猪传染性胸膜肺炎防治技术规程DB1303／T286-2020.pdf

ICS 11.220 B 41 DB1303 秦皇岛市地方标准 DB 1303/T 286 2020 猪传染性 胸膜肺炎 防治技术 规程 2020-11-25 发布 2020-11-28 实施 秦 皇 岛 市 市 场 监 督 管理局 发布 DB1303/T 286 2020 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。本文件 由 河 北科 技师 范学 院 提出。本文件 由 秦 皇岛 市农 业农 村局 归 口。本文件 起草 单位：河 北科 技师范 学院。本文件 主要 起草 人：芮 萍、张 珍 珍，关 景 林，宋 涛、叶 云 鹏、严 世 杰、焦 桂 华、马增军、刘 谢 荣。DB1303/T 286 2020 1 猪 传染性 胸膜肺炎 防治技 术规程 1 范围 本文件 规定 了猪 传染 性胸 膜肺炎 的术 语和 定义、诊 断和防 治措 施。本文件 适用 于秦 皇岛 地区 生猪饲 养场（户）和 动物 诊疗单 位对 猪传 染性 胸膜 肺炎的 诊断 和防 治。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 17824.2 规模 猪场 生产技 术规 程 NY/T 537 猪放 线杆 菌胸 膜 肺炎诊 断技 术 NY 5030 无 公害 食品 生 猪饲养 兽药 使用 准则 NY 5031 无 公害 食品 生 猪饲养 兽医 防疫 准则 SN/T 1447 猪传 染性 胸膜 肺炎检 疫技 术规 范 中华 人民 共和 国兽 药典 3 术语和 定义 本文件 没有 需要 界定 的术 语和定 义。4 诊断 4.1 病原 胸膜肺 炎放 线杆 菌为 巴氏 杆菌科 放线 杆菌 属，革 兰 氏阴性 小球 杆菌，有荚 膜 和鞭毛。根据 荚膜 多糖和LPS 的抗 原性 差异，目 前 将APP 分为15 个 血清 型，其 中血清1型和5型 又分 为 1a、1b及5a、5b两 个亚 型。根据对 辅酶（NAD）的 依 赖性，又分为 生物 型和 型，型依 赖NAD，包 括112及15型，型 不依赖NAD，包 括13、14 型。其 中血清1、5、9 和11 型的 毒 力最强，3 和6型 毒力 低。流行特 点 4.1.1 发病日 龄 各种年 龄猪 均易 感，其中6 周龄至6月 龄的 猪较 多发，但以3 月龄 仔猪 最为 易感。4.1.2 发病季 节 一 年四 季均 可发 生，但夏末 秋初 或冬 末春 初时 较易发 生。4.1.3 传染源 DB1303/T 286 2020 2 病 猪和 亚临 床感 染带 菌 猪。4.1.4 传播途 径 传播途 径 主 要包 括：直接接 触或 短距 离的 飞沫 传播；远距离 可通 过污 染的 工具 和饲养 人员 的衣 服、靴子 以及漂 浮于 空气 中的 气溶 胶传播；小啮齿 类动 物和 鸟也 可能 传播此 病；引种使 不同 猪群 间传 播；饲养环 境突 然改 变、猪 群 的转移 或混 群、拥 挤或 长 途运输、通风 不良、湿度 过高、气 温骤 变等应激因 素，均可 引起 本病 发生或 加速 疾病 传播。4.2 临 床症 状 4.2.1 最急 性型 主要 表现 为：发病突 然，体温 高 达 41.5，精 神沉 郁；呼吸困 难，血液 循环 衰竭，在鼻、耳、腿 和躯 体末 稍表现 发绀，很 快死 亡；有的病 例看 不到 任何 临床 症状，突然 死亡，通 常于 口腔和 鼻孔 流出 大量 的血 色分泌 物。4.2.2 急性 型主要 表 现为：呼吸髙 度困 难，张口呼 吸，严重 腹式 呼吸，呈犬 坐 姿势，体温 可达 40.5 41，表 现精 神沉郁，拒 食；死亡前 鼻孔 流出 大量 带血 泡沫状 液体。4.2.3 慢性 型主要 表 现为：在急性 症状 消失 之后，往 往转成 亚急 性或 慢性 型。此期很 少有 发热 或者 不发 热；见咳嗽、喘 气，运动 时更 加明显，生 长不 良。4.2.4 其他 表现 为：流产，尤 以SPF 猪群 多见；胸膜肺 炎放 线杆 菌 3 型菌 株感染 多为 慢性 型经 过，且 并发关 节炎、心 内膜 炎及 不 同部位 的脓 肿。4.3 病 理剖 检特征 4.3.1 本病 的病 变仅 出现 在胸腔 的组 织器 官。肺 炎 病变大 多为 双侧 性、局 灶 性，病变 在膈 叶为 主，往 往涉及心 叶和 间叶，病 变部 与健部 界限 清楚。4.3.2 最急 性型 病理 剖检 特征为：以泛发 性纤 维素 性出 血性 胸膜肺 炎病 变为 主要 特征；有败血 症变 化，肺脏 严重 充血、出血，呈 暗红 色，膨大；肺病变 组织 脆弱 易碎，往 往切面 不整，流 出大 量血 色液体，胸 腔中 有大 量的 血色液 体。4.3.3 急性 型 病 理剖 检特 征为：肺脏严 重出 血，呈暗 红色，肿胀 实变，肺 脏切 面迅 速渗出 血液；气管和 支气 管充 满泡 沫样 血色黏 液分 泌物，胸 腔中 有血色 液体。4.3.4 慢性 型 病 理剖 检特 征为：最常见 在膈 叶上 有大 小不 等的坏 死结 节，周围 包有 结缔组 织形 成的 厚包 囊，坏死结 节有 的在 肺内部，有的 突出 于肺 表面；剖检见 严重 的心 包炎，心 内膜有 出血 点。肺 脏表 面 覆盖纤 维素 性渗 出物，或 者与胸 壁粘 连，或DB1303/T 286 2020 3 者肺脏 表面 和实 质有 脓性 病灶。4.4 病 原学 诊断 4.4.1 病料 采集 病料采 集方 式 如 下：a)活体病 料采 集：用棉 拭子 伸入鼻 腔采 集分 泌物，放 入无菌 试管 中立 即送 回实 验室；b)死后病 料采 集：无菌 采集 具有典 型病 变的 肺组 织、胸水、鼻及 气管 渗出 物，立即接 种培 养基 或送回实 验室；c)样品运 送：采集 的样 品，应在 4 条 件下，24 h 内 送回实 验室。4.4.2 涂片 镜检 涂 片作 常规革 兰氏 染 色镜检，APP 为革兰 氏染 色 阴性，两极着 染略 深的小 球杆菌 或纤细 杆菌。继 代培养中 呈明 显多 形态，幼 龄培养 物中 偶有 成丝 状。4.4.3 细菌 分离 培养 无 菌将 病料接 种到TSA+培养 基，置 于5%CO2环境37 培养18 24 h（烛 缸培养 亦可），观 察细 菌的生长 情况。分 离菌 在TSA+培养 基平 板上 长出 圆形、表面 光滑、灰 白色 半透 明的水 珠样 菌落。4.4.4CAMP（第 一次 出现，应写全 程，或者 是在 缩略 语中表 明）试验 用金黄 色葡 萄球 菌在7%鲜 血琼脂 平板 中央 划一 条直 的接种 线，然后 在线 的两 侧距离3 mm 5 mm处垂直划线 接种 每个 待检 培养 物，37 培养18 h 24 h，两种细 菌交 界处 形成 箭头 状的溶 血区 为CAMP试验阳性。4.5 血 清学 诊断 4.5.1 ELISA 试验 用针对ApxIV 毒 素建 立的ELISA 鉴 别诊 断试 剂盒，具 体 试验方 法按 试剂 盒说 明书 操作。4.5.2 改良 补体 结合 试验 操作程 序参 照 NY/T 537-2002 进 行。4.6 PCR 诊断 4.6.1 引物 参考 Boss JT 等 设计 的APP Apx IV 通 用检 测引 物，上 游引物5-TTATCCGAACTTTGGTTTAGCC-3，下游引 物5-CATATTTGATAAAACCATCCGTC-3。扩 增 目的片 段长 度为418 bp。4.6.2 模板 制备 挑取APP 单 菌落 于20 L灭菌 生理 盐水 中，在旋 窝 震荡仪 上轻 径混 匀后 作为PCR 反应 模板。4.6.3 PCR 扩增 体系 反 应总 体积 为15 L，其 中 2Taq master Mix 7.5 L，10mol/L 上、下游引 物各1 L，DNA 模板2.0L，灭 菌双 蒸水3.5 L。DB1303/T 286 2020 4 4.6.4 PCR 反应 程序 95 5 min，95 30 s，55 30 s，72 45s，30 个 循环，72 5 min。取6 L PCR 扩增产 物，置于1%琼脂 糖凝 胶中80 V 电泳25 min 检测。5 防治 5.1 加 强生 物安 全措 施 坚持自 繁自 养、全 进全 出 及“两 点式”或“三 点式”饲养 方式，如需 引进 公 猪或后 备母 猪时，应进行血清 学检 测，避免 引进 阳性种 猪，做好 引种 及猪 群转出 隔离。严 格控 制场 内外人 员出 入；车辆 应 专 车专用，彻底 消毒；猪舍 及 环境应 定期 消毒，每 次消 毒要全 面、彻底、不留 死 角，保 证药 物浓 度和 药物 作用时间。5.2 加 强饲 养管 理 按 GB/T 17824.2 执行，减 少断奶 后混群 和转 栏的频 率，尽 可能做 到保 育阶段 的全进 全出；注意 猪群密度 合理、猪 舍良 好通 风；减 少人 员串 栏引 起的 交叉传 播。5.3 免 疫预 防 疫苗接 种是 生产 中控 制猪 传染性 胸膜 肺炎 的有 效手 段。根据 本 地区 流行 菌株 的血清 型，选择 多价 灭活疫苗 进行 免疫。5.4 药 物防 治 5.4.1 对于 发病 的猪 场，最好分 离致 病菌，通过 药 敏试验 筛选 敏感 药物，有 针对 性 进行 防治。5.4.2 在治 疗过 程中 所有 药物的 使用 应符合 NY 5030-2006、NY 5031-2001、中 华人民 共和 国兽 药典、兽药 质量 标准 的 规定。DB1303/T 286 2020 5 附 录 A（附录 应在 正文 中提 及）（规范 性）培养基 配置 A.1 胰蛋白 胨大 豆琼 脂培 养基（TSA 培养 基）称取38 g TSA 培养 基于1L 蒸馏水 中，加 热煮 沸至完 全溶解，121 灭高 压菌15 min 后，冷却 至50 后倒平 皿。A.2 TSA+培养 基 称取38 g TSA 培 养基 于1L 蒸 馏水中，加热煮 沸至 完全 溶解，121 灭 高压 菌15 min 后，冷却 至55，加入10 g/mL NAD 和5%小 牛血清 混匀 后倒 平皿。A