水质　环境激素类化合物的测定　固相萃取-液相色谱-串联质谱法DB37／T 4158—2020.pdf

ICS 13.060 C 51 DB37 山东省地方标准 DB37/T 4158 2020 水质 环境激素类 化合物的 测定 固相萃取-液相色谱-串联质谱 法 Water quality Determination of environmental hormones Solid phase extraction-Liquid chromatography-Tandem mass spectrometry 2020-09-25 发布 2020-10-25 实施 山 东 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB37/T 4158 2020 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 方 法原 理.1 4 试 剂和 材料.1 5 仪 器和 设备.2 6 样品.2 7 分 析步 骤.3 8 结 果计 算与 表示.6 9 精 密度 和准 确度.7 10 质 量保 证和 质量 控制.7 附录A（资 料性 附录）方法的 精密 度和 准确 度.8 DB37/T 4158 2020 II 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起草。本标准 由山 东省 住房 和城 乡建设 厅提 出并 组织 实施。本标准 由山 东省 城镇 给水 排水标 准化 技术 委员 会归 口。本标准 起草 单位：山东 省 城市供 排水 水质 监测 中心、济 南市 疾病 预防 控制 中 心、山东 珞珈 计量 检测有限公 司、山 东省 分析 测 试中心、国家 城市 供水 水 质监测 网青 岛监 测站、中 国兵器 工业 集团 第五 三研 究所。本标准 主要 起草 人：贾瑞 宝、孙 韶华、赵 清华、宋 艳、刘 莉、于志 刚、赵汝 松、王 晓 芳、高 岩立、荀其宁、梁 玉、徐桂 菊、刘仲。DB37/T 4158 2020 1 水质 环 境激素类 化合物 的测定 固 相萃 取-液相色 谱-串联质 谱法 警告：实 验中 使用 的溶 剂 和试剂 均具 有一 定的 毒性，对 健康 具有 潜在 的危 害，应 尽量 避免 与这 些化学品的 直接接 触。样品制 备过程 应在通 风橱 中进行，操作 时应按 规定 要求佩 戴防护 器具,避免接 触皮 肤和衣物。1 范围 本 标 准 规定 了 测定 生活 饮用 水 及 其水 源 水中 的环 境激 素 类 化合 物 的固 相萃 取-液相色谱-串 联质 谱法。本标准 适用于 生活饮 用水 及其水 源水的 17 雌二 醇、雌 三醇、17-炔雌 醇、壬基 酚、4-正辛 基酚、双 酚A、四 溴双 酚A、雌酮、己烯 雌酚、三 氯生 和三氯 卡班 等11 种环 境激 素类化 合物 的测 定。若取水 样1 000 mL，浓缩 至1 mL，则方 法检 出限 分别 为：17 雌二 醇、雌三 醇、17-炔雌 醇、壬基酚、4-正 辛基 酚、双 酚A、四溴 双酚A 均为2 ng/L，雌酮、己烯 雌酚、三氯 生、三氯 卡班 均为0.2 ng/L；测定下 限分别 为：1 7 雌二醇、雌三 醇、1 7-炔 雌醇、壬基酚、4-正辛基 酚、双 酚A、四溴双 酚A均为8 ng/L，雌酮、己 烯雌 酚、三 氯生、三 氯卡 班均 为0.8 ng/L。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引 用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 5750.22006 生 活 饮用水 标准 检验 方法 水 样的采 集与 保存 GB/T 5750.32006 生 活 饮用水 标准 检验 方法 水 质分析 质量 控制 GB/T 32465 化 学分 析方 法验证 确认 和内 部质 量控 制要求 GB/T 33087 仪 器分 析用 高纯水 规格 及试 验方 法 HJ/T 91 地表 水和 污水 监 测技术 规范 HJ/T 164 地下 水环 境监 测技术 规范 3 方法原 理 本方法 采用固 相萃 取柱对 水中的11 种环 境激 素 类物 质进行 浓缩富 集，用洗脱 液（二 氯甲烷/丙酮）洗脱保 留在 萃取 柱上 的环 境激素 类物 质，然后 用液 相色谱-串 联质 谱仪 进行 定 性和定 量分 析。4 试剂和 材料 4.1 固相萃 取柱：HLB（6 mL，200 mg）或 等效 固相 萃取 柱。4.2 高纯水：水 质满 足GB/T 33087 的规 定。4.3 硫 酸（H2SO4）：优级 纯。4.4 二氯 甲 烷（CH2Cl2）：色 谱 纯。DB37/T 4158 2020 2 4.5 丙酮（CH3COCH3）：色谱 纯。4.6 载气：高纯 氮(99.999%)。4.7 乙腈（C2H3N）：色谱 纯。4.8 甲醇（CH3OH）：色 谱纯。4.9 环境激 素类 标准 物质：17-雌 二醇、雌 三醇、17-炔雌 醇、壬基 酚、4-正 辛 基酚、双 酚 A、四溴双 酚 A、雌酮、己 烯雌 酚、三 氯生、三 氯卡 班等 标准物 质，纯度 98%，有证标 准物 质。4.10 7 种环 境激 素的 标准 贮备 液：=1 0.0 mg/L。分别 称 取一定 量 1 7-雌二 醇、雌三醇、17-炔雌醇、壬 基酚、4-正辛 基酚、双 酚 A、四溴 双酚A 的 标准品（4.9），用 甲醇（4.8）溶解 并稀 释成 浓度 为10 mg/L 的 标准 贮备 液，于4 以下 冷藏 密封 避光 保存。4.11 4 种环 境激 素的 标准 贮备 液：=1.0 mg/L。称 取一 定 量的雌 酮、己烯 雌酚、三氯 生、三 氯卡 班（4.9）的标准 品，用甲 醇（4.8）溶解并 稀 释 成成 浓度 为 1.0 mg/L 的标 准贮 备液。4.12 7 种环 境激 素的 标准 使用 液：=1.0 mg/L。取 1 000 L 17-雌 二醇、雌 三 醇、17-炔雌 醇、壬基酚、4-正辛 基酚、双 酚A、四溴 双酚A 的标 准贮 备液（4.10），用甲 醇（4.8）稀释 并定 容 至 10 mL，配制 1 mg/L 的 标准 使用 液。于 4 以 下冷 藏密 封避 光保存。4.13 4 种环 境激 素的 标准 使用 液：=0.1 mg/。取1 000 L 雌 酮、己烯 雌酚、三 氯 生、三 氯卡 班的 标准贮备 液（4.11），用甲 醇（4.8）稀释 并定 容至10 mL，配制0.1 mg/L 的标 准使用 液。于 4 以 下冷藏密封 避光 保存。5 仪器和 设备 5.1 液相色 谱-串联 质谱 仪：配 有电喷 雾离 子源。5.2 色谱柱：C18 填 料或 者等 效 色谱柱。5.3 固相萃 取装 置。5.4 氮吹浓 缩装 置。5.5 样品瓶：2 mL，棕色 玻璃 瓶。5.6 采样瓶：棕 色玻 璃瓶，具 玻璃塞。5.7 微量注 射器：100 L 和1 000 L。5.8 容量瓶：10 mL。6 样品 6.1 样品采 集与 保存 按照HJ 91 和HJ/T 164 的 相 关规定 采集 样品。用 采样 瓶（5.6）采集 样品。按照GB/T 5750.22006 的 相关规 定贮 存样 品。样品 采集后 在4 下 冷藏 避光 保存，24 h 内完 成前 处理，7 d内 完成 样品 分析。若水样 中存 在残 留氯，加 入抗坏 血酸 去除 余氯。6.2 试样制 备 6.2.1 活化 依次用6 mL 甲醇（4.8）、6 mL高 纯水（4.2）对固 相 萃取柱（4.1）进行 活化。6.2.2 样品富 集 DB37/T 4158 2020 3 量取1 000 mL 水 样，加入 硫 酸（4.3）调节pH 为5 左右，以10 mL/min 流速 通过 活 化后的 固相 萃取 柱，完成固 相萃 取富 集。6.2.3 淋洗 用10 mL 高 纯水（4.2）以10 mL/min 流 速淋 洗萃 取柱，淋洗 完成 后用 氮气 吹干。6.2.4 洗脱 用10 mL 二氯甲 烷（4.4）/丙酮（4.5）（V:V=7:3）以1 mL/min 流 速洗 脱吸附 在固相 萃取柱 上的被测组分，收 集洗 脱液 至浓 缩管，氮气 吹至 近干，用1 mL 乙 腈（4.7）/高 纯水（4.2）（V:V=3:2）定 容，保存在 样品 瓶（5.5）中 待 测。6.3 空白试 样制 备 用高纯 水（4.2）代 替样 品，按照 与样 品（6.2）相 同 的步骤 制备 空白 试样。7 分析步 骤 7.1 液相色 谱条 件 7.1.1 流动相：A 相 乙 腈（4.7），B 相 高纯 水（4.2）。7.1.2 洗脱模 式及 洗脱 流速：采 用梯度 洗脱，洗 脱速 率 为0.2 mL/min，洗 脱条 件如 表 1 所 示。7.1.3 柱温：40。7.1.4 进样体 积：20 L。表1 流动相 梯度 条件 时间 min A 相%B 相%0 60 40 3 95 5 4 95 5 4.1 60 40 15 60 40 7.2 质谱条 件 7.2.1 离子源：电 喷雾 离子 源，负离子 模式。7.2.2 离子源 温 度：350。7.2.3 扫描方 式：MRM，多 反应 监 测条件 见 表 2。表2 质谱参 考参 数设 置 扫描时间 物质名称 母离子 子离子 Fragment V CE V 0 min 17 雌二醇 271.2 183*185 40 145*185 40 DB37/T 4158 2020 4 表2 质谱 参考 参数 设置（续）扫描时间 物质名称 母离子 子离子 Fragment V CE V 0 min 17-炔雌醇 295.2 159*180 36 145*180 40 雌三醇 287.2 171*190 38 143*190 55 雌酮 269.2 183*185 40 145*185 38 己烯雌酚 267.2 251*145 20 237*145 25 双酚 A 227.2 211*140 30 133*140 35 4 min 四溴双酚 A 538.8 443.8*140 35 415.9*140 45 三氯卡 班 313 160*100 10 126*100 25 三氯生 287 35*75 5 7.5 min 壬基酚 219.2 147*140 20 133*140 20 4-正辛基酚 205.2 106*120 15 注：带*为定量离子，带*为定性离 子。7.3 校准曲 线的 绘制 7.3.1 本方法 使用 外标 法定 量。7.3.2 校准系 列的 配制：取 6 个10 mL 容量 瓶，依次 准确 加 入 0.08 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.80 mL、1.00 mL 的 17-雌二醇、雌 三醇、17-炔 雌醇、壬基 酚、4-正 辛基 酚、双 酚 A、四 溴双 酚A的标准 使用 液（4.12）和 雌酮、己烯 雌酚、三 氯生、三氯 卡班 的标 准使 用液（4.13），用乙 腈（4.7）/高纯水（4.2）（V:V=3:2），定 容至 刻度，配制 成 浓度 为 8 g/L、10 g/L、20 g/L、40 g/L、80 g/L、100 g/L 的 1 7-雌二 醇、雌 三醇、17-炔雌醇、壬基 酚、4-正辛 基酚、双酚 A、四溴 双酚A和 0.8 g/L、1 g/L、2 g/L、4 g/L、8 g/L、10 g/L 的雌 酮、己烯 雌酚、三氯 生、三氯 卡班校准系 列溶 液。7.3.3 按照浓 度从 低到 高的 顺序 上机测 定，以浓 度为 横坐 标，以 峰面 积为 纵坐 标绘 制校准 曲线。7.4 样品测 定 7.4.1 采用自 动进 样器 进样，进 样量 为 20 L。7.4.2 将6.2 处理 后的 试样 上机 测定。7.4.3 环境激 素类 化合 物的 MRM 色谱图 见 图1 所 示。DB37/T 4158 2020 5 图1 各类环 境雌 激素 的 MRM 谱图 DB37/T 4158 2020 6 图1 各类 环境 雌激 素的MRM 谱图（续）7.5 空白 试 样测 定 按照与 样品 测定（7.4）相 同的步 骤进 行空 白试 样（6.3）的 测定。8 结果计 算与 表示 8.1 定性结 果 根据环 境激 素类 物质MRM 色 谱图中 的保 留时 间和 特征 离子对 进行 定性 分析。DB37/T 4158 2020 7 8.2 定量结 果 根据定 量离子的峰面积 外标法定 量。样品中环境 激素类物 质的质量浓度 x 按照公式（1）计算，测定结果 位数 的保 留与 测定 下限一 致，最多 保留 三位 有效数 字。x=.(1)式中：x 样品 中组 分质 量浓 度，单 位 为 微克 每升（g/L）；0 固相 萃取 洗脱 液质 量浓度，单 位 为 微克 每升（g/L）；Vt 固 相萃 取洗 脱液 浓 缩后定 容体 积，单位 为毫 升（mL）；Vs 水样 体积，单 位为 毫升（mL）。9 精密度 和准 确度 9.1 精密度 3家实 验室 分别 对 17-雌 二醇、雌三 醇、17-炔 雌 醇、壬 基酚、4-正 辛基 酚、双酚A、四溴 双酚A、雌酮、己烯 雌酚、三 氯生、三氯 卡班 等11 种环 境激 素进行 低、中、高浓 度的 纯水、地表 水、地下 水、出厂水和 管网 水加 标样 品进 行测定，实 验室 内的 相对 标准偏 差为1.2%26%，参见附 录表A.1 表A.2。9.2 准确度 3家实 验室 分别 对 17-雌 二醇、雌三 醇、17-炔 雌 醇、壬 基酚、4-正 辛基 酚、双酚A、四溴 双酚A、雌酮、己烯 雌酚、三氯 生、三氯 卡班 等11 种环 境激 素进行 低、中、高 浓度 的 地表水、地 下水、出厂 水 和管网水 加标 样品 进行 测定，加标 回收 率为73.1%96.2%，参 见附 录表A.1表A.2。10 质量保 证和 质量 控制 10.1 空白试 验 每批样 品应 做空 白试 验，测定结 果不 能超 过方 法的 检出限。10.2 校准曲 线要 求 分析样品 之前，应建立能够覆盖样 品浓度范围的至少6 个浓度点的校准曲线，曲线的相 关系数r2应大于0.995。10.3 平行样 平行双 样测 定结 果的 相对 偏差满 足GB/T 5750.32006 的要 求。10.4 基体加 标 基体加 标样 品的 加标 回收 率范围 满足GB/T 32465 的 要求。DB37/T 4158 2020 8 附 录 A（资 料 性附 录）方法的 精密 度和 准确 度 表A.1 7 种环 境激 素类 化合 物的 精密度 与准 确度 样品 加标量 ng/L 加标回收率%实验室内相对标准偏差%四溴双酚A 雌三醇 双酚 A 17-雌二醇 炔雌醇 辛基酚 壬基酚 四溴双酚A 雌三醇 双酚 A 17-雌二醇 炔雌醇 辛基酚 壬基酚 纯水 5.0 10 91.0 124 83.0 92.1 82.4 111 76.6 113 66.0 73.5 75.8 88.5 62.8 108 4.2 16 3.29.8 2.26.9 2.512 3.022 4.9 14 4.2 19 10 20 75.0 128 80.6 98.7 82.3 108 72.0 110 54.9 90.4 84.4 99.4 86.1 111 1.8 5.1 2.66.5 1.4 11 2.315 2.816 2.618 6.7 26 20 50 78.4 117 66.9 98.4 72.2 105 64.8 86.5 40.9 96.4 71.0 94.6 63.0 94.4 1.2 6.8 4.59.2 4.3 12 2.712 6.714 3.310 5.7 19 地表水 5.0 10 76.4 90.0 76.4 91.2 90.0 110 55.4 90.0 58.3 90.0 75.2 90.0 90.0 114 6.3 15 2.410 1.34.9 2.813 4.212 5.412 3.9 19 10 20 66.8 105 81.4 86.9 88.0 91.3 67.2 98.4 66.7 81.4 95.2 96.7 95.0 119 2.9 5.3 3.07.4 2.54.2 3.0 8.1 4.08.1 3.5 7.4 1011 20 50 63.3 94.7 69.5 91.4 68.3 93.6 70.6 104 64.4 92.1 84.9 90.0 67.2 95.6 1.6 5.2 3.211 4.0 10 3.6 5.0 5.08.4 5.88.2 9.5 10 DB37/T 4158 2020 9 表 A.1 7 种环 境激 素类 化 合物的 精密 度与 准确 度（续）样品 加标量 ng/L 加标回收率%实验室内相对标准偏差%四溴双酚A 雌三醇 双酚 A 17-雌二醇 炔雌醇 辛基酚 壬基酚 四溴双酚A 雌三醇 双酚 A 17-雌二醇 炔雌醇 辛基酚 壬基酚 地下水 5.0 10 73.8 90.0 79.1 90.2 90.0 109 74.1 90.0 61.5 100 89.6 90.0 90.0 122 3.811 4.116 2.24.2 1.521 3.320 4.9 14 3.0 25 10 20 66.8 99.0 61.4 91.6 84.5 102 62.7 82.2 55.1 77.4 93.8 97.8 53.2 103 4.65.7 4.76.4 3.95.8 4.5 7.8 3.216 7.3 8.8 6.8 14 20 50 63.3 84.8 84.4 94.9 74.3 99.8 76.9 85.4 64.4 91.3 77.4 98.6 80.7 100 5.06.1 3.85.2 3.6 10 3.2 8.1 6.210 5.9 6.2 7.7 16 出厂水 5.0 10 63.4 105 70.6 90.1 77.6 107 76.0 90.0 69.0 90.0 88.0 100 90.0 104 8.512 4.813 1.04.5 4.722 8.736 4.0 6.9 5.99.2 10 20 72.2 92.2 73.3 87.8 74.2 93.8 74.5 85.5 53.3 78.6 76.1 96.4 93.4 103 5.17.4 2.85.7 1.36.9 4.6 7.0 5.220 5.2 5.9 4.1 13 20 50 56.3 80.5 67.8 91.4 68.6 89.0 64.1 91.4 40.9 104 72.2 74.8 53.3 104 7.69.4 3.14.2 3.28.0 3.611 1013 4.0 6.4 6.1 13 管网水 5.0 10 67.6 98.8 62.9 100 81.4 108 50.2 100 70.4 101 85.9 100 100 111 7.312 4.012 2.16.6 8.713 6.414 2.5 10 5.7 22 10 20 72.2 96.3 79.9 91.8 86.3 93.3 65.0 83.3 64.5 80.3 81.2 91.4 100 109 2.99.1 3.28.0 2.64.1 2.86.4 5.312 2.5 6.8 5.9 14 20 50 60.2 81.0 71.5 92.3 73.5 95.9 71.5 84.5 58.0 95.0 71.2 74.5 69.0 96.4 5.07.8 2.84.8 4.05.8 2.0 9.5 6.612 5.4 7.5 5.48.2 DB37/T 4158 2020 10 表A.2 4 种环 境激 素类 化合 物的 精密度 与准 确度 样品 加标量 ng/L 加标回收率%实验室内相对标准偏差%雌酮 三氯生 三氯卡班 己烯雌酚 雌酮 三氯生 三氯卡班 己烯雌酚 纯水 0.5 2.0 55.8 72.3 86.8 99.8 51.2 98.1 67.1 96.2 1.49.6 5.26.6 2.44.6 2.611 2.0 4.0 70.9 98.4 81.9 95.6 57.7 88.4 52.6 70.5 1.47.2 3.04.9 1.34.7 2.65.5 4.0 20 78.4 89.6 76.2 92.3 50.7 101 77.4 86.5 2.3 12 1.57.0 1.92.8 1.83.4 地表水 0.5 2.0 62.1 89.7 87.4 90.0 75.6 90.0 70.5 90.3 5.79.7 2.06.3 1.54.4 3.214 2.0 4.0 66.1 92.6 88.0 91.3 97.5 114 54.2 71.1 4.24.6 5.57.6 1.64.3 1.212 4.0 20 71.9 102 69.0 93.6 104109 72.2 104 2.46.1 3.84.8 2.05.1 2.67.4 地下水 0.5 2.0 77.7 91.0 81.1 90.0 85.0 90.0 72.2 89.0 1.79.0 3.27.2 1.92.7 3.422 2.0 4.0 78.5 89.3 88.9 91.9 49.8 82.3 68.9 82.3 1.83.5 3.85.6 1.32.6 1.819 4.0 20 81.0 92.4 74.7 98.2 58.4 90.0 61.4 90.0 1.26.1 3.24.3 1.63.7 2.67.5 出厂水 0.5 2.0 84.3 90.0 83.0 90.0 90.0 106 72.8 90.0 1.8 14 2.912 2.02.3 3.019 2.0 4.0 64.3 78.9 78.0 89.4 88.3 90.5 56.8 71.9 2.08.4 3.15.6 1.25.4 2.425 4.0 20 65.7 86.3 61.3 87.8 82.7 97.2 51.1 87.8 2.34.2 4.26.1 1.82.1 2.616 管网水 0.5 2.0 79.3 96.0 78.0 100 100103 72.8 100 1.2 15 2.77.6 2.43.5 2.814 2.0 4.0 63.0 91.6 85.8 91.9 89.7 99.5 67.2 70.9 1.65.4 6.023 2.18.0 3.512 4.0 20 74.8 100 80.2 89.2 92.2 94.5 61.7 85.9 1.33.8 2.66.8 1.22.0 1.112 _