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ICS 6 5.0 2 0.2 0B 0 5DB14山 西 省 地 方 标 准D B 1 4/T 1 5 9 1 2 0 1 8草莓 脱毒原 原种苗 制备技 术规程2 0 1 8-0 1-1 0 发 布 2 0 1 8-0 3-1 0 实 施山 西 省 质 量 技 术 监 督 局发 布D B 1 4/T 1 5 9 1 2 0 1 8I目次前 言.I I1 范 围.12 规 范 性 引 用 文 件.13 术 语 和 定 义.14 外 植 体 的 选 择.15 脱 毒 与 检 测.16 茎 尖 的 初 代 培 养.27 组 培 苗 的 继 代 扩 繁.28 组 培 苗 的 生 根 诱 导.29 组 培 苗 的 驯 化 移 栽.3附 录 A（资 料 性 附 录）草 莓 脱 毒 原 原 种 苗 组 培 生 产 记 录 表.4附 录 B（资 料 性 附 录）草 莓 脱 毒 原 原 种 苗 出 圃 登 记 表.5D B 1 4/T 1 5 9 1 2 0 1 8I I前 言本 标 准 按 照 G B/T 1.1-2 0 0 9 给 出 的 规 则 起 草。本 标 准 由 山 西 省 农 业 科 学 院 提 出 并 归 口。本 标 准 起 草 单 位：山 西 省 农 业 科 学 院 果 树 研 究 所。本 标 准 主 要 起 草 人：刘 伟、樊 新 萍、王 国 平、陈 冲、霍 辰 思、曹 贵 寿、史 华 平、尚 勇 进。D B 1 4/T 1 5 9 1 2 0 1 81草 莓 脱 毒 原 原 种 苗 制 备 技 术 规 程1 范 围本 标 准 规 定 了 草 莓 脱 毒 原 原 种 苗 制 备 的 术 语 和 定 义、外 植 体 的 选 择、脱 毒 方 法、茎 尖 的 初 代 培 养、组 培 苗 的 继 代 扩 繁、生 根 诱 导 及 驯 化 移 栽。本 标 准 适 用 于 草 莓 脱 毒 原 原 种 苗 的 制 备。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 标 准。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本 文 件。N Y/T 4 0 6 脱 毒 草 莓 种 苗 病 毒 检 测 技 术 规 程3 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件。3.1草 莓 脱 毒 原 原 种 苗脱 毒 的 草 莓 组 培 苗 移 栽 于 无 草 莓 病 源、虫 源 的 隔 离 区 内 成 活 的 植 株。3.2微 茎 尖 脱 毒从 匍 匐 茎 上 切 取 约 0.2 m m 茎 尖 分 生 组 织 接 种 至 培 养 基 中，分 化 出 的 组 培 苗 可 有 效 脱 除 病 毒。4 外 植 体 的 选 择4.1 选 择 标 准选 取 健 壮、无 病、开 花 结 果 正 常 的 草 莓 植 株 作 为 母 株，采 集 刚 抽 出 且 叶 片 未 展 开 的 匍 匐 茎 作 为 外 植体 材 料。4.2 采 集 时 期外 植 体 宜 在 结 果 后 期 匍 匐 茎 大 量 抽 生 阶 段 进 行 采 集。5 脱 毒 与 检 测5.1 脱 毒 方 法D B 1 4/T 1 5 9 1 2 0 1 82采 用 微 茎 尖 脱 毒 法 对 草 莓 匍 匐 茎 外 植 体 材 料 进 行 脱 毒 处 理。5.2 病 毒 检 测依 据 N Y/T 4 0 6 的 要 求 执 行。6 茎 尖 的 初 代 培 养6.1 初 代 培 养 基 的 选 择草 莓 茎 尖 初 代 培 养 的 培 养 基 为 M S+0.5 m g/L 1.0 m g/L 6-B A，添 加 蔗 糖 3 0 g/L，调 节 培 养 基 p H 值至 5.8。6.2 外 植 体 消 毒 方 法切 取 匍 匐 茎 顶 端 2 c m 左 右 作 为 外 植 体 进 行 消 毒，流 水 冲 洗0.5 h 2 h。在 超 净 工 作 台 下，用 7 5%酒精 将 外 植 体 浸 泡 3 0 s，再 用 1.0%次 氯 酸 钠 消 毒 1 0 m i n 1 5 m i n 或 0.1%升 汞 溶 液 消 毒 5 m i n 1 0 m i n，无菌 水 冲 洗 3 5 次。所 用 消 毒 液 与 外 植 体 体 积 的 比 例 约 为 1 0:1。6.3 茎 尖 分 生 组 织 切 取将 消 毒 后 的 外 植 体 用 无 菌 滤 纸 吸 干 水 分。在 解 剖 镜 下 用 镊 子 将 外 植 体 顶 端 一 层 一 层 小 心 剥 开，直 至露 出 茎 尖 分 生 组 织 部 分，用 锋 利 的 解 剖 刀 切 取 约 0.2 m m 的 茎 尖，接 种 于 初 代 培 养 基 中。6.4 初 代 培 养 条 件初 始 接 种 的 茎 尖 暗 培 养 2 d，之 后 转 置 于 常 规 培 养 条 件 下 培 养，培 养 温 度 2 5，光 照 强 度3 0 0 0 L u x 5 0 0 0 L u x，光 照 时 间 每 天 1 4 h 1 6 h，相 对 湿 度 7 0%7 5%。茎 尖 组 织 在 该 培 养 条 件 下 生 长 约 5 0 6 0 d形 成 幼 小 无 根 植 株 后 即 可 转 至 继 代 培 养 阶 段。7 组 培 苗 的 继 代 扩 繁7.1 继 代 培 养 基 的 选 择适 宜 草 莓 继 代 扩 繁 的 培 养 基 为 M S+0.1 m g/L 0.3 m g/L 6-B A+0.1 m g/L N A A，添 加 蔗 糖 3 0 g/L，调 节 培 养 基 p H 值 至 5.8。7.2 继 代 过 程 的 条 件 控 制草 莓 组 培 苗 继 代 培 养 条 件 为：培 养 温 度 2 5，光 照 强 度 3 0 0 0 L u x 5 0 0 0 L u x，光 照 时 间 每 天 1 4 h 1 6 h，相 对 湿 度 7 0%7 5%。继 代 培 养 每 隔 3 0 4 0 d 需 继 代 一 次。用 于 制 备 脱 毒 原 原 种 苗 的 组 培 苗 在 继代 次 数 上 应 控 制 在 7 次 以 内，总 继 代 培 养 时 间 不 宜 超 过 一 年。即 草 莓 组 培 苗 应 在 每 年 重 新 制 备。组 培 生产 过 程 应 参 照 附 录 A.1 进 行 详 细 登 记。8 组 培 苗 的 生 根 诱 导8.1 生 根 培 养 基 的 选 择诱 导 草 莓 生 根 的 培 养 基 为 1/2 M S+0.1 m g/L N A A，添 加 蔗 糖 3 0 g/L，调 节 培 养 基 p H 值 至 5.8。D B 1 4/T 1 5 9 1 2 0 1 838.2 生 根 过 程 的 条 件 控 制用 生 长 健 壮 且 无 明 显 变 异 的 组 培 苗 进 行 生 根 诱 导。选 择 高 度 在 2 c m 以 上 的 组 培 幼 苗 接 种 至 生 根 培 养基 进 行 生 根。一 般 无 根 苗 转 接 至 生 根 培 养 基 培 养3 0 d 左 右 即 有 多 条 根 系 产 生，此 时 即 达 到 驯 化 移 栽 的 条件。生 根 阶 段 的 培 养 条 件 与 继 代 过 程 相 同。9 组 培 苗 的 驯 化 移 栽9.1 组 培 苗 的 炼 苗 措 施将 达 到 驯 化 移 栽 条 件 的 组 培 苗 移 至 温 室，在 自 然 光 条 件 下 炼 苗 7 d 左 右，控 制 温 室 内 温 度 3 0，每 天 1 0：0 0 1 5：0 0 需 进 行 适 当 遮 荫，避 免 日 光 曝 晒。采 用 闭 盖 炼 苗2 d、松 盖 炼 苗 2 d、开 盖 炼 苗3 d 的 方 式 使 组 培 苗 逐 渐 适 应 瓶 外 环 境。9.2 移 栽 基 质 的 准 备移 栽 基 质 的 成 分 配 比 草 炭:蛭 石:珍 珠 岩=4:3:1，添 加 复 合 肥 料（N:P 2 O 5:K 2 O=2 0:1 0:2 0）2 0 0 g/m3。移 栽 容 器 采 用 5 0 孔 育 苗 穴 盘，提 前 装 好 基 质 并 浇 透 水 备 用。9.3 组 培 苗 移 栽 及 栽 后 管 理9.3.1 移 栽 时 间 与 方 法组 培 苗 炼 苗 后 叶 片 舒 展 变 成 深 绿 色 且 出 现 表 皮 毛，此 时 即 可 进 行 移 栽。移 栽 适 宜 在 晴 天 的 傍 晚 或 阴天 进 行。移 栽 时 需 将 幼 苗 用 镊 子 小 心 地 从 瓶 中 夹 出，用 清 水 将 根 部 的 培 养 基 清 洗 干 净，然 后 将 幼 苗 在 7 5%百 菌 清 可 湿 性 粉 剂 8 0 0 1 0 0 0 倍 液 浸 泡 杀 菌 1 0 m i n。杀 过 菌 的 幼 苗 即 可 移 栽 至 育 苗 穴 盘，移 栽 时 应 注 意使 根 系 保 持 舒 展 直 立 的 状 态，以 利 于 新 根 的 发 生 与 幼 苗 的 成 活。9.3.2 移 栽 后 管 理移 栽 后 将 育 苗 穴 盘 整 齐 摆 放 于 温 室，然 后 需 立 即 浇 水，并 搭 建 小 拱 棚 外 覆 薄 膜 保 湿。第 一 遍 水 需 浇透，以 利 于 迅 速 发 根，以 后 每 天 上 下 午 需 各 浇 水 一 次。移 栽 后 需 仔 细 观 察 幼 苗 状 态，及 时 控 制 温 室 内 环境 条 件。移 栽 一 周 内 温 室 内 温 度 应 控 制 在 2 5 3 0，湿 度 7 0%以 上，并 且 晴 天 的 1 0：0 0 1 5：0 0 需特 别 注 意 遮 阴。移 栽 一 周 后 草 莓 植 株 挺 立 且 有 新 叶 发 生 则 证 明 移 栽 成 活。9.4 脱 毒 原 原 种 苗 出 圃脱 毒 原 原 种 苗 达 到 3 叶 1 心 时 即 达 到 出 圃 标 准。出 圃 的 草 莓 脱 毒 原 原 种 苗 应 参 照 附 录 B.1 中 的 出 圃 登记 表 进 行 严 格 登 记，实 行 可 追 溯 管 理。D B 1 4/T 1 5 9 1 2 0 1 84A A附 录 A（资 料 性 附 录）草 莓 脱 毒 原 原 种 苗 组 培 生 产 记 录 表表 A.1 给 出 了 草 莓 脱 毒 原 原 种 苗 组 培 生 产 过 程 中 需 要 登 记 记 录 的 内 容。表 A.1 草 莓 脱 毒 原 原 种 苗 组 培 生 产 记 录 表接种时间 品种名称 继代次数 接种数量（瓶）备注D B 1 4/T 1 5 9 1 2 0 1 85B B附 录 B（资 料 性 附 录）草 莓 脱 毒 原 原 种 苗 出 圃 登 记 表表 B.1 给 出 了 草 莓 脱 毒 原 原 种 苗 出 圃 销 售 过 程 中 需 要 登 记 的 内 容。表 B.1 草 莓 脱 毒 原 原 种 苗 出 圃 登 记 表出圃时间 品种名称 苗龄（天）出圃数量（株）出圃去向 备注_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
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