灵芝菌种质量要求DB37／T 4252—2020.pdf

ICS 65.020.20 CCS B 05 山东省地方标准 DB37/T 4252 2020 37 灵芝菌种 质量要求 Quality requirements of Ganoderma lingzhi spawn 2020-12-04 发布 2021-01-01 实施 山东省市 场监督 管 理局 发 布 DB37/T 4252 2020 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 质 量指 标.1 4.1 固体 菌种.1 4.1.1 母 种质 量.1 4.1.2 原 种质 量.2 4.1.3 栽 培种 质量.3 4.2 液体 菌种.4 4.2.1 摇 瓶液 体菌 种质 量.4 4.2.2 发 酵罐 液体 菌种 质 量.5 5 检 验规 则.6 6 留样.6 附录A（规 范性）母种 栽培性 状检 验方 法和 检验 项目.7 DB37/T 4252 2020 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由山 东省 农业 农村 厅提出 并组 织实施。本文件 由 山 东省 农业 标准 化技术 委员 会归 口。本文件 起草 单位：泰安 市农 业科学 研究 院、山 东省 农业 技术推 广总 站、山 东三 秀生 物科技 有 限 公 司。本文件 主要起 草人：王庆 武、高 霞、丛 倩倩、赵淑 芳、崔 晓、孙 振福、唐丽 娜、马 化彬、李秀 梅、司元明、兰 玉菲、张 燕、安秀荣、于 清伟、曹 子英。DB37/T 4252 2020 1 灵 芝菌种 质量要求 1 范围 本文件 规定 了灵 芝菌 种质 量要求 的术 语和 定义、质 量指标、检 验规 则、留样 等技术 要求。本文件 适用 于灵 芝菌 种质 量要求。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB 150.1 压力 容器 第1 部分：通用 要求 GB/T 12728 食 用菌 术语 NY/T 528 食用 菌菌 种生 产技术 规程 NY/T 1742 食 用菌 菌种 通 用技术 要求 3 术语和 定义 GB/T 12728、NY/T 528 界 定的以 及下 列术 语和 定义 适用于 本文 件。3.1 液体菌 种 liquid spawn 用液体 培养 基，在发 酵罐 中，通 过深 层培 养技 术生 产的液 体形 态的 食用 菌菌 种。3.2 终止 pH terminal pH value of medium 液体菌 种达 到放 罐指 标时 的培养 基pH。4 质量指 标 4.1 固体菌 种 4.1.1 母种质 量 4.1.1.1 容器 容器及 封口 物应 符合NY/T 528 的 规定。4.1.1.2 感官要 求 母种感 官要 求应 符合 表1 的 规定。表1 母种感 官要 求 DB37/T 4252 2020 2 项目 检测方法 要求 容器 肉眼观察 完整、无损、洁净 试管塞 肉眼观察 棉塞或硅胶塞，应干燥、洁净、松紧适度，能透气和滤菌 培养基灌入量 肉眼观察 试管总容量的 1/5 1/4 斜面长度 肉眼观察、测量 斜面顶端距试管塞底部距离 40 mm 50 mm 接种块大小 肉眼观察、测量 边长 3 mm5 mm，厚 2.5 mm 3 mm 菌种外观 菌丝生长量 肉眼观察 长满斜面 菌丝体特征 整齐浓密、丝状或绒毛状，白色 菌丝体表面 均匀、平整、无角变 菌落边缘 整齐 菌丝分泌物 无 杂菌菌落 无 斜面背面外观 肉眼观察 培养基贴壁、不干缩，颜色均匀、无暗斑、无明显色素 气味 鼻嗅 有灵芝菌种特有的香味，无酸、臭、霉等异味 子实体原基 肉眼观察 无 纯度 肉眼观察，必要时5 放大镜观察 纯培养物，无虫（螨）体等生物 菌种微观 菌丝显微形态 显微镜 粗壮、丰满、均匀 锁状联合 有 4.1.1.3 菌丝长 速 采用PDA 培 养基，接 种后26 28 避光 培养，48 h 内 菌丝萌 发定 植，8 d10 d 菌 丝长满18 mm 180 mm试管 斜面。4.1.1.4 母种栽 培性 状检 验 在棉籽 壳68%、阔叶 木 屑20%、麦 麸10%、石 膏1%、石灰1%、pH 6.06.5，含 水量55%60%的培养基上，应 符合 附录A的方法，确 证母 种栽 培性 状合 格后，方可 生产 原种 和栽 培种。4.1.1.5 贮存要 求 常温下 贮存 时间 不超 过7 d，4 6 下 贮存 时间 不 超过90 d。4.1.2 原种质 量 4.1.2.1 容器 容器应 符合NY/T 528 的规 定。菌种 瓶封 口应 使用透 气和滤 菌的 棉塞 或无 棉盖 体，菌种 袋封 口应 使 用套环或 扎口。4.1.2.2 感官要 求 DB37/T 4252 2020 3 原种感 官要 求应 符合 表2 的 规定。表2 原种感 官要 求 项目 检测方法 要求 容器 肉眼观察 完整、无损、洁净 封口物 肉眼观察 干燥、洁净、松紧适度，能透气和滤菌 培养基上表面距瓶（袋）口的 距离 肉眼观察、测量（50 5）mm 接种量 肉眼观察、测量 每瓶（袋）接 1.5 cm 2 cm 的 母种一块 菌种 外观 菌丝生长量 肉眼观察 长满容器 菌丝体特征 洁白浓密、生长旺健 培养物 紧贴瓶（袋）壁，无干缩，无菌皮 培养物表面菌丝体 均匀一致，无角变，无高温抑制线 培养物表面分泌物 无，允许有少量无色或浅黄色透明水珠 杂菌菌落 无 拮抗现象 无 子实体原基 无 气味 鼻嗅 有灵芝菌种特有的清香味，无酸、臭、霉等异味 纯度 肉眼观察，必要时 5 放大镜观察 纯培养物，无虫（螨）体等生物 菌种 微观 菌丝显微形态 显微镜 粗壮、丰满、均匀 锁状联合 有 4.1.2.3 菌丝长 速 在棉籽 壳47%、阔 叶木 屑40%、麦麸10%、葡 萄糖1%、石膏1%、石灰1%、pH 6.0 6.5，含 水量55%62%的 培养基 上，接种后，26 28，空 气相 对 湿度50%70%条 件下，避 光培养，菌丝 应在35 d37 d长满750 mL 菌种 培养 瓶。4.1.2.4 贮存要 求 在清洁、通风、干 燥（空 气 相对湿 度50%70%）、避 光的室 内，常 温下 贮存 时 间不超 过10 d，4 6 下 贮存 时间 不超 过30 d。4.1.3 栽培种 质量 4.1.3.1 容器 容器应 符合NY/T 528 的规 定，容 器封 口应 符合4.1.2.1 规定。4.1.3.2 感官要 求 栽培种 感官 要求 应符 合表3 的规定。DB37/T 4252 2020 4 表3 栽培种 感官 要求 项目 检测方法 要求 容器 肉眼观察 完整、无损、洁净 封口物 肉眼观察 干燥、洁净、松紧适度，能透气和滤菌 培养基上表面距瓶（袋）口的距离 肉眼观察、测量（505）mm 接种量 肉眼观察、称量 12 g 15 g/瓶（袋）菌种外观 菌丝生长量 肉眼观察 长满容器 菌丝体特征 洁白浓密、生长旺健、饱满 培养物 紧贴（瓶）袋壁，无干缩，无菌皮 不同部位菌丝体 生长均匀，色泽一致，无角变，无高温抑制线 培养物表面分泌物 无，允许有少量无色或浅黄色透明水珠 杂菌菌落 无 拮抗现象 无 子实体原基 无 气味 鼻嗅 有灵芝菌种特有的清香味，无酸、臭、霉等异味 纯度 肉眼观察，必要时 5 放大镜观察 纯培养物，无虫（螨）体等生物 菌种微观 菌丝显微形态 肉眼观察 粗壮、丰满、均匀 锁状联合 有 4.1.3.3 菌丝长 速 在棉籽 壳48%、阔叶 木屑40%、麦 麸10%、石 膏1%、石灰1%、pH 6.06.5、含 水量55%62%的培养基上，接种 后26 28 避光 培养，空气 相对 湿 度50%70%，菌 丝应 在35 d40 d长满17 cm 35 cm菌种袋。4.1.3.4 贮存要 求 在清洁、通风、干 燥（空 气 相对湿 度50%70%）、避 光的室 内，常 温下 贮存 时 间不超 过15 d，4 6 下 贮存 时间 不超 过45 d。4.2 液体菌 种 4.2.1 摇瓶液 体菌 种质 量 4.2.1.1 容器 使用1 L2 L三 角烧 瓶或 抽 滤瓶，瓶口 应使 用能 透气 和滤菌 的封 口膜 或瓶 塞封 口。4.2.1.2 感官要 求 摇瓶液 体菌 种感 官要 求应 符合表4的 规定。DB37/T 4252 2020 5 表4 摇瓶液 体菌 种感 官要 求 项目 检测方法 要求 菌液色泽 肉眼观察 菌丝体呈白色，滤液呈淡黄色 菌液气味 鼻嗅 有灵芝液体菌种培养时特有的气味，无异味 菌液形态 肉眼观察 菌液澄清透明不浑浊，菌丝体密集 菌种微观 显微镜 菌丝有隔膜、有锁状联合，无杂菌 4.2.1.3 理化性 状要 求 在葡萄 糖20 g/L、蛋白 胨3 g/L、牛 肉膏3 g/L、磷 酸 二氢钾1 g/L、硫酸 镁0.5 g/L，维 生素B1 5 mg/L的培养 基中，pH 自然，接 种7 8块2 mm 3 mm 的 母种 菌 块，避 光静 置24 h后 置于 恒 温摇床 上，25 28、140 r/min 160 r/min培养4 d6 d，摇瓶 液体 菌种 理 化指标 应符 合表5的 规定。表5 摇瓶液 体菌 种理 化指 标 项目 检测方法 要求 终止pH pH 计或pH 试纸 4.0 5.5 菌丝体湿重（mg/mL）10 000 r/min 离心5 min，去掉 上清液称重 50 4.2.1.4 贮存要 求 在清洁、通 风、干燥（空 气 相对湿 度50%70%）、避 光的室 内，常温 下贮 存时 间不超 过2 d，4 6 下 贮存 时间 不超 过7 d。4.2.2 发酵罐 液体 菌种 质量 4.2.2.1 容器 使用100 L800 L 食用菌 液 体菌种 培养专 用发 酵罐，不锈钢 材质、应符 合GB 150.1 的要 求，经有关部门检 验合 格。4.2.2.2 感官要 求 发酵罐 液体 菌种 感官 要求 应符合 表6 的规 定。表6 发酵罐 液体 菌种 感官 要求 项目 检测方法 要求 菌液色泽 肉眼观察 菌丝体呈白色，滤液呈淡黄色 菌液气味 鼻嗅 有灵芝液体菌种培养时特有的气味，无异味 菌液形态 肉眼观察、手感 菌液澄清透明不浑浊，稍粘稠；菌丝体密集、均匀悬浮于液体中不分层 菌种微观 显微镜，营养肉汤固体和液体培养基 菌丝粗壮、分枝密度高、有隔膜，可见锁状联合，无杂菌 4.2.2.3 理化性 状要 求 DB37/T 4252 2020 6 在葡萄 糖20 g/L，蛋 白胨3 g/L，牛肉 膏3 g/L，磷酸 二 氢钾1 g/L，硫 酸镁0.5 g/L，维生 素B1 5 mg/L，消泡剂0.3 g/L 的培 养基 中，pH 自然，接 种量 为0.5%1.0%，发酵 罐持 续通 入 无菌空 气，维持 罐压0.02 MPa0.03 MPa，25 28 培 养6 d 7 d，发 酵罐 液体菌 种理 化指 标应 符合 表7的 规定。表7 发酵罐 液体 菌种 理化 指标 项目 检测方法 要求 终止pH pH 计或pH 试纸 3.6 5.5 菌丝体湿重（mg/mL）10 000 r/min 离心 5 min，去掉 上清液称重 50 4.2.2.4 贮存要 求 发酵罐 液体 菌种 生产 后应 及时使 用。如 不能 及时 使 用，发酵 罐内 需持 续通 无 菌空气，保持 罐压0.02 MPa0.03 MPa，常 温下 贮 存时间 不超 过2 d。5 检验规 则 各类菌 种按质 量指 标要求 和NY/T 1742 规定 进行检 验，检验 项目全 部符 合质量 指标要 求时，为合 格菌种，其中 任何 一项 不符 合要求，均 为不 合格 菌种。6 留样 除液体 菌种 外，各 级菌 种都 要留样 备查，每个 批号 各级 菌种留 样数 量为35 支（瓶、袋），均 于4 6 贮 存至 该批 菌种 正常 条件下 第一 潮芝 采收。DB37/T 4252 2020 7 附录A（规范 性）母种栽 培性 状检 验方 法和 检验项 目 将被检 母种制 成原 种，采 用4.1.1.4 规 定的 培养基 配 方，制 作栽培 袋90 个，以 该母种 的出发 菌株 为对照，3次 重复，试 验棚 内 随机排 袋常 规管 理出 芝，调查记 录表5中 所列 项目，统计检 验结 果。对比 二者的检验 结果，以时 间计的 检验项 目中，被检 母种任 何一项 的时间，较 对照菌 株推迟5 d以 上（含5 d）者为不合 格；产量 显著 低于 对照菌 株者 为不 合格；芝 体外观 形态 与对 照明 显不 同或畸 形者 为不 合格。表A.1 母种栽 培性 状检 验记 录 检验项目 检验结果 检验项目 检验结果 母种长满所需时间/d 第一潮芝生物学效率/（%）原种长满所需时间/d 总生物学效率/（%）栽培袋长满所需时间/d 子实体形态 出原基所需时间/d 芝盖直径、厚度，柄长、柄径/cm