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ICS 01.0 40.67 X 34 DB45 广西壮族自治区地方标准 DB 45/T 2143 2020 甘蔗叶中多糖的测定 苯酚-硫酸法 Determination of polysaccharide in s ugar cane leavesPhenol-sulfuric acid colorimetry 2020-07-24 发布 2020-08-20 实施广西壮族自治区市场监督管理局 发布 DB 45/T 21 43 20 20 I 前 言 本标准按照G B/T 1.12 0 09给出的规 则起草。本标准由广西壮族自治区糖业发展办公室提出并宣贯。本标准由广西糖业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：广西中医药大学、广西大海阳光药业有限公司。本标准主要起草人：侯小涛、邓家刚、郝二伟、杜正彩、秦健峰、黄大权、和顺利、何文然。DB 45/T 21 43 20 20 1 甘蔗叶中多糖的测定 苯酚-硫酸法 1 范围 本标准规定了甘蔗叶中多糖含量的测定方法：苯酚-硫酸法。本标准适用于所有品种的甘蔗叶中多糖含量的测定。本标准方法的检出限为0.5 mg/k g。本标准方法的线性范围为0.01 mg/m L 0.06 mg/m L。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6 68 2 20 08 分析 实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 甘蔗叶多糖 suga rc an e l ea f po ly sac ch ar id e 甘蔗叶中以-D-葡聚糖或-D-葡聚糖 或其他碳糖为主链的一系列高分子化合物。4 方法提要 甘蔗叶多糖在浓硫酸的作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚反应生成橙黄 色溶液，在4 85 nm处有特 征吸收，与标准系列比较定量。5 试剂和材料 5.1 试验用水：试验用水应符合 GB/T 6 6 82 20 08 中 三级水的规定。5.2 硫酸（H 2 SO 4），分析纯，=1.84 g/mL。5.3 无水乙醇（C 2 H 5 O H），分析 纯。5.4 苯酚（C 6 H 6 O），分析纯，重蒸馏。5.5 80乙醇溶 液。5.6 D-无水葡萄 糖（C 6 H 12 O 6）对照品，使用前应于 10 5 恒温烘干至恒重。5.7 80苯酚溶 液：称取 8 0 g 苯酚（5.4）于 1 00 mL 烧杯中，加水溶解，转移至 10 0 m L 棕色容量瓶中 并定容，摇匀后，置 4 冰箱中储存备用。5.8 5苯酚溶液：吸取 5 m L 80苯酚溶 液（5.7），溶于 75 m L 水 中，混匀，现用现配。DB 45/T 21 43 20 20 2 5.9 0.1 m g/mL 标 准葡萄糖溶液：取 10 0 mg D-无水葡萄 糖（5.6），精 密 称定，置于 50 0 m L 烧杯中，加水溶解，转移至 1 00 0 mL 容量瓶中，摇匀后，置 4 冰箱 中储存备用。6 仪器和设备 6.1 紫外/可 见 分光 光 度计。6.2 分析 天平，感 量为 0.1 mg。6.3 超声波 提取 器。6.4 涡旋振荡器。6.5 离心机，4 000 r/m i n。7 样品制备与保存 7.1 试样制备 将采回 的甘 蔗叶 清洗 干 净除去泥沙等杂质，切 成小 段，置 于恒温干 燥 箱中6 0 干 燥，粉碎 后 过 60 目筛 处 理 后，混合 均 匀。7.2 样品保存 试 样 于-1 8 以下冰箱 内保 存。制样 和 样 品 保 存 过程 中，应 防止样 品 污染 和 待 测物 损失。8 测定步骤 8.1 样品处理 取 样 品 粉末约 1g，精 密 称定。置于1 00 mL 具塞锥 形 瓶中，按物 料 比1:3 0，加 入 无水乙醇，置 超声 提 取 器 中提取4 0 m i n，之 后于 离心机 以4 00 0 r/m i n 离心 10 m i n，弃去上清 液，残渣 加5 0 mL水，超声 提取 3 次，每次3 0 m i n，冷却 后用 滤纸过滤，合并 3次滤 液，混匀后移取1 mL 到 25 mL容量瓶 中，加水至 刻度，摇匀，即得样 品测定液。8.2 绘制标准曲线 分 别 精 密 量取0.1 m g/mL 的葡萄糖溶液（5.9）0 m L、0.1 m L、0.2 mL、0.3 m L、0.4 m L、0.5 mL、0.6 m L置于 具塞 试 管 中，各 加水 补 至 1.0 m L后，分 别 加 入 1.0 m L 5 苯酚溶液（5.8）和 3 m L硫酸（5.2），振荡 混合 后，置 水 浴锅 中 沸 水加 热 10 m i n，冷却 至室温 后，用试 剂空 白 作为 参 比溶 液，用 紫外/分光光 度计 在48 5 n m处测定吸光 度。以葡萄糖溶液的浓 度 为 横坐 标，吸光 度 为 纵坐 标，绘制 葡萄糖标准 曲 线，8.3 比色测定 精 密 吸取 样 品测定液1.0 0 m L于2 0 m L 具塞 试 管 中，按 步骤 8.2 操 作，测定吸光 度，重 复3次，取吸光 度平均值。8.4 空白试验 与试 样 的测定 平行进行，取 相同 量的所有试 剂，采 用 相同 的分析 步骤，但 不加试 样。DB 45/T 21 43 20 20 3 9 结果计算 样品中多糖含量以质量分数计，单位以克每百克（g/10 0g）表示，按式（1）计算：.(1)式中：比色测定的吸光值扣除空白试验值后，从标准曲线上查得样品测定液的浓度，单位为毫克每 毫升（mg/m L）；V 1 样品测 定液的体积，单位为毫升（mL）；V 2 样品提 取液的体积，单位为毫升（mL）；V 3 配置样 品测定液所用的样品提取液的体积，单位为毫升（mL）；m 样品质 量，单位为克（g）；0.9葡萄 糖换算成葡聚糖的校正系数。注：计算结果保留至小数点后两位。1 0 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10。中华人民共和国广西地方标准 甘蔗叶中多糖的测定 苯酚-硫酸法 DB 45/T 2143 2020 广西壮族自治区市场监督管理局统一印刷 版权专有 侵权必究
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