食品中四氯虫酰胺残留量的测定　液相色谱-质谱质谱法DB37／T 3990—2020.pdf

ICS 67.050 X 04 DB37 山东省 地 方 标 准 DB37/T 3990 2020 食品中四 氯虫酰胺 残留量的 测定 液相色谱-质谱/质谱 法 Determination of tetrachlorantraniliprole residue in foods Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2020-06-08 发布 2020-07-08 实施 山 东 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB37/T 3990 2020 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由青 岛海 关提 出、归口并 组织 实施。本标准 起草 单位：青 岛海 关技术 中心、黄 岛海 关。本标准 主要 起草 人：崔淑 华、郭 庆龙、张 谦、王宇、刘宏 玉、刘成 帅、崔伟 佳、逄 昔莎、裴 萍。DB37/T 3990 2020 1 食 品中四 氯虫酰胺 残留量 的测定 液相色 谱-质谱/质谱 法 1 范围 本标准 规定 了食 品中 四氯 虫酰胺 残留 量的 液相 色谱-质谱/质谱 检测 方法。本标准 适用 于大 米、玉 米、甘 蓝、番 茄、苹 果、干 辣椒、猪 肉、鸡 肝、牛 奶、鸡 蛋中 溴氰 虫酰 胺残留量的 测定，其 它食 品可 参照执 行。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB 2763 食品 安全 国家 标 准 食 品中 农药 最大 残留 限量 GB/T 6682 分析 实 验室 用 水规格 和试 验方 法 3 原理 试样经 乙腈 提取，分 散固 相萃取 净化（油 脂含 量高 的样品 须先 用乙 腈饱 和正 己烷去 脂和 冷冻 去 脂）后，用 液相 色谱-质谱/质 谱仪测 定，外标 法定 量。4 试剂和 材料 除另有 说明 外，所用 试剂 均为分 析纯，水 为GB/T 6682 规定 的一 级水。4.1 试剂 4.1.1 乙腈（CH3CN，75-05-8）：色谱 纯。4.1.2 甲醇（CH3OH，67-56-1）：色谱 纯。4.1.3 正己烷（C6H14，110-54-3）：色 谱纯。4.1.4 乙酸铵（C2H7NO2，631-61-8）：色谱 纯。4.1.5 氯化钠（NaCl，7647-14-5）：用 前 在450 灼烧 4 h，冷 却后 密封 备用。4.1.6 无水硫 酸镁（MgSO4，7487-88-9）：用前 在650 灼烧4 h，贮藏 干燥 器中，冷却 后备 用。4.2 溶液配 制 4.2.1 乙腈饱 和正 己烷 溶液：取 适量乙 腈加 入正 己烷 中，剧烈振 摇，静置 至出 现明 显分层，弃 去乙 腈层备用。4.2.2 乙酸铵 溶液（5 mmol/L）：称 取0.385 g 乙酸 铵用 水溶解 并定 容 至 1 L。4.3 标准品 四氯虫 酰胺（Tetrachlorantraniliprole，C17H10BrCl4N5O2，CAS 号：1101384-14-6），纯度 95.5%。DB37/T 3990 2020 2 4.4 标准溶 液配 制 4.4.1 标准储 备溶 液 准确称 取适 量的 标准 品（精确至0.1 mg），用 乙腈 溶解，配制 成浓 度为1 000 g/mL 的 标准 储备 溶液，该 储备 溶液-18 保 存，保 存期 为一 年。4.4.2 标准中 间溶 液 准确吸 取适量 标准 储备溶 液，用 甲醇配 制成 浓度为10 g/mL 的标 准中 间溶液，该溶 液4 保存，保存期 为一 个月。4.4.3 基质标 准工 作溶 液 根据需 要准 确吸 取适 量标 准中间 溶液，用样 品空 白 基质溶 液配 制成0.000 5、0.001、0.002、0.005、0.01、0.02 mg/L 的 系列 标 准工作 溶液。该 溶液 应现 用现配。4.5 材料 4.5.1 N-丙基 乙二 胺（Primary secondary amine，PSA）：粒度 40 60 m。4.5.2 十八烷 基硅 烷键 合相（C18）：粒 度 40 60 m。4.5.3 有机滤 膜：0.22 m。5 仪器和 设备 5.1 液相色 谱-三重 四级 杆质 谱 仪：配 备电 喷雾 离子 源（ESI）。5.2 高速组 织捣 碎机。5.3 高速粉 碎机。5.4 匀浆机。5.5 天平：感 量0.01 mg 和0.01 g。5.6 振荡器。5.7 超声波 仪。5.8 离心机，转 速不 低 于 8 000 r/min。5.9 涡旋混 合器。5.10 具塞离 心管：50 mL，10 mL。6 试样制 备与 保存 6.1 大米、玉米、干 辣椒 取500 g 代表 性样品，用 高 速粉碎 机处理 至粉 状，均 分成两 份，分 别装 入洁 净 容器作 为试样，密 封并做好 标识。于-18 以 下保存。6.2 甘蓝、番茄、苹 果 取500 g 代表 性样品，用 匀 浆机制 成匀浆，均 分成两 份，分 别装入 洁净 容器作 为试样，密封 并做 好标识。于-18 以下 保存。6.3 猪肉、鸡肝 DB37/T 3990 2020 3 取500 g 代表 性样品，用 高 速组织 捣碎机 制成 糊状，均分成 两份，分别 装入洁 净容器 作为试 样，密封并做 好标 识。于-18 以下保 存。6.4 牛奶、鸡蛋 取500 g 代表 性样品，充 分 混匀，均分成 两份，分别 装入洁 净容器 作为 试样，密封并 做好标 识。于-18 以下 保存。7 分析步 骤 7.1 提取 7.1.1 大米、玉米 称取4 g 试 样（精确 至0.01 g）于50 mL 具 塞离 心管 中，加5 mL 水 混匀，放 置30 min。准确 加入20.0 mL乙腈 振荡 提取30 min，超 声提取5 min 后 加入3 g 无 水 硫酸镁 和2 g 氯 化钠，涡 旋 振荡1 min，8 000 r/min离心5 min 后，待净 化。7.1.2 甘蓝、番茄、苹 果 称取10 g 试 样（精确 至0.01 g）于50 mL 具 塞离 心管 中。准 确加 入20 mL 乙腈 振 荡提取30 min，超声提取5 min 后加 入3 g 无水 硫酸镁 和2 g 氯 化钠，涡 旋 振荡1 min，8 000 r/min 离心5 min 后，待净 化。7.1.3 干辣椒 称取4 g 试样（精 确至0.01 g）于50 mL 具塞 离心 管中，加15 mL 水 混匀，放 置30 min。准确 加入20.0 mL乙腈 振荡 提取30 min，超 声提取5 min 后 加入3 g 无 水 硫酸镁 和2 g 氯 化钠，涡 旋 振荡1 min，8 000 r/min离心5 min 后，待净 化。7.1.4 猪肉、鸡肝、牛 奶、鸡蛋 称取4 g 试 样（精确 至0.01 g）于50 mL 具 塞离 心管 中，加5 mL 水 混匀（检 测牛 奶时，不需 加水），放置30 min。准 确加 入20.0 mL 乙 腈振 荡提 取30 min，超声提 取5 min 后加 入3 g 无 水硫酸 镁和2 g 氯化 钠，涡旋振 荡1 min，8 000 r/min 离心5 min 后，待净化。将10 mL 上 清液转 移至50 mL 具塞 离心 管中，加入10 mL乙 腈饱 和正己 烷，涡 旋振荡2 min，静置 分层，弃去正 己烷层，再 加入10 mL 乙腈 饱和正 己烷 重复操作一 次，然后 将离 心管 置于-18 冷冻30 min 后，迅速 取出2 mL 提取 液，待净化。7.2 净化 称取0.15 g 无水 硫酸 镁，0.10 g PSA 和0.10 g C18 置于10 mL 离 心管，吸 取2 mL 上述提 取液 至此 离心管中，涡旋1 min，8 000 r/min 离心5 min。取上 清 液过0.22 m 有机 微孔滤 膜后，供液相 色谱-质谱/质谱测 定。7.3 测定 7.3.1 液相色 谱参 考条 件 条件如 下：a)色谱柱：C18 柱，柱 长 150 mm，内 径2.1 mm，粒径 3 m，或等 效柱；b)流速：0.25 mL/min；DB37/T 3990 2020 4 c)进样量：5 L；d)柱温：30；e)流动相 及梯 度洗 脱条 件见 表 1。表1 流动相 及梯 度洗 脱条 件 时间 min 甲醇%乙酸铵溶液%0 25 75 0.5 25 75 2.5 90 10 6.0 90 10 6.1 25 75 10 25 75 7.3.2 质谱参 考条 件 条件如 下：a)电离方 式：电喷 雾电 离（ESI）；b)毛细管 电压：3.5 kV；c)干燥气 温度：350；d)辅助气（鞘 气）温度：350；e)雾化气、干 燥气、辅 助气（鞘气）均 为高 纯氮 气，使用前 应调 节各 气体 流量 以使质 谱灵 敏 度 达到检测 要求；f)扫描方 式：负离 子扫 描；g)检测方 式：多反 应监 测，参数见 表 2；h)多反应 监测 条件。表2 多反应 监测 条件 中文名称 英文名称 母离子 m/z 子离子 m/z 驻留时间/s 裂解电压/V 碰撞能量/eV 四氯虫酰胺 tetrachlorantraniliprole 535.8 499.7 0.2 120 3 201.9a 0.2 120 4 a 为定量子离子 7.3.3 标准曲 线的 制作 按浓度 由小 到大 的顺 序，依次分 析基 质标 准溶 液，得到相 应的 峰面 积。以 基 质标准 溶液 的浓 度为 横坐标，以相 应的 峰面 积为 纵坐标，绘 制标 准曲 线。7.3.4 试样溶 液的 测定 将试样 溶液注 入液 相色谱-质谱仪 中，得 到相 应的峰 面积，由标准 曲线 得到试 样溶液 中四氯 虫酰 胺的浓度。如果 试样 溶液 浓 度超过 标准 曲线 的上 限，须用乙 腈稀 释试 样溶 液至 线性范 围后 再进 行测 定。在上述仪 器条 件下，四氯虫 酰胺的 参考 保留 时间 为5.0 min。标准 品的MRM 总离 子 流图和 选择 离子 流图 参见附录A 中图A.1、图A.2。DB37/T 3990 2020 5 7.3.5 定性 如果样 品的 质量 色谱 峰保 留时间 与基 质标 准溶 液一 致，定 性离 子对 的相 对丰 度 与浓度 相当 的基 质 标准溶液 的相 对丰 度一 致，相对丰 度偏 差不 超过 表3 的 规定，则可 判断 样品 中存 在相应 的被 测物。表3 定性测 定时 相对 离子 丰度 的最大 允许 偏差 相对离子丰度 50%20%50%10%20%1 0%允许的相对偏差 2 0%2 5%3 0%5 0%7.4 空白试 验 除不称 取试 样外，均 按上 述步骤 进行。8 分析结 果的 表述 试样中 四氯 虫酰 胺的 含量 按式（1）计算：10001000mVX.(1)式中：X 试样 中四 氯虫 酰胺 的含量，单 位为 毫克 每千 克（mg/kg）；从基 质标 准曲 线得 到的试 样测 定液 中四 氯虫 酰胺的 浓度，单 位为 微克 每毫升（g/mL）；V 试样 测定 液的 最终 定容体 积，单位 为毫 升（mL）；m 最终 样液 所代 表的 试样质 量，单位 为克（g）。注：计算结果应扣除空白值，保留两位有效数字。9 精密度 9.1 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值与其 算术 平均 值的 比值（百分 率），应 符合附录C 的要 求。9.2 在再现 性条 件下 获得 的两 次独 立 测定 结果 的绝 对差 值与其 算术 平均 值的 比值（百分 率），应 符合附录D 的要 求。10 定量限 和回 收率 10.1 定量限 大米、玉 米、干辣 椒、猪 肉、鸡肝、牛 奶、鸡 蛋中 四氯虫 酰胺 定量 限为0.005 mg/kg，甘蓝、番 茄、苹果中 四氯 虫酰 胺定 量限 为0.002 mg/kg。10.2 回收率 不同样 品中 四氯 虫酰 胺添 加水平 及回 收率 参见 附录B。DB37/T 3990 2020 6 A A 附 录 A（资料 性附 录）四氯虫 酰胺 标准 品谱 图 四氯虫 酰胺 标准 品MRM 总 离 子流图 见图A.1，选 择离 子 流图见 图A.2。图A.1 四氯虫 酰胺 标准 品 MRM 总 离子流 图 图A.2 四氯虫 酰胺 标准 品 MRM 选 择离子 流图 DB37/T 3990 2020 7 B B 附 录 B（资料 性附 录）样品的 添加 浓度 及回 收率 的实验 数据 样品的 添加 浓度 及回 收率 的实验 数据 见表B.1。表B.1 样品的 添加 浓度 及回 收率 的实验 数据 样品名称 添加浓度/（mg/kg）回收率范围/%大米 0.005 83.4 103.1 0.04 87.6 106.4 0.2 78.9 91.3 玉米 0.005 84.7 101.4 0.01 81.2 97.9 0.02 86.8 108.5 甘蓝 0.002 90.7 113.9 0.2 88.2 104.3 2 95.5 112.8 番茄 0.002 88.5 107.3 0.2 82.4 97.6 2 79.9 90.4 苹果 0.002 92.1 113.2 0.8 89.4 108.2 2 93.6 106.9 干辣椒 0.005 87.3 112.8 5 79.6 103.5 7 81.7 98.9 猪肉 0.005 85.9 116.4 0.2 83.2 96.0 2 80.3 104.1 鸡肝 0.005 85.6 116.8 0.01 81.4 100.5 0.15 78.3 96.2 牛奶 0.005 84.0 111.1 0.05 92.5 106.3 0.6 80.9 107.0 鸡蛋 0.005 78.1 115.7 0.15 82.4 102.2 0.2 84.6 107.1 DB37/T 3990 2020 8 C C 附 录 C（规范 性附 录）实验室 内重 复性 要求 实验室 内重 复性 要求 见表C.1。表C.1 实验室 内重 复性 要求 被测组分含量 mg/kg 精密度%0.0 0 1 36 0.0 0 1 0.01 32 0.0 1 0.1 22 0.1 1 18 1 14 DB37/T 3990 2020 9 D D 附 录 D（规范 性附 录）实验室 间再 现性 要求 实验室 间再 现性 要求 见表D.1。表D.1 实验室 间再 现性 要求 被测组分含量 mg/kg 精密度%0.0 0 1 54 0.0 0 1 0.0 1 46 0.0 1 0.1 34 0.1 1 25 1 19 _