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ICS 65.0 20.99 B 30/3 9 DB45 广西壮族自治区地方标准 DB 45/T 16732018 荸荠茎尖组织培养技术规程 Technical specification for tissue culture seedl ing of Chinese water chestnut 2018-03-25 发布 2018-04-25 实施广西壮族自治区质量技术监督局 发布 DB 45/T 1 67 3 20 18 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 引用规范 性文件.1 3 术语和定 义.1 4 设施设备 及常用化学试剂.1 5 设施、设 备及用具的清洁与消毒.1 6 培养室环 境条件控制.2 7 工艺流程 及操作要求.2 8 合格组培 苗形态指标.3 9 生产管理 规章制度.3 附录 A(资料 性附录)M S 培养基成分 及母液配制.4 附录 B(资料 性附录)培养基植物生长调节剂的常用浓度及配制方法.5 DB 45/T 1 67 3 20 18 II DB 45/T 1 67 3 20 18 III 前 言 本标准按照G B/T 1.12 0 09给出的规 则起草。本标准由广西壮族自治区农业科学院提出并归口。本标准起草单位:广西壮族自治区农业科学院生物技术研究所、广西标准化协会。本标准主要起草人:陈丽娟、江文、高美萍、董伟清、蔡炳华、颜梅新、何芳练、蒋慧萍、张尚 文、欧昆鹏、王艳、黄诗宇、韦绍龙、闭志强、罗松、谢宏昭、桂杰、韦泽昭、苏宾。DB 45/T 1 67 3 20 18 1 荸荠茎尖组织培养生产技术规程 1 范围 本标准规定了荸荠(El o ch ar is tu be r os e S ch ul ut)茎尖组织培养的术语和定义、设备设施及常用 化学试剂、设施、设备及用具的清洁与消毒、培养室环境条件控制、工艺流程及操作要求、合格组培苗 形态指标、生产管理规章制度等技术要求。本标准适用于广西境内荸荠茎尖组培苗生产。2 引用规范性文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。NY/T 2 30 6 20 13 花卉 种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 荸荠 荸荠又称马蹄。莎草科荸荠属浅水性宿根草本植物。3.2 荸荠茎尖组织培养 以荸荠球茎主芽茎尖或侧芽茎尖作为外植体,在人工控制的条件下,放在含有营养物质和植物生长 物质等组成的培养基中,使它得以继续生长、分化形成完整植株的过程。4 设施设备及常用化学试剂 参照NY/T 2 3 06 20 13中 的 第4章执行。5 设施、设备及用具的清洁与消毒 参照NY/T 2 3 06 20 13中 的 第6章、8.1、8.4、8.5、8.6、8.7 和11.5 执行。DB 45/T 1 67 3 20 18 2 6 培养室环境条件控制 6.1 温度 25 30。6.2 湿度 保持相 对 湿 度30 40。6.3 光照 接 种 后,先 培养室 全暗 培养5 d 7 d,然后转入光 培养,光 照强度1 00 0 lx 2 00 0 lx,1 0 h/d 12 h/d。7 工艺流程及操作要求 7.1 工艺流程 培养基母液 配制与 保存 培养基配制 材 料 选择 与消毒 接 种 初代 培养(单芽)继 代 培养(丛 芽)生根 材 料 选择 与培养 炼 苗(淘汰 不合格苗)。7.2 操作要求 7.2.1 培养基母液配制与保存 MS基本培养 基成分及母液配制 见 附录A。植物生长调节剂的配制方法 参见 附录B。配制 好 的母液可放 入 4 的 冰箱 中 保存待 用。具体操作 参 照NY/T 2 3 06 20 13中 的7.3。7.2.2 培养基配制 50 60 热 水+卡拉胶+量取 母液+糖加 水定 容搅匀 调 整pH 分 装封 口 灭 菌凝固。具 体操作 参 照NY/T 23 06 20 1 3中的7.4。7.2.3 材料选择与消毒 选 用种质 纯正、遗传 性 状稳 定的 品 种。取无病虫危害 球茎,用清水 漂洗干净,凉干表面 水,用70 酒精擦拭表 面,切取健 壮的 顶 芽和 侧芽,置 于 无菌瓶 内,然后 在 超净 台上,用7 0 酒精浸泡 2 min,无 菌 水 冲洗 2 次后,再 用0.1 升汞浸泡 10 m in 15 mi n,再 用 无菌 水 冲洗 3 5 次。7.2.4 接种 在 无菌虑纸(或 铝片)上切取 含1 2 个 节(0.1 cm 0.2 cm)的 芽尖放 入 备 好 的MS培养 基。7.2.5 初代培养(单芽)在(26 2)条件下培养1 5 d后,选择 生长 势 强的 材 料 转接到 MS+6-BA 1 mg 2.5 mg/L+N AA 0.0 1 mg 0.1 mg/L 培养基 上进行初代 培养,诱导丛 生芽。同时取材送病 毒 检测,淘汰带 毒 株系。7.2.6 继代培养(丛芽)将检测 合格的 丛 生芽分 切 成 带 有2 3 个 芽 点 的 小块 放 入 备 好 的MS继 代 培养 基 上 培养。一个 继 代周 期 25 d 30 d。在培养 过 程中,控制 增殖系数 在3.0 5.0范围,继 代次数 10 周 期。DB 45/T 1 67 3 20 18 3 7.2.7 生根材料选择与培养 在继代材料中选择叶色正常、生长健壮的材料,接种于袋装MS+P P 333 0.1 mg/L0.35 mg/L+NA A 0.5 mg/L1 mg/L生根培养基 上,然后放 置 在 温 度(28 2)的 光 照培养室内 培养7 d10 d,待 根 系萌动,苗高5 cm 8 cm时,即可 移到炼苗棚培养。7.2.8 炼苗(淘汰不合格苗)在常温(1540)自然散射光 较强的大棚 炼苗25 d35 d,使叶状茎转粗变绿、根 系粗壮、株 高7 cm,即 可成为商品组培苗。淘汰生长异常(畸形、白化、,缺绿、叶状茎细弱等)的不合格苗。8 合格组培苗形态指标 无污染,植株形态正常,且符合表1 指标要求。表1 荸荠组培苗形态指标 指标名称 指标值 株高(cm)7 叶状茎粗(mm)0.5 单株叶状茎数 3 白根数(条)2 植株叶色 浅绿色浓绿 9 生产管理规章制度 9.1 生产管理制度 制定完善的规章制度和操作规程,并有效执行。9.2 生产记录及档案建立 生产记录及档案建立内容包括有:母液配制及培养基配制记录、培养基高压蒸汽灭菌工作记录、员 工接种工作记录、组培材料继代和生根入出库记录、品种材料生产档案和产品销售记录。DB 45/T 1 67 3 20 18 4 A A 附 录 A(资料性附录)M S 培养基成分及母液配制 MS培养基成 分及母液配制 见表 A.1。表A.1 M S 培养基成分及母液配制表 母液编号 成分种类 化合物名称 规定用量(mg/L)扩大倍数 称取量(mg)母液体积(mL)配制 1 L培养基吸取母液量(mL)母液 1 大量元素 NH 4 NO 3 KNO 3 MgSO 4 7H 2 O KH 2 PO 4 CaCl 2 2H 2 O 1 650 1 900 370 170 440 10 10 10 10 10 16 500 19 000 3 700 1 700 4 400 1 000 100 母液 2 微量元素 MnSO 4 4H 2 O ZnSO 4 7H 2 O H3BO 3 KI NaMoO 4 2H 2 O CuSO 4 5H 2 O CoCl 2 6H 2 O 22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 100 100 100 100 100 100 100 2 230 860 620 83 25 2.5 2.5 1 000 10 母液 3 螯合铁 Na 2-EDTA FeSO 4 7H 2 O 37.3 27.8 100 100 3 730 2 780 1 000 10 母液 4 有机质 甘氨酸 VB1 烟酸 VB6 肌醇 2.0 0.1 0.5 0.5 100 50 50 50 50 50 100 5 25 25 5 000 500 10 蔗糖 20 000 mg/L3 0 000 mg/L 固化物 3 500 mg/L5 00 0 mg/L 琼脂或卡拉胶 pH 5.86.2 水 母液用蒸馏水或重蒸水,培养基可用去离子水或自来水。B DB 45/T 1 67 3 20 18 5 附 录 B(资料性附录)培养基植物生长调节剂的常用浓度及配制方法 培养基植物生长调节剂的常用浓度及配制方法见表B.1。表B.1 培养基植物生长调节剂的常用浓度及配制方法 类别 种类 常用浓度(mol)配制方法 细胞分裂素 6BA 13 用适量0.1M 盐 酸(HCl)溶解,然后加蒸馏水定容。KT 0.52.5 生长素 IAA 0.011.0 用适量0.1 M盐 酸(HCl)或 0.1 M氢氧化钠(NaOH)溶解,然后加蒸馏水定容。NAA 0.011.0 植物延缓剂 PP333 0.10.35 用少量纯酒精溶解,然后加蒸馏水定容。中华人民共和国广西地方标准 荸荠茎尖组织培养技术规程 DB45/T 1673 2018 广西壮族自治区质量技术监督局统一印刷 版权专有 侵权必究
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