海洋微藻饵料规模化培养技术规范DB3302／T 162-2018.pdf

ICS 65.150 B 51 DB3302 浙 江 省 宁 波 市 地 方 标 准 DB 3302/T 162 2018 海洋微藻 饵料规模 化培养技 术规范 2018 06 21 发布 2018 06 21 实施 宁 波 市 质 量 技 术 监 督 局 发布 DB3302/T 162 2018 I 前 言 本 标准 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。本标准 由 宁 波市 海洋 与渔 业局提 出。本标准 由 宁 波市 水产 标准 化技术 委员 会归 口。本标准 起草 单位：宁 波甬 盛水产 种业 有限 公司、宁 波市海 洋与 渔业 研究 院、浙江万 里学 院、宁波 大学。本标准 主要 起草 人：申屠 基康、董迎 辉、林志 华、徐继林、何 琳、沈庞 幼、姚韩韩、陈 彩芳。DB3302/T 162 2018 1 海 洋微藻 饵料规模 化培养 技术规范 1 范围 本标准 规 定了等鞭 金藻（Isochrysis galbana）、亚 心形扁藻(Platymonas subcordiformis)、牟氏角毛藻（Chaetoceros muelleri）、三角褐 指藻（Phaeodactylum tricornutum）等水 产育苗 和养殖生产用 海洋 微藻 饵料 规模 化培养 的设 施设 备和 条件、藻种 选择 与培 养液 配制、保种 与培 养、日常 管理、收获与 保存。本标准 适用 于海 洋微 藻饵 料规模 化培 养，其它 单胞 藻培养 可参 照执 行。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB 11607 渔业 水质 标准 NY 5362 无公 害食 品 海 水养殖 产地 环境 条件 SC/T 2047 水 产养 殖用 海 洋微藻 保种 操作 技术 规范 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 一级培 养 藻类的 保种和 初级扩 种培 养阶段。在无 菌保种 室中，用500ml 5000ml 三角 烧 瓶作培 养容器，用 消毒纱布 和纸 张封 口，每天2 次4 次摇 晃震 荡进 行培 养。营养 盐为 分析 纯级 别。3.2 二级扩 种培 养 藻类的 二级扩 种培养 阶段，用于 生产培 养接 种。用50L 100L 白塑 料桶 或 尼龙 袋封闭 式培养，培 养期间连 续充 气。营养 盐为 化学纯 级别。3.3 三级生 产性 培养 藻类的 生产 性培 养阶段，用于供 给育 苗中 的饵料。一般 用 面积 为20m240m2的 培养池，蓄 水高 度为80cm100cm。营养 盐为 化 学纯或 工业 纯级 别。3.4 一次性 培养 指在一 定的 容器 中，根 据 藻类的 营养 需要 加入 特定 的培养 液并 接种，在适 宜 的环境 条件 下培 养，当藻类细 胞生 长繁 殖达 到一 定密度 后，一次 全部 收获 或进一 步扩 大培 养。3.5 半连续 培养 DB3302/T 162 2018 2 指当培 养的 藻细 胞达 到一 定密度 时，根据 藻类 的生 长状态 和育 苗需 求量 收获 一部分 浓藻 液，并补 充等量的 新培 养液 继续 培养。3.6 连续培 养 指在室 内培 养容 器中 封闭 式培养，采 用自 动控 温、人工光 源、充气 培养 条件，不断 取出 达到 一定 密度的藻 细胞 培养 液，同时 加入等 量新 的培 养液 的培 养方法。4 设施、设备 和条 件 4.1 保种室 用于保 存和 培养 高浓度 微 藻藻种。一 般以20m230m2为宜，室内 保持 清洁卫 生，严格 消毒。要 求采光好，并配 备人 工光 源和 空调等 保温 设施，还 应配 显微镜、冰 箱、藻 种培 养架 及常用 仪器、药 品试 剂等。4.2 清洗消 毒间 用于清 洗和 消毒 培养容 器 与器材。一 般以15m220m2为宜，配有 清洗 水槽、消 毒池、恒温 烘箱、电炉或炉 灶等。4.3 扩种室（棚）用于对 一级 藻 种 进一 步扩 种培养。要求 采光 通风 良 好，配备 遮光 帘或 遮阳 布 等条件 设施，以调 节光照。按 照100m2三级 池配 备80 个120 个白 塑料 桶或150 个200 个 尼龙 袋。4.4 海水消 毒池 用于消 毒经 沉淀、沙 滤处 理后的 海水。海 水消 毒池 体积与 饵料 培养 池体 积比 在1：5 1：10。4.5 三级生 产性 培养 池 用 于 提 供水 产 苗种 生产 及养 殖 所 需要 的 海水 微藻 饵料 培 养。三 级 饵料 培养 池的 规 格 以2 种 3种为宜，小 的容 积为10m315m3、大的 容积 为20m335m3，形状一 般为 长方 形，培养 池深度80cm 100cm 饵料培养水 体与 育苗 水体 的比 例以1:1.5 1:2 为宜。4.6 水质条 件 水质应 符合GB 11607 和NY 5362要 求。5 藻种选 择和 培养 液配 制 5.1 藻种选 择 要 求 藻 种繁 殖 率高、增殖速 度 快、耐 高 温。用 于贝类 育 苗 生产 的 藻种，一般可 选 择 等鞭 金 藻、牟氏角毛 藻、亚心 形扁 藻、三角褐 指藻 等种 类。5.2 培养液 配制 培养液 配制 方法 见 表A.1。5.3 最适培 养条 件 DB3302/T 162 2018 3 最适培 养条 件见 表A.2。6 保种与 培养 6.1 培养工 具、设施 与海 水的 消毒 6.1.1 工具消 毒及 方法 6.1.1.1 煮沸消 毒 适于充 气管、玻 璃器 皿等 小型容 器和 工具 的消 毒，消毒时 在水 中加1%碳 酸钠 效果更 好。充气 管、散气石煮 沸消 毒10min 15min；锥 形瓶 内 应 加少 量淡 水，置 电炉 上加 热煮 沸10min 15min，大型 锥形 瓶消毒应在 瓶口 上放 一玻 璃漏 斗或培 养皿，消 毒完 毕后 用消毒 的纸 或纱 布包 扎瓶 口。6.1.1.2 酒精消 毒 适于中 小型 容器 和工 具的 消毒，用 纱布 蘸70%酒精 在 容器、工 具的 表面 涂抹5min 后，用消 毒水 冲洗2次。6.1.1.3 漂白粉 消毒 将有效 氯含 量为28%32%的漂白 粉配 置成0.02%0.04%水 溶液，把 容器、工 具 在溶液 中浸 泡0.5h，再用消 毒水 冲洗3次4次。6.1.1.4 高锰酸 钾消 毒 将容器、工具 等浸泡在新配的500 106g/ml 高锰酸钾溶液中5min，然后用消毒水冲洗2 次3次。对 玻璃 钢水 槽、水泥 池等 消 毒，可 用0.05%浓 度的 高锰 酸钾溶 液泼 在池 壁上，泼 洒 两遍后 刷洗 池底，10min后再用 消毒 水冲 洗干 净。6.1.2 海水消 毒 6.1.2.1 一级保 种用 水消 毒 洁净砂 滤海 水经 过脱 脂棉 过滤、加热 煮沸，冷 却后 使用。6.1.2.2 二级扩 种用 水消 毒 洁净砂 滤海 水经 过煮 沸消 毒或次 氯酸 钠消 毒后 使用。6.1.2.3 三级生 产性 培养 用水 消毒 用30mg/kg 50mg/kg 漂白 粉消毒6h8h，以漂 白粉 用量1/3 的 硫代 硫酸 钠中 和 余氯，曝气2h后 使用。6.2 保种 按照SC/T 2047 的规 定执 行。6.3 一级培 养 根据不 同培 养藻 种，适时 加入配 制好 的培 养液，参 照图A.2 调 节温 度、光照 等 培养条 件。6.4 二级培 养 DB3302/T 162 2018 4 6.4.1 接种时 间 接种时 间为 上午7点9点，最好 为晴 天。6.4.2 培养方 法 白 塑 料 桶 洗净 后，倒 入 消毒 过 的 洁 净过 滤 海水 至 桶的2/3 以上。接好 消 毒 过的 充 气 管 和气 石，按比例加 入培 养液，接 入藻 种，桶 口盖 上尼 龙薄 膜，进行通 气培 养。6.5 三级生 产性 培养 6.5.1 培养条 件 根据藻种 要求调控培育室温，自然 光照结合人工光源调节 光 照度。按2m2布一个充气头，保持培养藻液均 匀悬 浮。6.5.2 培养方 式和 方法 开放式，一次 性培 养或 半 连续培 养。水 温低 于25 时，采 用 连 续培 养方 法；水温高 于25 时，采 用一次性 培养 的方 法。6.5.3 接种 把二级 扩种 培养 的藻 液接 入生产 性培 养池 的培 养液 中。外 观藻 液颜 色正 常、无 大量沉 淀和 明显 附壁现象。一般 加入 藻种 与培 养液的 比例 为1:3 1:6。接种时 间为 上午7点9点。金藻、扁 藻等 细胞 在水 层中分 布均 匀，接种 温差 不大，光照 适合，接 种时间可 放宽。7 日常管 理 7.1 观察与 处理 每天上、下 午定 时观 察藻 液颜色、运 动情 况，有无 附 壁、沉 淀、菌膜 和敌 害生 物 现象。生长 良好 时，等鞭金 藻呈 金褐 色，牟氏 角毛藻 为金 黄色，亚 心形 扁藻为 鲜绿 色，三角 褐指 藻为深 褐色；有 浮游 能 力 种类上浮 活波 呈烟 雾状，无 浮游能 力种 类均 匀悬 浮于 水中。如 有异 常立 即清 除，及 时接 种培 养补 充空 缺 的藻种。遇高 温、强日 照，应及时 在培 养室 顶加 盖布 帘或聚 乙稀 彩布 条遮 光降 温。定期进 行显 微镜 检查，从 藻细胞 的形 态、悬浮、污 染等了 解其 生长 情况。7.2 调节光 照、温度 和 pH 值 在保种 室和 二、三级 培养 场 所，应 根据 藻类 生长 繁殖 要 求的适 宜光 照范 围进 行调 节。利 用控 温设 施，将室温 调控 至其 生长 的适 宜温度 范围。当pH值 超出 适宜范 围，可用1mol/L HCl 溶液或NaOH 溶液 来调 节培养液的pH值。7.3 预防污 染措 施 定 期 进 行室 内 消毒，禁止非 生 产 人员 进 入培 养 室。三 级 培 养池 充 气要 适 度，防 止 水 花飞 溅 造成 池间污染。7.4 记录 DB3302/T 162 2018 5 对每次 检查、接 种和 培养 液添加 以及 日常 操作 和观 察结果 进行 记录。8 收获与 保存 8.1 收获 微藻经 各阶 段培 养，达到 苗种及 养殖 生产 所要 求的 藻种浓 度和 质量 即可 收获 投喂。8.2 保存 培养出 的海洋 微藻液 暂时 不用时，可利 用离 心、浓 缩设备 制成藻 膏，放入温 度-18 的 冷冻间 冷冻保存，以 备使 用。9 标准化 模式 图 海洋微 藻饵 料三 级培 养的 标准化 模式 图见 附录B。DB3302/T 162 2018 6 A A 附 录 A（规范 性附 录）常用海 洋微 藻饵 料培 养液 配方和 最适 培养 条件 表A.1 常用海 洋微 藻饵 料培 养液 配方和 最适 培养 条件 培养液名称 培养液配方 成 份 用 量 等鞭金藻培养液 硝酸钠（NaNO3）60 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）5 g 柠檬酸铁（FeC6H5O7）0.5 g 维生素B1 100 mg 维生素B12 1 mg 消毒海水 1000 L 牟氏角毛藻培养液 硝酸钠（NaNO3）60 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）4 g 硅酸钠（Na2SiO3）5 g 柠檬酸铁（FeC6H5O7）0.5 g 消毒海水 1000 L 亚心形扁藻培养液 硝酸钠（NaNO3）60 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）4 g 尿素（NH2CONH2）18 g 柠檬酸铁（FeC6H5O7）0.5 g 消毒海水 1000 L 三角褐指藻培养液 硝酸钠（NaNO3）60 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）4 g 硅酸钠（Na2SiO3）4.5 g 柠檬酸铁（FeC6H5O7）0.5 g 消毒海水 1000 L 表A.2 常用海 洋微 藻饵 料最 适培 养条件 种类 温度（）盐度 pH值 光照（lx）等鞭金藻 2025 1530 7.58.5 6 000 9 000 牟氏角毛藻 25 30 1525 8.08.9 10 000 15 000 亚心形扁藻 2028 3040 7.58.5 5 000 10 000 三角褐指藻 1020 2532 7.58.5 3 000 5 000 DB3302/T 162 2018 7 B 附 录 B（规范 性附 录）海洋微 藻饵 料三 级培 养的 标准化 模式 图 月 3 4 5 6 7 8 9 10 旬 上 中 下 上 中 下 上 中 下 上 中 下 上 中 下 上 中 下 上 中 下 上 中 下 海洋微藻饵料的三级培养 主要生产技术措施 1、用水消毒：洁净砂滤海水经过脱脂棉过滤、加热煮沸，冷却后使用。2、培养液配制方法见附录A.1。3、培养方法：根据不同培养藻种，适时加入配制好的培养液，参照附录 A.2 调节温度、光照等培养条件。1、用水消毒：洁净砂滤海水经过煮沸消毒或次氯酸钠消毒后使用。2、接种时间：接种时间为上午 7 点9 点，最好为晴天。3、培养方法：白塑料桶洗净后，倒入消毒过的洁净过滤海水至桶的 2/3 以上。接好消毒 过的充气管和气石，按比例加入培养液，接入藻种，桶口盖上尼龙薄膜，进行通气培养。1、用水消毒：用 30 g/m350g/m3漂白粉消毒6h8h，以漂白粉 用量 1/3 的硫代硫酸钠中和余氯，曝气 2h 后使用。2、培养条件：根据藻种要求调控培育室温，自然光照结合人工光源调节光照。按 2m2布一个充气头，保持培养藻液均匀悬浮。3、培养方式和方法：开放式，一次性培养或半连续培养。水温低于25 时，采用连续培养方法；水温高于 25时，采用一次性 培养的方法。4、接种：把二级扩种培养的藻液接入生产性培养池的培养液中。一般加入藻种与培养液的比例为1:3 1:6。接种时间为上午7 点9 点。_ 一级培养 二级培养 三级生产性培养