蔬菜中4-羟基百菌清残留量的快速测定　液相色谱-串联质谱法DB37／T 4177—2020.pdf

ICS 65.100 G 25 DB37 山东省 地 方 标 准 DB 37/T 4177 2020 蔬菜中4-羟基百菌 清残留量 的快速测 定 液相色谱-串联质谱 法 Determination of 4-hydroxychlorothalonil residues in vegetables Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method 2020-09-30 发布 2020-10-30 实施 山 东 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB37/T 4177 2020 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由山 东省 农业 农村 厅提出 并组 织实 施。本标准 由山 东省 农业 标准 化技术 委员 会种 植业 标准 化分技 术委 员会 归口。本标准 起草 单位：山 东省 农业环 境保 护和 农村 能源 总站。本标准 主 要 起草 人：吴成、王蕾、赵 志强、于 富昌。DB37/T 4177 2020 1 蔬 菜中 4-羟基 百菌 清残留 量的快速 测定 液相色谱-串 联质谱 法 1 范围 本标准 规定 了蔬 菜中4-羟 基百菌 清（参见 附录A）残 留量液 相色 谱-串联 质谱 测 定方法。本标准 适用 于蔬 菜中4-羟 基百菌 清残 留量 的快 速测 定。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。GB 2763 食品 安全 国家 标 准 食 品中 农药 最大 残留 限量 GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 3 原理 试样用 乙腈 匀浆 提取，盐 析离心 后，取上 清液，过 滤后用 液相 色谱-串 联质 谱 仪检测，外 标法 定 量。4 试剂和 材料 除另有 规定 外，所有 试剂 均为色 谱纯，水 为符 合GB/T 6682 中规 定的 一级 水。4.1 试剂 4.1.1 乙腈（CH3CN，75-05-8）。4.1.2 甲醇（CH3OH，67-56-1）。4.1.3 甲酸（CH2O2，64-18-6）。4.1.4 醋酸铵（C2H7NO2，631-61-8）。4.1.5 氯化钠（NaCl，7647-14-5），分 析纯，140 烘烤4 h。4.2 溶液配 制 0.1%甲酸+5 mmol/L 醋酸 铵 水溶液：称取0.385 g醋 酸 铵于500 mL烧 杯中，用水 充分溶 解后，准确 加入1 mL 甲酸，将 上述 溶液 转移至1 000 mL 容量 瓶中，用水定 容，现用 现配。4.3 标准品 4-羟基 百菌 清标 准品：纯 度98%，标准 品信 息参 照附录A。4.4 标准溶 液配 制 4.4.1 标准储 备溶 液 DB37/T 4177 2020 2 准确称 取适 量（精确 至0.1 mg）4-羟 基百 菌清 标准 品 于10 mL 容 量瓶 中，用甲 醇 溶解并 定容 至刻 度，配制成1 000 mg/L 的 标准 储 备溶液（或 购买 有证 标准 储备溶 液），0 4 保 存，保 存期 为6 个月。4.4.2 中间标 准溶 液 准确吸 取适 量的 标准 储备 溶液（4.4.1），用 甲醇 稀 释配制 成10 mg/L 的4-羟 基 百菌清 中间 标准 溶液，0 4 保存，保 存期 为2周。4.4.3 标准工 作溶 液 准确吸 取适量 的中 间标准 溶液（4.4.2），用空白 样 品基质 溶液稀 释配 制成所 需浓度 的标准 工作 溶液，现 用现 配。4.5 材料 微孔滤 膜：有机 系，0.22 m。5 仪器和 设备 5.1 液相色 谱-串联 质谱 仪：配 有电喷 雾负 离子 源（ESI-）。5.2 分析天 平：感量 分别 为 0.000 01 g 和0.01 g。5.3 组织捣 碎机。5.4 旋涡混 合器。5.5 均质器：转 速不 低 于 15 000 r/min。5.6 离心机：转 速不 低 于 5 000 r/min。6 试样制 备 蔬菜样 品取样 部位 按GB 2763 的规 定执行。对 于个体 较小的 样品，取样 后全部 处理；对于个 体较 大的基本 均匀 样品，可在 对 称轴或 对称 面上 分割 或切 成小块 后处 理；对 于细 长、扁平或 组分 含量 在各 部分有差异 的样 品，可在 不同 部位切 取小 片或 截成 小段 后处理；取 后的 样品 将其 切碎，充分 混匀，用 四 分 法取样或 直接 放入 组织 捣碎 机中捣 碎成 匀浆，放 入洁 净的样 品盒 内，密封 并做 好标记。将样品 于-18 以下冷冻 保存。7 分析步 骤 7.1 提取 称取15.0 g 试样（精 确至0.1 g）于100 mL 离心 管中，加入30 mL 乙腈，用 均质 器 在12 000 r/min 匀浆提取2 min，加入6 g氯 化钠，再振 荡提 取1 min，4 200 r/min 离心5 min，取 上清 液 约2 mL，用0.22 m 滤膜过滤，待测。7.2 测定 7.2.1 液相色 谱 串联 质谱 参考 条件 参考条 件 如 下：a)色谱柱：Shim-pack XR-ODS 色 谱柱，50 mm 2.0 mm(i.d.)，1.6 m，或相 当者；DB37/T 4177 2020 3 b)流动相：A 为0.1%甲酸+5 mmol/L 醋 酸铵 水溶 液（4.2），B 为甲 醇，梯度 洗脱 程序见 表 1；流速：0.35 mL/min；c)柱温：40；d)进样体 积：10.0 L；e)扫描方 式：负离 子模 式；f)检测方 式：多反 应监 测（MRM），多反 应监 测条 件参 照附 录B；g)加热块 温度：400；h)脱溶剂 管(DL)温 度：250；i)干燥气（N2）流 速：15.0 L/min，纯度 99.999%；j)雾化气（N2）流 速：3.0 L/min，纯度 99.999%；k)电喷雾 负离 子源（ESI-）接口电 压：-3.5 kV；l)检测器 电压：1.74 kV；m)碰撞气（Ar）压 力：0.23 MPa。表1 梯度洗 脱程 序 时间 min A/%B/%0.5 90 10 2.0 50 50 5.0 50 50 9.0 5 95 11.5 5 95 13.0 90 10 注：以上质谱条件是在SHIMADZU LCMS-8040 质谱仪上完成的，列出 试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。7.2.2 定性测 定 被 测 试 样中4-羟基 百 菌清色 谱 峰 的保 留 时间 与 相应标 准 色 谱峰 的 保留 时 间相比 较，相对 误 差应 在 2.5%之 内。在相同 实验 条件 下进 行样 品测定 时，如果 检出 的色 谱峰的 保留 时间 与基 质标 准工作 溶液 相一 致，并且在扣 除背 景后 的样 品质 谱图中，4-羟 基百 菌清 的 质谱定 量和 定性 离子 均出 现，而且 同一 检测 批次，样品中4-羟基 百菌 清的 定性 离子和 定量 离子 的相 对丰 度比与 质量 浓度 相当 的基 质标准 工作 溶液 相比，其 允许偏差 不超 过表2规 定的 范 围，则 可判 断样 品中 存在4-羟基 百菌 清。表2 定性时 相对 离子 丰度 的最 大允许 偏差 相对离子丰度 50%20%至 50%10%至 20%10%允许相对偏差 20%25%30%50%7.2.3 定量测 定 本方法 采用外 标法 单定量 离子对 定量测 定,定 量用 标 准溶液 采用基 质标 准工作 溶液。在仪器 最佳 工作条件 下，对基 质标 准工 作溶液 进样，绘 制标 准工 作曲线，用 标准 工作 曲线 对样品 进行 定量，样 品 溶 液DB37/T 4177 2020 4 中4-羟 基百 菌清 响应 值均 应在仪 器测 定的 线性 范围。本方法 的4-羟基 百菌 清标 准物质 多反 应监 测色 谱 图参照附 录A，质 谱图 参照 附 录C。7.3 空白试 验 除不称 取试 样外，均 按上 述步骤 进行。7.4 平行试 验 按以上 步骤 对同 一试 样进 行平行 测定。8 结果计 算和 表述 液相色 谱-串联 质谱 测定 结 果可由 计算 机按 外标 法自 动计算，也 可按 式(1)计算：Vm.(1)式中：质 量分 数，指试 样 中4-羟 基百 菌清 残留 量，单位为 毫克 每千 克（mg/kg）；从 标准 工作 曲线 上 得到的 试样 中4-羟基 百菌 清的质 量浓 度，单位 为毫 克每升（mg/L）；V 提 取溶 剂总 体积，单位为 毫升（mL）；m 试 样的 质量，单 位 为克（g）；计算结 果应 扣除 空白 值，计算结 果以 重复 性条 件下 获得的 两次 独立 测定 结果 的算术 平均 值表 示，保留两位 有效 数字，含 量超 过1 mg/kg 时保 留三 位有 效 数字。9 精密度 9.1 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值与其 算术 平均 值的 比值（百分 率），应 符合附录E 的要 求。9.2 在再现 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值与其 算术 平均 值的 比值（百分 率），应 符合附录F 的要 求。10 定量限 和回 收率 10.1 定量限 本方法 的定 量限（LOQ）参 照附录A。10.2 回收率 当添加 水平 为LOQ、5 LOQ、10LOQ 时,添加 回收 率 参照附 录D。DB37/T 4177 2020 5 A A 附 录 A（资料 性附 录）4-羟基 百菌 清中 英文 名称、分子 式、CAS 号、保留 时间、定量 限和 标准 物质 多反应 监测 色谱 图 4-羟基 百菌 清中 英文 名称、分子 式、CAS 号、保留 时 间和定 量限，参 照表A.1。标准物 质色 谱图，参照图A.1。表A.1 4-羟基 百菌 清中 英文 名称、分子 式、CAS 号、保留 时间和 定量 限 序号 中文名称 英文名称 分子式 CAS 号 保留时间 min 定量限 mg/kg 1 4-羟基百菌清 4-hydroxychlorothalonil C8HCl3N2O 28343-61-5 6.91 0.01 图A.1 4-羟基 百菌 清标 准物 质多 反应监 测色 谱图 DB37/T 4177 2020 6 B B 附 录 B（资料 性附 录）4-羟基 百菌 清监 测离 子对、碰撞 能量 和碎 裂电 压 4-羟基 百菌 清监 测离 子对、碰撞 气能 量和 碎裂 电压，参照 表B.1。表B.1 4-羟基 百菌 清监 测离 子对、碰撞 能量 和碎 裂电 压 序号 化合物名称 电离模式 母离子 子离子 Q1/V CE/V Q3/V 相对离子强度/%1 4-羟基百菌清-245 175*27 25 29 71.8 210 11 25 12 注：“-”代表负离子模式，“*”指定量离子，“Q1”和“Q3”分别指质谱仪碰撞池前端和后端四极杆预杆偏置电压，“CE”指碰撞池电压，“相对离子强度”指定性参考离子与定量离子强度比。DB37/T 4177 2020 7 C C 附 录 C（资料 性附 录）4-羟基 百菌 清标 准物 质多 反应监 测（MRM）质 谱图 4-羟基 百菌 清标 准物 质多 反应监 测（MRM）质 谱图，参照图C.1。图C.1 4-羟基 百菌 清标 准物 质多 反应监 测（MRM）质 谱图 DB37/T 4177 2020 8 D D 附 录 D（资料 性附 录）4-羟基 百菌 清 在6 种 蔬菜 中的添 加回 收率 4-羟基 百菌 清在6种 蔬菜 中 的添加 回收 率，参照 表D.1。表D.1 4-羟基 百菌 清 在6 种 蔬菜 中的添 加回 收率 化合物名称 添加水平 mg/kg 菠菜%豇豆%番茄%甘蓝%黄瓜%韭菜%4-羟基百菌清 0.01 7086 73 91 8693 73 86 8091 7191 0.05 8096 80 92 7696 76 88 8092 8092 0.1 8898 82 98 7896 78100 7891 7987 DB37/T 4177 2020 9 E E 附 录 E（规范 性附 录）实验室 内重 复性 要求 实验室 内重 复性 要求 如表E.1 所示。表E.1 实验室 内重 复性 要求 被测组分含量 mg/kg 精密度%0.001 36 0.001 0.01 32 0.01 0.1 22 0.1 1 18 1 14 DB37/T 4177 2020 10 F F 附 录 F（规范 性附 录）实验室 间再 现性 要求 实验室 间 再 现性 要求 如表F.1。表F.1 实验室 间再 现性 要求 被测组分含量 mg/kg 精密度%0.001 54 0.001 0.01 46 0.01 0.1 34 0.1 1 25 1 19 _