兔出血症防控技术规程DB32／T 3592—2019.pdf

ICS 11.220 B 41 备案号：DB32 江苏省 地 方 标 准 DB32/T 3592-2019 兔出血症 防控技术 规程 Technical regulation of prevention and controlfor rabbit hemorrhagic disease 2019-04-08 发布 2019-04-30 实施 江 苏 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB32/T 3592-2019 I 前 言 本标准 按 照 GB/T 1.1-2009 给出的 规则 编制。本标准 由江 苏省 农业 科学 院提出 并归 口。本标准 起草 单位：江 苏省 农业科 学院 兽医 研究 所 本标准 主要 起草 人：王芳、魏后 军、范志 宇、胡波、宋艳 华、陈萌 萌、薛家 宾。DB32/T 3592-2019 1 兔出 血症 防控技术 规程 1 范围 本标准 规 定 了兔 出血 症 的 预防、诊断 和疫情 控制 等 要求。本标准 适用 于兔 出血 症的 预防、实 验室 诊断、临床 诊 断、流行 病学 调查 和兔 出 血症暴 发后 的疫情 控制，也 适用 于 分 离毒 株的 鉴定 和 对无 特定 病原 体(SPF)兔的监控。2 规范性 引用 文件 下列文 件 对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。GB 16548 病害 动物 和病 害动物 产品 生物 安全 处理 规程 NY/T 541 动物 疫病 实验 室检验 采样 方法 NY/T 572 兔病 毒性 出血 病血凝 和血 凝抑 制试 验方 法 NY/T 3075 畜禽 养殖 场消 毒技术 NY 5131 无公 害食 品 肉 兔饲养 兽医 防疫 准则 DB32/T 1458 兔 出血 症病 毒的检 测 RT-PCR方法 3 术 语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 兔出血 症病 毒 rabbit hemorrhagic disease virus（RHDV）杯状病毒科（Caliciviridae）、兔病毒 属（Lagovirus）病毒。含 有一条单股正链RNA，由7437个核苷酸组成，只有2个开放阅 读框架(ORF)，并由ORF1 的3 端部分序列编码RHDV 衣壳蛋白VP60，其基 因片段长 度为1740 bp，共 编 码579 个氨 基酸。3.2 兔出血 症 rabbit hemorrhagic disease（RHD）由兔出 血症 病毒 引起 的一 种以急 性、高度 传染 性、大面积 死亡 为特 征的 兔传 染病。4 预防 4.1 生物 安全 管理 4.1.1 养 殖场 条件 养殖场 应符合 NY 5131 规 定的条 件。4.1.2 隔离 应对 引 进家 兔 进 行隔 离观察15d 30d，经 检查 健康 合格后，方 可将 引进 家兔 与本场 家兔 一 起 饲 养。4.1.3 清 扫和 清洗 DB32/T 3592-2019 2 应对 兔 舍、车辆 等用 具、笼具等 设备、兔 场环 境等 进行定 期清扫 和 清洗。4.1.4 消毒 可参 照 NY/T 3075-2017进行。养 殖场 应 建 立严 格的 卫生（消毒）管 理制 度，并 定期 对兔 舍、车辆等用具、笼 具等 设备、饮水 及兔 场环 境等 进行 定期 严格消 毒；兔场 出、入口 处应设 置消 毒池，内 置 有 效消毒剂；兔 舍门 口应 设置 消毒盆、消 毒垫 等，并放 置消毒 剂。4.1.5 防 鼠、防虫、防 蝇 兔 舍内 应有 防 鼠、防 虫、防蝇 等 装置。4.2 免疫 监测 定期 随 机采 集兔 场家兔 血 液样品，制备 血清，用 红 细 胞凝集 抑制 试验（HI）检测 血清 中RHDV抗体，具体方 法 可 参照NY/T 572-2016进行。如群 体血 清阳 性率低 于85%，应实 施疫苗 免疫 接种。4.3 免疫 接种 4.3.1 疫苗 应使用 经兽 医主 管部 门批 准使用 的含有 兔 出血 症 病 毒抗原 的疫苗。4.3.2 免 疫程 序 一般 情 况下，应 按疫 苗的 使用说 明书 规定 的程 序进 行免疫，也 可参照 附 录A 实施。5 诊断 5.1 诊断 流程 依据兔 出血 症流 行病 学特 点、临 床症 状、病理 学变化 做出 初步 诊断,然后 经 病 原学检 验进 行确 诊。5.2 流行 病学 特点 兔出血 症流 行病 学 有 以下 特点：a)易感动 物 该病 仅感 染兔。小于5 周龄 的兔 子感 染后 不 易死 亡，无 明显 临床 症状；2月 龄以 上家兔感染 后，死亡 率高 达70%90%。b)传 染源 感染RHDV 的 兔 子是主 要的 传染 源，包括 感染病 死 兔 和带 毒未 死的 兔子。c)传播 途径 病毒 通过 直 接和间 接途径 传播。病死 兔和带 毒兔通 过 其 排泄物、分泌 物、血 液、兔毛等污 染饮 水、饲 料、用 具、笼具、空气 等，引起 易感兔 发病 和疫 病流 行。人、鼠、蚊、蝇和 其它 畜 禽等也可 机械 性 地 传播 病毒。5.3 临床 症状 兔出血 症有 以下 临床 症状：a)最急性 型 常发 生在 非疫区 或流 行初 期。患兔 死前 无 任何 明显 症状，常 表现 为突然 死亡，死后勾头弓 背或“角 弓反 张”，少数兔 鼻孔 流出 带有 泡沫 的血液。b)急性 型 病程 一般 12 h 48 h，患 兔精神 萎顿、不爱活 动、食欲 减退、喜 饮水、呼吸 迫促、体温达 41。临 死前 表现 狂躁，倒 地后，四 肢划 动，抽搐或 惨叫，很 快死 亡。少数死 兔鼻 孔流 出少 量 带有泡沫 的血 液。c)亚急 性型 多 发于 2 月 龄以内 的幼 兔，兔体 消瘦，被毛 焦枯 无光 泽，病 程 2 d3d 或更 长，随后死亡。5.4 病理 学变化 DB32/T 3592-2019 3 最急性、急 性病 死兔 剖检 时可见 全身 实质 器官 淤血、出血。气 管软 骨环 淤血，气管内 含带有 泡沫 的血液；胸腺 水肿，并 有大 小 不等 的出 血点；肺 脏出 血、淤 血、水肿、有 大小 不等的 出血 点；肝脏 淤 血、肿大、质 地变 脆、色 泽变 淡；脾脏 肿大、淤血，呈 黑 紫色；肾 脏淤 血、出 血；十 二指肠、空肠 粘膜 出血。5.5 病原 学检验 5.5.1 样 本采 集、保存 和 运输 样本 采 集、保存 和运 输参 照NY/T 541-2016 执行，并 按照GB 16548 处 理病 死家 兔。5.5.2 红 细胞 凝集 试验（HA）红细胞 凝集 试验 可参 照NY/T 572-2016进行。5.5.3 核 酸识 别技 术 RT-PCR 方法 核酸识 别技 术可 参照DB 32/T 1458-2009 进行。5.5.4 非 免疫 兔接 种技 术 非免疫 兔接 种技 术参 见附 录B。5.6 结果 判定 5.6.1 疑 似兔 出血 症 符合5.2 和5.3 或/和5.4的。5.6.2 确诊 符合5.6.1 且 符合5.5.2 或者5.5.3或者5.5.4的。6 疫 情控 制 6.1 隔离 封锁 发生 兔 出血 症 时，应 紧急 隔离封 锁发 病兔 场，严禁 兔场 人 员，特别 是饲 养及 管理人 员 互 相串 舍，同时严禁 家兔 相关 物品 流通。6.2 消毒 应对病 毒 污 染和 可能 被污 染的一 切场 所、用具 和物 品 等进 行清 洁、消毒，并 对养殖 场实施 灭鼠、灭蚊蝇等 防控 措施。6.3 病死 家兔 处理 按照 GB 16548 处 理病 死家 兔。6.4 紧急 接种 当 发生 兔出 血症 时，应对 其他 未 死亡 家兔 进行 紧急 预防 接 种。用经 兽医 主管 部门批 准使 用的 含有 兔出血症 病毒 抗原 的疫苗，2 4 倍 剂量/只，颈 部皮 下 注射或 用 兔 出血 症病 毒 高 免血清，4 毫升6 毫升/只，颈 部 皮 下注 射，7 天 10 天后，再注 射一次。DB32/T 3592-2019 4 附录 A（规范性附录）免疫程序 A.1 繁殖 种兔 群 A.1.1 繁殖 母兔 应每 年 2 次定 期免 疫 接 种。a)用 符 合规 定 的 疫苗，2 倍剂量/只，颈部 皮下 注 射；b)6 个 月后，用 符合 规定 的疫苗，2 倍剂 量/只，颈 部皮下 注射。A.1.2 种公 兔 应每 年 2 次定期 免疫 接种。a)用 符 合规 定 的 疫苗，1 个剂量/只，颈部 皮下 注射；b)6 个 月后，用 符合 规定 的疫苗，1 个剂 量/只，颈 部皮下 注射。A.2 非繁 殖青 年、成年 兔 群 应每年 2 次 定期 免疫 接种。a)用 符 合规 定 的 疫苗，1 个剂量/只，颈部 皮下 注射；b)6 个 月后，用 符合 规定 的疫苗，1 个剂 量/只，颈 部皮下 注射。A.3 肉兔 A.3.1 70 日 龄出 栏的 肉兔 在家 兔 35 日40 日 龄 时，用 符合规 定 的 疫苗，2 倍剂 量/只，颈 部皮下注射。A.3.2 70 日 龄以 上出 栏的 肉兔 a)在家 兔 35 日40 日 龄 时，用 符合 规定 的疫 苗，2 倍剂 量/只，颈部 皮下 注 射；b)在家 兔 60 日 65 日 龄 时，用 符合 规定 的疫 苗，1 个剂 量/只，颈 部皮下 注 射。A.4 仔、幼兔 a)35 日40 日龄 用符 合 规定 的 疫苗，2 倍剂 量/只，颈部 皮下 注射；b)60 日65 日龄 用 符合 规定 的 疫苗，1 个剂 量/只，颈部 皮下 注射。DB32/T 3592-2019 5 附录 B（规范性附录）非免疫兔接种技术 B.1 材料 B.1.1 实 验动 物 2 月 龄 以上未 免疫 兔出 血症 疫苗 的临床 健康 家兔，兔 出血 症病毒 抗 体 HI 效价 1:2。B.1.2 兔出 血症病 死兔肝脏 悬液 取 肝 脏组 织，剪碎，按1:10加入PBS，匀浆，反复冻 融3 次，于-20 保存 备用。B.1.3 疑似 兔 出血 症病 死 兔肝脏 悬液 处 理方 法 同 B.1.2。B.2 接种 方法 用 兔出 血症病 死兔 肝脏悬 液颈部 皮下注 射 实 验动物5 只，1mL/只，作为 阳性 对 照组；用疑似 兔出 血症病死 兔肝脏 悬液 颈部皮 下注射 实验动 物5只，1mL/只，作为 疑似 样品 组，同时 设立 不接种 肝脏 组织 的实验动 物5 只，作为 阴性 对 照组，分别 于 隔 离器 中饲 养，观 察7 日，记录 试验 兔 临床症 状、死亡 情况 和病理学变 化，并采 集病 死兔 肝脏 样 品做 红细 胞凝 集（HA）试验，具 体方 法参照NY/T 572-2016进行。B.3 结果 判定 在观察 期内，阳性 对照组 至少死 亡4只，死亡 兔有 兔 出血症 典型的 临床 症状 和 病理学 变化，肝脏 样品HA 检验 为阳性；阴性对 照组全部健康 存活，证明 实验动物的 可靠性；疑似 样品 组，在 观察期 内，至少死亡4只，死亡 兔有 兔出 血症典 型的 临床 症状 和病 理学变 化，肝脏 样品HA 检 验为阳 性者，则 疑似 样 品来自兔 出血 症死 亡兔。_