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ICS 67 X 04 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 5189.5 2020 天然植物 提取物中 危害成分 检测 第5 部分：万寿菊 提取物中 对氧基苯 胺的 测定 2020-06-28 发布 2020-07-28 实施 河 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB13/T 5189.5 2020 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。DB13/T 5189 天然 植物 提 取物中 危害 成分 的测 定 共分12 个部 分：第1 部 分：亚硝 酸盐 的测 定；第2 部 分：二氧 化硫 的测 定；第3 部 分：正己 烷、丙酮、乙酸 乙酯、甲 醇和 乙 醇5 种有 机溶 剂残 留的 测定；第4 部 分：辣椒 提取 物中 砷、铅、镉、铬、汞 的测 定；第5 部 分：万寿 菊提 取物 中对氧 基苯 胺的 测定；第6 部 分：万寿 菊提 取物 中乙氧 基喹 啉的 测定；第7 部 分：天然 番茄 红中 苯并 芘 的测 定；第8 部 分：辣椒 提取 物中 苏丹红 的测 定；第9 部 分：辣椒 提取 物中 叔丁基 对苯 二酚 的测 定；第10 部分：辣 椒红 中赭 曲 霉毒 素 A 的 测定；第11 部分：叶 黄素 中苯 的 测定；第12 部分：甜 菊糖 苷中 邻 苯二甲 酸酯 的测 定。本部分 为DB13/T 5189的 第5部分。本标准 由河 北省 市场 监督 管理局 提出。本标准 起草 单位：河 北省 食 品检验 研究 院、晨光 生物 科 技集团 股份 有限 公司、石 家 庄海关 技术 中心、清河县 食品 药品 检验 检测 中心。本标准 主要 起草 人：王红、张强、张 晓芳、匡 林鹤、牛瑜 琦、王敬、田 俊生。DB13/T 5189.5 2020 1 天 然植物 提取物中 危害成 分检测 第 5 部分：万寿菊 提取物 中对氧基 苯胺的 1 范围 本部分 规定 了 万 寿菊 提取 物 中对 乙氧 基苯 胺的 测定 方法。本部分 适用 于 万 寿菊 提取 物 中对 乙氧 基苯 胺的 测定。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的 应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引 用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分析 实验 室用 水规格 和试 验方 法 3 原理 万寿菊 提取物 的对 乙氧基 苯胺经 乙醇 超 声提 取，取 上清液 过膜，液相 色谱-串 联质谱 仪检测，外标法定量。4 试剂或 材料 除另有 规定 外，水为GB/T 6682 规 定的 一级 水，试剂 均为色谱 纯。4.1 试剂 4.1.1 丙酮（C3H6O）：色谱 纯。4.1.2 乙醇（C2H6O）：色谱 纯。4.2 标准品 4.2.1 对乙氧 基苯 胺标 准品（C8H11NO，CAS 号：156-43-4）：纯度 大 于99.0%，-18 冷冻储 藏。4.3 标准溶 液配 制 4.3.1 标准储 备液：准 确称 取对 乙氧基 苯胺 标准 品 50 mg（精确 至0.1 mg），用 乙 腈定容 至 50 mL，配制 成 1 mg/mL 的储 备液，于-18 冰箱 中冷 冻保 存。4.3.2 标准中 间液：准 确移 取适量 标准 储备 液，用乙 腈配 制成 100 ng/mL 的标 准中 间液。4.3.3 标准使 用液：准 确吸 取标 准中间 液 0 mL、0.2 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、5 mL、10 mL 于 7 个100 mL 容量 瓶中，用空 白样 品提取 液 定 容，此 标准 系列 的浓度 为0 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL。DB13/T 5189.5 2020 2 5 仪器与 设备 5.1 液相色 谱-串联 质谱 仪：配 电喷雾 离子 源。5.2 电子天 平：感 量 0.001g、0.0001 g。5.3 漩涡混 匀器。5.4 冷冻离 心机：转 速不 低 于10000 r/min。5.5 超声波 清洗 机。6 试验步骤 6.1 试样制 备 准确称 取 万 寿菊 提取 物样 品0.5 g（精确 至0.001 g）于50 mL 试管 中，加入5 mL丙 酮，超声 使试 样溶解，加入20 mL乙 醇，超声 提 取20min，10000 r/min 4 冷冻离心3 min。取上 清 液 至25 mL 容量 瓶中，用 乙醇 定容 至刻 度。过0.22 m 滤膜，待 测。6.2 色谱质 谱参 考条 件 液相色 谱条 件 和 质谱 条件。6.2.1 液相色 谱条 件 a)色谱柱：HILIC 色谱 柱（2.1 mm 100 mm，2.7 m），或性 能相 当者；b)流动相：乙 腈：0.1%甲酸 水=80：20；c)流速：0.4 mL/min；d)柱温：40；e)进样量：2 L。6.2.2 质谱条 件 a)离子源：电 喷雾 离子 源；b)扫描方 式：正离 子扫 描；c)检测方 式：多级 反应 监测（MRM）；d)电喷雾 电压：5500 V；e)离子源 温度：550；f)雾化气、气 帘气、辅 助加 热气、碰撞 气均 为高 纯氮 气或根 据仪 器选 择其 他合 适气体；g)定性离 子对、定 量离 子对、去簇 电压 及碰 撞能 量见 表 1。表 1 对乙 氧基 苯胺 的质 谱 参数 目标物质名称 定量离子对(m/z)定性离子对(m/z)去簇电压/V 碰撞能量/V 对乙氧基苯胺 138.0/109.8 138.0/109.8 60 20 138.0/92.9 60 25 6.3 液相色 谱-串联 质谱 测定 DB13/T 5189.5 2020 3 6.3.1 定性测 定 按照上 述条 件测 定样 品和 建立标 准工 作曲 线，如果 样品中 化合 物质 量色 谱峰 的保留 时间（参 见附 录A）与标 准溶 液的 保留 时间 相比在 允许 偏差 2.5%之 内；定 性离 子对 的相 对丰 度与浓 度相 当的 标准 溶液相比，相对 丰度 偏差 不超 过表2 的规 定，则可 判断 样 品中存 在相 应的 目标 化合 物。表2 定性 确证 时相 对离 子 丰度的 最大 允许 偏差 相对离 子丰 度/%20 20 50 1020 10 允许的 相对 偏差/%20 25 30 50 6.3.2 定量测 定 在 仪 器 最佳 工 作条 件 下，对 基 质 标准 工 作溶 液 进样，以 标 准溶 液 中被 测 组分峰 面 积 为纵 坐 标，标准溶液 中被 测组 分浓 度为 横坐标 绘制 标准 工作 曲线，用标 准工 作曲 线对 样品 进行定 量。6.4 空白试 验 空白试 验，除不 加试 样外，均按 上述 测定 步骤 进行。7 试验结 果 万寿菊 提取 物 中 对乙 氧基 苯胺含 量X 按式（1）计算。mV c cX)(0(1)式中：X 万 寿菊 提取 物对 乙氧 基苯胺 的含 量，单位 为微克 每千 克（g/kg）；c 从 标准 工作 曲线 查出 的试样 溶液 中对 乙氧 基苯 胺的浓 度，单位 为 纳 克每 毫升（ng/mL）；c0 从 标准 工作 曲线 查出 的空白 试验 中对 乙氧 基苯 胺的浓 度，单位 为 纳 克每 毫升（ng/mL）；V 试 样最 终稀 释体 积，单位为 毫升（mL）；m 试 样质 量，单位 为克（g）。计算结 果保 留至 小数 点后 一位。8 精密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的10%。9 检出限 和定 量限 检出限 为5 g/kg，定量 限 为17 g/kg。DB13/T 5189.5 2020 4 A A 附 录 A（资料 性附 录）对乙氧 基苯 胺的 多反 应监 测（MRM）色谱 图 A.1 对乙氧 基苯 胺的 多反 应监 测（MRM）色谱 图，见图A.1。图A.1 对 乙氧 基苯 胺的 多 反应监 测（MRM）色 谱图 _
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