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I C S 1 3.0 6 0.0 1Z 1 6DB23黑 龙 江 省 地 方 标 准D B 2 3/T 2 7 5 0 2 0 2 0水 质 生 物 毒 性 的 测 定 发 光 细 菌快 速 测 定 法2 0 2 0-12-16 发 布 2 0 2 1-01-15 实 施黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局发 布D B 2 3/T 2 7 5 0 2 0 2 0I目 次前 言.I I引 言.I I I1 范 围.12 规 范 性 引 用 文 件.13 方 法 原 理.14 试 剂 和 材 料.15 仪 器 设 备.26 测 定.27 结 果 计 算 与 表 示.38 方 法 的 精 密 度.3附 录 A（资 料 性 附 录）结 果 判 定 参 考 内 容.4D B 2 3/T 2 7 5 0 2 0 2 0I I前 言本 文 件 按 照 G B/T 1.1-2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分：标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定 起草。请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利。本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 专 利 的 责 任。本 文 件 由 黑 龙 江 省 生 态 环 境 厅 提 出 并 归 口。本 文 件 参 与 起 草 单 位：黑 龙 江 省 生 态 环 境 监 测 中 心。本 文 件 主 要 起 草 人：王 鹏 杰、曹 胜、邢 延 峰、孟 庆 庆、李 博、胡 丽 娜、张 蕊、杨 宏 坤、姜 景 阳、关吉 鑫、李 经 纬、王 国 梁、李 海 智、芦 旭 峰、苏 晓 慧、于 宗 灵、柏 广 宇、李 慧。D B 2 3/T 2 7 5 0 2 0 2 0I I I引 言为 贯 彻 中 华 人 民 共 和 国 环 境 保 护 法 和 中 华 人 民 共 和 国 水 污 染 防 治 法 等 法 律 法 规，保 护 和 改善 生 态 环 境，保 障 人 体 健 康，制 定 本 文 件。D B 2 3/T 2 7 5 0 2 0 2 01水 质 生 物 毒 性 的 测 定 发 光 细 菌 快 速 测 定 法1 范 围本 文 件 规 定 了 水 质 生 物 毒 性 的 测 定 发 光 细 菌 快 速 测 定 法 的 方 法 原 理、试 剂 和 材 料、仪 器 设 备、测定、结 果 计 算 和 表 示 及 方 法 的 精 密 度。本 文 件 适 用 于 工 业 废 水，纳 污 水 体 及 实 验 室 条 件 下 可 溶 性 化 学 物 质 的 水 质 急 性 毒 性 监 测。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款。其 中，注 日 期 的 引 用 文 件，仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件；不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本文 件。G B/T 1 5 4 4 1-1 9 9 5 水 质 急 性 毒 性 的 测 定 发 光 细 菌 法3 方 法 原 理水 样 在 一 定 的 时 间 和 条 件 下 与 发 光 细 菌 接 触 后，发 光 细 菌 的 发 光 强 度 变 化 与 水 样 中 毒 性 组 分 总 浓 度呈 负 相 关 关 系，通 过 生 物 发 光 光 度 计 测 定 水 样 与 发 光 细 菌 接 触 一 定 时 间 后 的 发 光 抑 制 率 来 表 征 水 样 的 急性 毒 性 水 平。4 试 剂 和 材 料4.1 所 有 的 试 剂 除 另 有 说 明 外，均 应 为 符 合 国 家 标 准 的 分 析 纯 试 剂，蒸 馏 水 或 同 等 纯 度 的 水。4.2 超 纯 水，常 温 保 存。4.3 氯 化 汞 母 液（2 0 0 0 m g/L）。4.5 复 苏 稀 释 液（0.8 5%的 氯 化 钠 溶 液）。4.6 渗 透 压 液（1 7%的 氯 化 钠 溶 液）。4.7 青 海 弧 菌 Q 6 7。注：菌株冻干粉封装于透明小玻璃瓶中，于-1 8 至-2 0 下储存。使用前，添加复苏液使发光细菌恢复活性后用于毒性测试。D B 2 3/T 2 7 5 0 2 0 2 025 仪 器 设 备生 物 发 光 光 度 计 技 术 规 格：可 探 测 光 谱 范 围，3 2 0 n m 1 0 0 0 n m；探 测 结 果 范 围，0 6 5 5 3 5 R L U；最 快 检 测 时 间，5 m i n；相 对 发 光 强 度，0-2 0 0%；可 进 行 A T P 测 试；测 试 试 管，规 格 为 5 m l 的 反 应 试 管 和1 0 m l 的 测 试 试 管。6 测 定6.1 测 定 条 件6.1.1 室 温室 温 2 0-2 5，同 一 批 样 品 在 测 试 过 程 中 要 求 温 度 波 动 不 超 过 1。且 所 有 测 试 器 皿 及 试 剂，溶 液测 前 1 h 均 置 于 控 温 的 测 试 室 内。6.1.2 p H若 需 测 定 包 括 p H 影 响 在 内 的 急 性 毒 性，不 应 调 节 水 样 p H。若 需 测 定 排 除 p H 影 响 在 内 的 急 性 毒 性，需 将 水 样 和 复 苏 液（氯 化 钠 0.8 5 g/1 0 0 m l）p H 测 前 调 至 下 值：主 要 含 铜 的 水 样 为 4.5，主 要 含 其 他 金 属 水 样 为 5.4，主 要 含 有 机 化 合 物 水 样 为 7.0。6.2 测 定 步 骤6.2.1 试 管 的 排 列与 塑 料 或 铁 制 试 管 架 上 按 以 下 要 求 排 列 试 管 架：第 一 排，依 次 为 反 应 管 0 1-标 准 品、反 应 管 0 2-阴 性/阳 性 质 控 和 反 应 管 0 3-水 样；第 二 排，依 次 为 测 试 管 0 1-标 准 品、测 试 管 0 2-阴 性/阳 性 质 控 和 测 试 管 0 3-水 样。6.2.2 青 海 弧 菌 Q 6 7 冻 干 粉 剂 复 苏从 冷 冻 环 境（-1 8）中 取 出 青 海 弧 菌 Q 6 7 冻 干 粉（含 量 约 为 0.0 0 1 5-0.0 0 1 8 g）小 瓶，在 常 温 环 境（2 5 左 右）下 放 置 1 5 m i n 后，启 开 并 轻 敲 小 瓶，确 保 冻 干 细 菌 充 分 落 在 小 瓶 底 部。移 取 0.5 m L 0.8 5%的 复 苏液 或 3%的 复 苏 液 至 菌 种 中，摇 匀，放 置 1 0 m i n 后 可 以 使 用。6.2.3 仪 器 的 预 热 和 调 零打 开 生 物 发 光 光 度 计 电 源，预 热 1 5 m i n，调 零，备 用。6.2.4 测 试 的 步 骤按 下 列 步 骤 进 行 测 试：a）分 别 往 三 支 反 应 试 管 中 加 入 2 m l 的 标 准 品（稀 释 液），2 m l（1:1 9-稀 释 液：样 品）的 阴 性 质 控 及2 m l（1:1 9-稀 释 液：样 品）的 被 测 水 样；b）待 冻 干 粉 复 苏 时 间 到 后，分 别 往 反 应 管 中 加 入 5 0 l 冻 干 粉 复 苏 试 剂（注 意 混 匀）；c）混 匀 后，等 待 1 5 m i n 反 应 时 间；d）分 别 从 反 应 试 管 中 移 取 3 5 0 l 混 合 液 至 测 试 管 中（注 意 尽 量 不 要 溅 到 瓶 壁 上）；e）将 测 试 试 管 按 顺 序 分 别 放 入 到 主 机 中，最 终 结 果 以 R L I%发 光 强 度 表 示。D B 2 3/T 2 7 5 0 2 0 2 037 结 果 计 算 与 表 示7.1 计 算 结 果计 算 结 果 以 发 光 强 度 来 表 示。相 对 发 光 强 度 的 表 达 式：%100(%)11）标准品发光强度（）样品发光强度（相对发光强度ssRLI.（1）7.2 结 果 表 示用 氯 化 汞 表 达 样 品 毒 性，见 表 1。表 1 氯 化 汞 表 达 样 品 毒 性相对发光强度（R L I）抑制率（I R%）等当的H g C l 2 溶液浓度C H g（m g/L）毒性级别9 0%R L I 1 1 0%-1 0 I R 1 0 C H g 0.0 3 无毒8 0%R L I 9 0%1 0 I R 2 0 0.0 3 C H g 0.0 5 低毒5 0%R L I 8 0%2 0 I R 5 0 0.0 5 C H g 0.0 9 中毒3 0%R L I 5 0%5 0 I R 7 0 0.0 9 C H g 0.1 2 重毒0%R L I 3 0%7 0 I R 1 0 0 0.1 2 C H g 0.1 6 高毒R L I=0 I R=1 0 0 C H g 0.1 6 剧毒7.3 原 始 记 录 表原 始 记 录 表，见 表 2。表 2 原 始 记 录 表分析号加菌液时间（s）（反应开始，读到秒）测定时间（s）（反应分钟，读到秒）发光量 相对发光强度 备注8 方 法 的 精 密 度样 品 3 次 重 复 测 定 结 果 的 相 对 偏 差 应 不 大 于 1 5%。D B 2 3/T 2 7 5 0 2 0 2 04附 录 A（资 料 性 附 录）结 果 判 定 参 考 内 容A.1 干 扰 的 影 响水 样 的 色 度 会 对 测 量 结 果 产 生 影 响。A.2 水 样 预 处 理饮 用 水 的 测 试，需 要 考 虑 管 网 中 消 毒 剂 的 影 响，建 议 水 样 静 止 1 5 m i n 以 上 或 者 煮 沸 放 置 过 夜 即 可。_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
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