB42/T 1405 2018 III 前 言 本标准 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利，本文 件的 发布机 构不 承担 识别 这些 专利的 责任。本标准 由湖 北省 林业 科学 研究院 提出。本标准 由湖 北省 林业 厅归 口管理。本标准 起草 单位：湖北 省 林业科 学研 究院、湖北 宗 坤石斛 科技 开发 有限 公司、英 山县 药材 和茧 丝绸产业化 办公 室、英山 县科 技局。本标准 主要 起草 人：陈 慧 玲、刘宗 坤、杨 彦伶、张 新 叶、刘正 言、庞 宏东、李 振 芳、刘涛、陈华 超、马林江、彭 婵。DB42/T 1405 2018 1 湖 北主要 药用植物 石斛组 培育苗技 术规程 1 范围 本标准 规定 了湖 北主 要药 用植物 石斛 组培 育苗 的术 语与定 义、种类 选择、种 苗繁育、炼 苗与 健 化、病虫害 防治 及种 苗出 圃。本标准 适用 于湖 北省 范围 内主要 药用 植物 石斛 的组 培育苗 生产。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。GB/T 8321.1 农药 合理 使 用准则(一)GB/T 8321.2 农药 合理 使 用准则(二)GB/T 8321.3 农药 合理 使 用准则(三)GB/T 8321.4 农药 合理 使 用准则(四)GB/T 8321.5 农药 合理 使 用准则(五)GB/T 8321.6 农药 合理 使 用准则(六)GB/T 8321.7 农药 合理 使 用准则(七)GB/T 8321.8 农药 合理 使 用准则(八)GB/T 8321.9 农药 合理 使 用准则(九)GB/T 8321.10 农药 合理 使用准 则(十)NY/T 1276 农 药安 全使 用 规范 总则 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 标准。3.1 石斛菌 根共 生菌 Dendrobium mycorrhiza symbiotic fungus 一种或 几种 侵染 石斛 属植 物根部，与 之共 生的 内生 真菌，石斛 属植 物种 子萌 发、幼 苗生 长的 碳 源、水源以 及成 年植 株部 分营 养均依 赖这 些真 菌来 获取。3.2 石斛菌 根共 生菌 液 liquid of Dendrobium mycorrhiza symbiotic fungus 药用植 物石 斛进 行组 织培 养时，在其 培养 基中 添加 的 由石斛 菌根 共生 菌经 无菌 分离培 养后 得到 的 液体菌剂。3.3 DB42/T 1405 2018 2 炼苗 hardening off 采取 通 风、降温、适 当控 水等措 施对 设施 培育 的幼 苗 进行 强迫 锻炼，提 高抗 性，使 其定 植后 能 够 迅速适应 陆地 的自然 环 境条 件 的过 程。4 种类选 择 选 择 霍 山 石 斛(Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng)、铁 皮 石 斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)、细茎 石斛(Dendrobium monilifolme(L.)Sw)为 主要栽 培种。注：石斛属植物约1500 种，中 国有75种2 个变种，湖北有8 种，以上3 种在湖北栽培表现好。5 种苗繁 育 5.1 蒴果采 收 对现有 种子园 中多 糖含量 高、高 产的2 a 3 a 生健 康植株 进行人 工授 粉后精 心管理，于9 月11月采收无 病虫 害、无机 械损 伤的成 熟蒴 果，以果 皮绿 黄色未 开裂 为宜。5.2 消毒播 种 5.2.1 消毒 在超净 工作台 上将 蒴果表 面用70%酒精 棉球 擦拭干 净后，浸泡于70%酒精中30 s，再 用0.1%升汞消毒15 min，无 菌水 冲洗5 次后 用无 菌滤 纸吸 干表 面 水分。5.2.2 播种 在超净 工作 台上 用灭 菌手 术刀沿 中缝 线纵 向切 开消 毒好的 蒴果，刮 出种 子于 适 量的无 菌水 中分 别 制成悬浮 液，摇匀 悬浮 液后，吸取 适量 悬浮 液加 入装 有1/2 MS+1%石斛 菌根 共 生菌液 培养 基的 培养 瓶中，并使之 均匀 分布，用 封口 膜封口。5.2.3 培养条 件 将已播 种的培 养瓶 放入温 度为（25 1），光照10 h 12 h、光 照强度1500 1ux 2000 1ux组培室培养。5.3 增殖培 养 30 d 后 将培 养基 上萌 生的 原球茎 转接 到MS+2.0 mg/l 6-BA+0.2 mg/l NAA+10%香蕉 汁+1%石斛菌 根共 生菌 液的 增殖 培养上 培养，培 养条 件参 照本标 准5.2.3 执行。5.4 分化培 养 60 d 后将 增殖 的原 球茎 转 接到MS+0.6 mg/l 6-BA+1.2 mg/l NAA+10%香 蕉汁的 分化 培养 基上培养，培养 条件 参照 本标 准5.2.3 执 行。5.5 生根培 养 60 d 后 将分 化的 丛生 芽转 接到1/2 MS+1.0 mg/l NAA+15%马铃 薯+2%石 斛菌根 共生 菌液 的生根培养 基上 培养，培 养条 件参照 本标 准5.2.3 执行。DB42/T 1405 2018 3 6 炼苗与 健化 6.1 搭建荫 棚 选择地 势平 坦处 搭建 长40 m 50 m、宽8 m、高3.3 m 的钢架 大棚，覆 盖避 雨薄 膜和遮 光度75%80%的遮阳 网，棚内 安装 微喷 雾设备。6.2 炼苗 组培苗 生根 培养60 d 后 即 可开瓶 炼苗 移栽。将 苗高3 cm 4 cm、长小 叶5 片8 片，根4 条5 条的试管苗 带培 养瓶 一起 移至 荫棚内，进 行常 温闭 瓶炼 苗，7 d 后再 开瓶 炼苗3 d 7 d。炼 苗温 度宜15 30，光 照小 于7000 Lux。6.3 健化 6.3.1 健化基 质准 备 采用树 皮+花岗岩 瓜米 石 的双层 基质作 为健 化基质，上层 为厚度2 cm 发酵过 的1 cm 大小碎 松树 树皮，下 层为 厚度2 cm的粒径0.5 cm 1.0 cm 花 岗岩 瓜 米石，基质 在组 培苗 健化 前用高 温蒸 汽消 毒后 装入育苗盘。6.3.2 组培苗 健化 前预 处理 将已进 行炼苗 处理 的生根 组培苗 从培养 瓶中 取出，先用清 水将根 系上 的琼脂 冲洗干 净，再 用5%甲基托布 津1000 倍液 浸根3 min 5 min，放 在阴 凉通 风处晾 至根 系呈 白色 后即 可进行 组培 苗健 化。6.3.3 健化方 法 用42 cm 42 cm 5 cm 的 育 苗盘，按10 cm 10 cm 密 度 进行健 化，每个 育苗 盘栽 种16 蔸，每蔸5 株6 株丛 植，移栽 时基 质含 水量控 制在30%40%。6.3.4 健化管 理 健化种 苗需 喷雾 保持 幼苗 相对湿 润，10 d 15 d后，开始用 自制 石斛 营养 液和 磷酸二 氢钾1000 倍2000 倍液 交替 喷施，每 隔15 d 喷1次。7 病虫害 防治 7.1 防治原 则 病虫害 防治 遵循“预 防为 主，科 学防 控，依法 治理，促进 健康”的16字 方针，实行 生物、物 理、化学防治 相结 合的 综合 防治 措施。7.2 主要病 害及 防治 方法 药用植物石斛主要病害有石斛黑斑病Dendrobium alternaria、石 斛 炭 疽 病Dendrobium anthracnose disease 和 石 斛煤污 病Dendrobium sooty blotch。预 防病 害发生 应 保持 生长 环境 卫生，增强环境 通风 透光，及 时清 除有病 植株、杂 草及 残枝 落叶。主要 的防 治方 法见 附录A。7.3 主要虫 害及 防治 方法 DB42/T 1405 2018 4 药用植 物石 斛主 要虫 害有 蛞蝓Agriolimax agrestis Linnaeus、蜗牛Fruticicolidae 和石 斛菲 盾蚧Phenacaspis dendrobii Kuwana。预防 虫害 发生 应及 时 捕捉害 虫，同时 利用 生物 农药防 虫，及时 清除 有虫植株、杂草 及残 枝落 叶，改善环 境条 件。主要 的防 治方法 见附 录B。8 种苗出 圃 8.1 出圃时 间 种苗在 荫棚 内健 化1 a 2 a 后才 能出 圃上 山定 植，以 春季3 月5 月为 宜。8.2 种苗规 格 单株苗 高4 cm 5 cm，叶 片浓绿，叶 数5 片8 片，根数4 条5 条，根长2.5 cm 3.5 cm，每 蔸8 株10 株。8.3 出圃要 求 起苗前2 d 3 d 应喷 水保 证 基质湿 润，减少 起苗 伤根。种苗 要求 生长 健壮、无 感染、无黄 化，无 检疫性病 虫，无病 虫害。根 系发达，分 布均 匀，无机 械损伤。DB42/T 1405 2018 5 A A 附 录 A（资料 性附 录）药用植 物石 斛主 要病 害防 治方法 表A.1 规定 了药 用石 斛主 要 病害防 治方 法。表A.1 药用植 物石 斛主 要病 害防 治方法 病害名称 危害部位 发生时间 防治方法 石斛黑斑病 叶片 3 月5 月 50%的多菌灵 1000 倍液喷 雾，每隔 14 d 喷 1 次，连续 3 次。用量为 1 kg/ha 1.8 kg/ha。75%百 菌清 400 600 倍液喷洒喷雾，每隔 7 d 喷 1次，连续 4 5 次。用量 为 2.25 kg/ha 3.0 kg/ha。石斛炭疽病 叶片及茎枝 1 月5 月 50%多菌灵1000 倍液或50%甲基托布津1000 倍液喷雾每隔14 d 喷1 次，连续 3 次。用量为 1 kg/ha 1.8 kg/ha。炭福美可湿性粉 剂 500 倍液喷雾，每隔 7 d 10 d 喷1 次，连续 3 次。用量为1 kg/ha 1.8 kg/ha。石斛煤污病 叶片及植株 多雨季节 50%多菌灵稀 释 1000 倍喷 雾，每隔 14 d 喷 1 次，连 续 3 次,用量为 1 kg/ha 1.8 kg/ha。45%石 硫合剂 500 倍液喷雾，每隔7 d 喷1 次，连续2 次.用量3.0 kg/ha 3.75 kg/ha。注：农药的 合理使用应符合GB/T 8321.1、GB/T 8321.2、GB/T 8321.3、GB/T 8321.4、GB/T 8321.5、GB/T 8321.6、GB/T 8321.7、GB/T 8321.8、GB/T 8321.9 和GB/T 8321.10 标准 及 NY/T 1276 标准的规定要求。DB42/T 1405 2018 6 B B 附 录 B（资料 性附 录）药用植 物石 斛主 要虫 害防 治方法 表B.1 规定 了药 用石 斛主 要 虫害防 治方 法。表B.1 药用植 物石 斛主 要虫 害防 治方法 虫害名称 危害部位 发生时间 防治方法 蛞蝓 新芽或根尖 多雨季节 在蛞蝓多发季，使用 1:（4 5）茶枯浸出液对苗盘进行短暂浸泡杀灭。每隔 14 d 浸泡 1 次；用 50%杀螺胺乙醇可湿性粉 剂 400 倍500倍液喷雾，每隔 14 d 喷 1 次，用量 2.25 kg/ha 3.0 kg/ha。蜗牛 幼嫩茎叶和花 多雨季节 注意环境清洁卫生，及时清除枯枝落叶。用麩皮拌 10%螺枯威颗粒剂或白僵菌粗孢粉诱杀。在栽培区喷洒撤生石灰或饱和食盐水。石斛菲盾蚧 叶片 5 月下旬 人工清除虫害枝并集中烧毁。注：农药的合理使用应符合GB/T 8321.1、GB/T 8321.2、GB/T 8321.3、GB/T 8321.4、GB/T 8321.5、GB/T 8321.6、GB/T 8321.7、GB/T 8321.8、GB/T 8321.9 和GB/T 8321.10 标准 及 NY/T 1276 标准的规定要求。_
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