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I C S 6 5.0 2 0B 6 1黑 龙 江 省 地 方 标 准DB23D B 2 3/T 2 5 3 6 2 0 1 9橡 胶 草 组 织 培 养 育 苗 技 术 规 程2 0 1 9-1 2-1 3 发 布 2 0 2 0-0 1-1 2 实 施黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局发 布D B 2 3/T 2 5 3 6 2 0 1 9I前 言本 标 准 依 据 G B/T 1.1-2 0 0 9 的 编 写 规 则 起 草。本 标 准 由 黑 龙 江 省 科 学 院 提 出。本 标 准 起 草 单 位：黑 龙 江 省 科 学 院 自 然 与 生 态 研 究 所。本 标 准 主 要 起 草 人：陈 菲、曾 祥 俊、曲 彦 婷、李 黎、沈 光、韩 辉、熊 燕、张 悦、唐 焕 伟、杨 轶 华、李 虹、曲 线、孙 波。D B 2 3/T X X X X X X X X1橡 胶 草 组 织 培 养 育 苗 技 术 规 程1 范 围本 标 准 规 定 了 橡 胶 草（T a r a x a c u m k o k-s a g h y z R o d i n.）组 织 培 养 育 苗 技 术 的 环 境 与 设 备 消 毒、培养 基 制 备、外 植 体 诱 导、继 代 增 殖、生 根 培 养、炼 苗 移 栽、生 产 档 案。本 标 准 适 用 于 橡 胶 草 组 织 培 养 育 苗。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本 文 件。G B/T 6 0 0 1 育 苗 技 术 规 程L Y/T 1 8 8 2 林 木 组 织 培 养 育 苗 技 术 规 程N Y/T 2 3 0 6 花 卉 种 苗 组 培 快 繁 技 术 规 程3 环 境 与 设 备 消 毒3.1 接 种 室 消 毒接 种 室 消 毒 按 N Y/T 2 3 0 6-2 0 1 3 中 8.6 进 行。3.2 超 净 工 作 台 消 毒超 净 工 作 台 消 毒 按 N Y/T 2 3 0 6-2 0 1 3 中 8.5、8.6 进 行。3.3 培 养 室 消 毒培 养 室 消 毒 按 N Y/T 2 3 0 6-2 0 1 3 中 8.7 进 行。3.4 接 种 器 具 消 毒接 种 器 具 按 N Y/T 2 3 0 6-2 0 1 3 中 8.4 进 行。4 培 养 基 制 备4.1 母 液 配 制培 养 基 母 液 配 制 按 L Y/T 1 8 8 2-2 0 1 0 中 4.1 进 行。4.2 培 养 基 配 制D B 2 3/T X X X X X X X X24.2.1 培 养 基 配 方培 养 基 配 制 成 分 如 下：a)诱 导 培 养 基：M S+6-B A 2.0 m g/L+2,4-D 1.0 m g/L+蔗 糖 3 0 g/L+琼 脂 粉 5.5 g/L，p H 值 5.8；b)继 代 增 殖 培 养 基：M S+6-B A 2.0 m g/L+N A A 0.1 m g/L+蔗 糖 3 0 g/L+琼 脂 粉 5.5 g/L，p H 值 5.8；c)生 根 培 养 基：1/2 M S+N A A 0.2 m g/L+蔗 糖 3 0 g/L+琼 脂 粉 5.5 g/L，p H 值 5.8。4.2.2 培 养 基 配 制 方 法培 养 基 配 制 方 法 按 L Y/T 1 8 8 2-2 0 1 0 中 4.2.1 进 行。4.3 培 养 基 灭 菌培 养 基 灭 菌 按 L Y/T 1 8 8 2-2 0 1 0 中 4.2.2 进 行。4.4 培 养 基 保 存培 养 基 保 存 按 L Y/T 1 8 8 2-2 0 1 0 中 4.2.3 进 行。5 外 植 体 诱 导5.1 外 植 体 的 选 择从 生 长 健 壮 无 病 虫 害 的 母 株 上 选 取 5 c m 6 c m 长 的 幼 嫩 叶 片 作 为 外 植 体。5.2 外 植 体 消 毒 处 理将 外 植 体 置 于 烧 杯 中，用 洗 洁 精 溶 液 洗 涤，然 后 用 自 来 水 冲2 h 4 h，在 超 净 工 作 台 上 用 7 5%酒 精 浸泡 消 毒 3 0 s，倒 掉 酒 精，用 无 菌 水 冲 洗 3 次 4 次；再 用 0.1%氯 化 汞 溶 液 浸 泡 6 m i n，期 间 不 断 摇 动，倒 净氯 化 汞 溶 液，用 无 菌 水 冲 洗 6 次 7 次，放 在 接 种 盘 内 用 无 菌 滤 纸 吸 干 表 面 水 分。5.3 外 植 体 接 种 与 诱 导 培 养将 消 毒 处 理 后 的 外 植 体 切 成 长 1 c m 2 c m，接 种 在 诱 导 培 养 基 上 进 行 初 代 诱 导 培 养。操 作 时，先 将 培 养 瓶 的 瓶 盖 取 下，再 将 培 养 瓶 的 瓶 口 倾 斜 靠 近 酒 精 灯 火 焰，用 镊 子 将 外 植 体 接 种 到诱 导 培 养 基 上，将 培 养 瓶 瓶 口 在 酒 精 灯 外 焰 上 旋 转 灼 烧 后 封 好 瓶 口。接 种 完 成 后，在 培 养 瓶 上 标 注 接 种物 名 称 和 日 期，培 养 2 0 d 25 d。6 继 代 增 殖外 植 体 经 诱 导 培 养 生 成 愈 伤 组 织 后，分 化 产 生 不 定 芽，将 不 定 芽 不 断 转 接 到 增 殖 培 养 基 中 进 行 培 养，2 0 d 2 5 d 为 1 代，进 行 多 次 继 代。7 生 根 培 养将 继 代 后 的 组 培 苗 接 种 在 生 根 培 养 基 中 诱 导 生 根，培 养 2 5 d 3 0 d，当 组 培 苗 基 部 长 出 健 壮 的 不 定根 3 条5 条，根 长 为 2 c m 3 c m 时，即 可 出 瓶 移 栽。8 培 养 条 件培 养 室 白 天 的 温 度 控 制 在 2 5 2，夜 间 不 低 于 1 5，相 对 空 气 湿 度 控 制 在 7 0%8 0%，光 照 强 度 为2 0 0 0 L u x 3 0 0 0 L u x，光 照 时 间 为 1 2 h/d 1 4 h/d。D B 2 3/T X X X X X X X X39 炼 苗 移 栽9.1 炼 苗将 培 养 瓶 转 移 到 过 渡 培 养 室 中，自 然 光 照 下 炼 苗 2 d 3 d，然 后 打 开 瓶 盖，再 炼 苗 2 d 3 d，温 度 控 制在 2 2 2 5。9.2 移 栽从 培 养 瓶 中 取 出 生 根 的 小 苗，用 清 水 洗 净 根 部 的 培 养 基，清 洗 培 养 基 时 动 作 要 轻，避 免 伤 根，将 洗净 的 生 根 苗 移 栽 至 装 有 珍 珠 岩 的 穴 盘 中，每 穴 1 株，移 栽 后 要 把 苗 周 围 的 基 质 压 实，然 后 浇 透 水。9.3 苗 期 管 理将 移 栽 后 的 组 培 苗 放 到 温 室 中，保 证 幼 苗 水 分 供 需 平 衡，育 苗 水 分 管 理 按 照 G B/T 6 0 0 1 进 行。移 栽初 期 应 进 行 遮 阴，5 d 7 d 后 发 现 幼 苗 有 生 长 趋 势，可 以 逐 渐 降 低 湿 度，加 强 光 照。温 室 环 境 应 保 持 清洁，温 度 控 制 在 2 2 2 5，空 气 湿 度 保 持 在 7 0%8 0%，光 照 强 度 为 2 0 0 0 L u x 2 5 0 0 L u x。1 0 生 产 档 案建 立 橡 胶 草 组 织 培 养 育 苗 技 术 档 案，包 括 环 境 和 设 备 消 毒、培 养 基 制 备、外 植 体 诱 导、继 代 增 殖、生 根 培 养、炼 苗 移 栽 等。
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