花生抗网斑病鉴定技术规程DB21／T 3074-2018.pdf

ICS 65.020.01 B 15 DB21 辽宁省 地 方 标 准 DB21/T 3074 2018 风沙半干 旱区玉 米/花生防蚀 增效 花生抗网 斑病鉴定 技术规程 Rule for evaluation of resistance to web blotch in peanut 2018-12-25 发布 2019-01-25 实施 辽 宁 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB21/T 3074 2018 1 前 言 本标准 按照 GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由辽 宁省 农村 经济 委员会 提出 并归 口。本标准 由辽 宁省 农业 科学 院负责 起草。本标准 主要 起草 人：臧 超 群、林英、谢瑾 卉、于舒 怡、梁 春浩、刘晓 舟、安福 涛、张 海东、金桂 华。DB21/T 3074 2018 2 花生 抗网 斑病鉴定 技术规程 1 范围 本 标准 规定 了 花 生抗 网斑 病（Phoma arachidicola Marasas Pauer&Boerema）鉴定技 术的 病原 物 分离、接 种体 制备、室 内抗 性鉴定、田 间抗 性鉴 定、病情调 查、抗性 评价、鉴 定记载 方法 等。本标准 适用 于花 生（Arachis hypogaea L.）品种及 种 质资源 对花 生网 斑病 抗性 的室内、田 间鉴 定及评价。2 规范性 引用 文件 下 列文 件对 本文 件的 应用 是必不 可少 的。凡是 注日 期 的引用 文件，仅 所注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。NY/T 2391 农作 物品 种区 域试验 与鉴 定规 程 花生 GB/T 6682 分析 实验 室用 水规格 和试 验方 法 3 试剂、材料 与仪 器设备 本 标准 所用 试剂 在未 加说 明时 均 采用 分析 纯试 剂。实验室 用水 应符 合GB/T 6682中规 定的 三级 水 要求。3.1 PDA 培 养基 称取200g 马铃 薯，洗净 去 皮切碎，加 入 1000mL 水，煮沸20 min 30min，纱 布 过滤，补水 至 1000mL，再加 入18g 琼脂 和 18g 葡萄 糖，搅拌 均匀，高 压灭 菌（121，20min）。3.2 OA 培 养基 称取燕麦粉 15g，加入 水1000mL，煮 沸30min，加入琼脂10g，pH 自然，高 压灭 菌（121，20min）。3.3 恒温培 养箱：（28+2）。3.4 显微镜：物镜头 10 倍-100 倍。3.5 电子 天 平：感 量 0.01g。3.6 超净工 作台。DB21/T 3074 2018 3 3.7 高压灭 菌器。3.8 冷藏 箱（-4）。3.9 低温冰 箱：最低 温度-40 4 病原物 分离 与接 种体 制备 4.1 病原物 分离 从 具有 典型 症状 的 花 生叶 片病斑 处挑 取花 生网 斑病 菌分生 孢子 器置 于 无 菌水 中 震荡3min，将分生孢子悬浮 液 涂布 于水 琼脂 平 板上，用接种 针挑 取 单 孢 置于 马 铃薯 葡 萄糖（PDA）培养 基 上，26 培 养箱 中暗 培养，经观察菌落和 孢子 形 态 结 合ITS 序列比 对，鉴 定 为 花生茎点霉菌(P.arachidicola Marasas.Pauer&Boerema)，致 病 性测定 后确定 为供 接种用 菌株。于4 条件下 保存，或20%甘 油中-40 条件 下长期保 存，备 用。4.2 接种体 制备 接种 前15d30d，将病 菌 接种于 马铃 薯 葡 萄糖（PDA）培养 基平板 上 25 恒温 培养 5d，利 用5mm 打孔器从 菌落 边缘 制 取 菌饼，置于 燕麦 琼脂（OA）培 养基平 板 上 25、近紫 外 灯照射（波 长 340380nm，8W3）培养 10d20d。用 无菌解 剖刀于 超净 工作台 中刮取 病菌 的 分生 孢子器，置于 装有少 量无 菌水 的50mL 无菌 烧杯 中，静 置20min，使 分生 孢子 器吸 水胀 破，释 放分 生孢 子，配制 成浓度 为1 105个/mL 孢子悬浮 液（如 未立 即接 种 使用，可置 4 条件 下 保 存，保 存时 间 3d 以内）。接种前 每毫升 孢 子悬 浮 液 中加入Tween201L 以 增加 病菌孢 子与 叶片 的粘 附性，加 入 0.05mg 蔗糖 提高 孢 子萌发 率。5 室内抗 性鉴定 5.1 室内离 体 叶 片准 备 在长宽 高为10cm10cm 8cm的花 盆中 播 种籽 粒饱满 的花生 种子3 粒，定 期 浇水，于每 天26、12h光暗交 替的 培养 箱中 培养 至下针 期。剪取 底部 向上的第3、4 片复叶，用 脱脂 棉 包裹叶 柄 插 入经 人工 打孔后的接 种杯（直 径4cm，高4.8cm）中，杯内 放入30mL清水。5.2 接种 用8 号 水粉 笔 沾取 孢 子悬 浮液 均 匀 涂抹 于离 体 叶片，直 至 整 片复 叶涂 满 孢子 悬浮 液，用6 号 自封 袋（120mm 170mm）保 湿。5.3 接种后 管理 DB21/T 3074 2018 4 将 接种 后的 离 体 叶片 放置 于 每天26、12h光暗 交替的 植物 培养 箱中 培养。5.4 病情调查 接种后25d30d，进行 病 情 调查，同批 次的 材料 应在24h 内完 成。5.5 调查方 法 目测每 份鉴 定 材 料发 病状 况，根 据病 害症 状描 述，调查记 载病 情级 别。5.6 病情分 级 病情分 级及 其对 应的 症状 描述见 表 1。表1 花生 品种 抗网 斑病 鉴定病 情级 别划 分标 准 病情级别 病害症状描述 0 整片复叶无病症状；1 病斑面积10%；3 10%病斑面积25%；5 25%病斑面积50%；7 50病斑面积75%；9 75%病斑面积。6 田间抗 性鉴 定 6.1 抗性鉴 定圃 设置 抗性鉴 定圃 设置 在具 备良 好的自 然发 病环 境条 件、灌溉良 好、地势 平坦、地 力均匀 的地 块。6.2 小区设 计 鉴定材 料随 机排 列。小 区 行长5m，4 行 区，行 距0.5m 或0.6m，小 区保 苗80 穴左 右。每20 份鉴 定材 料各设1 组 抗、感 病对照，抗 病对照 品种 为鲁 花11，感 病对照 品种 为四 粒 红。6.3 种植要 求 鉴定材 料播 种时 间、栽培 管理 与 大田 生产 相同，整 个生长 季 不 施用 杀菌 剂。6.4 接种 6.4.1 接种期 接种期 为花 针期。6.4.2 接种方 法 DB21/T 3074 2018 5 每 个品 种随 机连续 选择 10 株，用 8 号水 粉笔 沾 取孢子 悬浮 液均 匀涂 布主 茎中下 部 4 片复 叶，用 6号自封 袋（120m m1 70mm）保湿。6.5 接种后 管理 在接种 期如 遇干 旱天 气，应及时 进行 田间 浇灌，确 保病害 发生。6.6 病情调 查 接种 后15d20d，进 行病 情 调查，同 批次 的材 料应 在 1d2d 内 完成。6.7 调查方 法 同5.5 6.8 病情分 级 同5.6 7 抗性评 价 7.1 鉴定有 效性 判别 当感病 对照 材料 达到 其相 应感病 程度（9 级），该 批 次材料 抗网 斑病 鉴定 视为 有效。7.2 抗性评 价标 准 依据鉴 定材 料发 病程 度（病情级 别）确定 其抗 性水 平，划 分标 准见 表 2。表2 花生 抗网 斑病 评价 标准 病情级别 抗性评价 0 免疫（IM）1 高抗（HR）3 抗（R）5 中抗（MR）7 感（S）9 高感（HS）7.3 重复鉴 定 初次鉴定时表现为 免 疫、高抗和 抗 病 的 花 生 品 种 应在次年 进 行 重 复 鉴 定。7.4 抗性评 价 DB21/T 3074 2018 6 对初次 鉴定 结果 和重 复鉴 定结果 进行 比较，以 记载 的最高 病情 级别 为最 终鉴 定结果，并 依此 结 果 对鉴定材 料进 行抗 性评 价 8 鉴定记 载表 格 花生抗 网斑 病鉴 定结 果记 载见 表 3。表3 年花 生抗 网 斑病 鉴 定结 果记 载表 编 号 品种名称 病情级别 抗性评价 注 1:鉴定地点 注 2:接种病原菌分离物编号 注 3:接种日期 调查日期 鉴 定技 术负 责 人（签字）：DB21/T 3074 2018 7 附录 A（资料 性附 录）花生网 斑病 菌 A.1 学名 和形 态描 述 A.1.1 学名 花 生 网 斑 病 致 病 菌 为 花 生 茎 点 霉(Phoma arachidicola Marasas Pauer&Boerema)，半 知 菌 门（Deuteromycotina），腔 孢纲(CoeZomycetes），球 壳孢目（Sphacropsidales），茎 点霉 属（Phoma）。A.1.2 形 态描 述 花生网 斑病 菌丝 体在 燕麦 琼脂培 养基（OA）上 菌落 呈白色 至灰 白色，圆 形，粘性较差，菌丝 体 白 色透明，有 隔，分生 孢子 器 褐 色，圆 形或 不规 则形，有孔口，其大 小为 175.5m 96.85m。分生 孢子 椭圆形，无色 单孢，通 常中 间有隔 膜，顶端 有油 球，其大小 为 5.89m 3.41 m。厚垣 孢子 单生 或 串 生，外壁和 两孢 子夹 壁变 厚，暗褐色，类球 形或 不规 则 形，单孢 被1个 或几 个横 隔 分开，分 隔处 缢缩 9-12m8-17m。A.1.3 病菌 图片 茎 点霉 分生 孢子 器 及分生 孢子 花 生网斑病 菌菌落 形态 DB21/T 3074 2018 8 附录 B(资料 性附 录)花生网 斑病 症状 B.1 病名 和症 状描述 B.1.1 病名 花生网 斑 病 peanut web blotch B.1.2 症 状描 述 花生网斑 病 是花生 生产上一种常见的 真菌病 害,主 要为害 叶片，也可为 害茎和叶柄，其症状随发病条件的 不同 有所 差异。病 斑 先出现 在植 株基 部的 叶片 上，侵 染初 期菌 丝体 以菌 索 状于叶 片表 面蜡 质层 下，呈白网 状，随后 从侵 染点 沿叶脉 以放 射方 式向 外扩 展，呈 星芒 状粉 点，随 病 斑扩大，由 白、灰 白、褐 至黑褐色，形成 边缘 不清 网 状斑。当 湿度 大、温度 高 时，便出 现直 径 11.5cm 的大块 斑点。病斑 部背 部 初期和中 期不 表现 症状，后 期出现 褐色 斑痕，表 皮下 有黑色 小突 起。生产 上该 病常与 褐斑 病、黑 斑 病 混 合发生，造成 严重 落叶。B.1.3 症 状图 片 花生网 斑病 田间 症状 _