甘蔗及其制品中葡聚糖的测定方法 免疫比浊法DB45／T 2205-2020.pdf

ICS 6 7.1 8 0C C S X 3 0DB45广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准DB 4 5/T 2 2 0 5 2 0 2 0甘 蔗 及 其 制 品 中 葡 聚 糖 的 测 定 方 法 免 疫比 浊 法T e s t m e t h o d f o r d e x t r a n i n s u g a r c a n e a n d i t s p r o d u c t s-I m m u n e T u r b i d i m e t r ym e t h o d2 0 2 0-1 1-1 3 发 布 2 0 2 0-1 2-2 0 实 施广 西 壮 族 自 治 区 市 场 监 督 管 理 局发 布D B 4 5/T 2 2 0 5 2 0 2 0I前 言本 文 件 按 照 G B/T 1.1 2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分：标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规定 起 草。本 文 件 由 广 西 壮 族 自 治 区 糖 业 发 展 办 公 室 提 出 并 宣 贯。本 文 件 由 广 西 糖 业 标 准 化 技 术 委 员 会 归 口。本 文 件 起 草 单 位：广 西 糖 业 集 团 有 限 公 司、广 东 省 生 物 工 程 研 究 所（广 州 甘 蔗 糖 业 研 究 所）、广 西壮 族 自 治 区 分 析 测 试 研 究 中 心、广 西 壮 族 自 治 区 产 品 质 量 检 验 研 究 院、广 西 糖 业 集 团 防 城 精 制 糖 有 限 公司。本 文 件 主 要 起 草 人：柳 颖、林 荣 珍、常 国 炜、马 步、邓 卫 利、杨 宇 格、刘 桂 云、缪 路、黎 志 德、张九 花、杨 华、林 金 梅、方 海 香、梁 达 奉。D B 4 5/T 2 2 0 5 2 0 2 01甘 蔗 及 其 制 品 中 葡 聚 糖 的 测 定 方 法 免 疫 比 浊 法1 范 围本 文 件 规 定 了 甘 蔗 及 其 制 品 中 葡 聚 糖 含 量 免 疫 比 浊 法 的 测 定。本 文 件 适 用 于 广 西 境 内 甘 蔗 及 其 制 品 中 葡 聚 糖 含 量 为 3.5 m g/L 6 0 0 m g/L 的 测 定。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款。其 中，注 日 期 的 引 用 文 件，仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件；不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本文 件。G B/T 6 6 8 2 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法G B/T 9 2 8 9 制 糖 工 业 术 语3 术 语 和 定 义G B/T 9 2 8 9 界 定 的 以 及 下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件。3.1葡 聚 糖 d e x t r a n又 称 右 旋 糖 酐，是 蔗 糖 经 明 串 珠 菌(L e u c o n o s t o c m e s e n t e r o i d e s)转 化 形 成 的，一 种 完 全 由-D-吡喃 葡 萄 糖 单 体 构 成 的 多 糖，分 子 式 C6H1 0O5n，分 子 量 通 常 为 数 万 至 数 百 万。4 原 理利 用 葡 聚 糖 与 葡 聚 糖 单 克 隆 抗 体 特 异 性 反 应，形 成 葡 聚 糖-葡 聚 糖 单 克 隆 抗 体 复 合 物 析 出，使 反 应体 系 浊 度 增 加，浊 度 增 量 和 葡 聚 糖 含 量 成 正 比，通 过 增 量 浊 度 与 标 准 系 列 来 比 较 定 量。5 试 剂5.1 除 非 另 有 说 明，本 标 准 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯，水 为 G B/T 6 6 8 2 规 定 的 一 级 水。5.2 盐 酸（H C l）溶 液（1+9 9）：量 取 1 m L 盐 酸，加 入 9 9 m L 水，混 匀。5.3 缓 冲 溶 液：称 取 0.8 0 0 g 氯 化 钠（N a C l）、0.0 2 0 g 氯 化 钾（K C l）、0.3 6 3 g 十 二 水 合 磷 酸 氢 二 钠（N a2H P O4 1 2 H2O）和 0.0 2 4 g 磷 酸 二 氢 钾（K H2P O4），溶 于 9 0 m L 水 中，以 盐 酸 溶 液（1+9 9）调 p H 至 7.2，移 入 1 0 0 m L 容 量 瓶，定 容。5.4 蔗 糖 储 备 液（2 5 0 g/L）：称 取 2 5.0 g 蔗 糖（C1 2H2 2O1 1，优 级 纯，且 葡 聚 糖 含 量 低 于 5 m g/k g），用水 溶 解，移 入 1 0 0 m L 容 量 瓶，定 容。5.5 葡 聚 糖 标 准 品:C A S 号：9 0 0 4-5 4-0，纯 度 9 9。D B 4 5/T 2 2 0 5 2 0 2 025.6 葡 聚 糖 标 准 储 备 液（1 m g/m L）：称 取 葡 聚 糖 标 准 品 2 g（准 确 至 0.1 m g）于 已 恒 重 的 称 量 瓶 内，放 于 干 燥 箱 内 在 1 0 5 下 干 燥 3 h，取 出，放 在 干 燥 器 内，冷 却 至 室 温，称 量（准 确 至 0.1 m g），计 算葡 聚 糖 标 准 品 中 的 水 分 含 量。根 据 葡 聚 糖 标 准 品 的 水 分 含 量，迅 速 称 取 未 经 干 燥 的 葡 聚 糖，使 其 含 无 水葡 聚 糖 约 0.1 0 0 0 g，加 入 2.0 m L 水 溶 解 成 糊 状，放 置 约 1 0 m i n，不 时 搅 拌，使 粒 子 均 匀 水 化，当 有 凝胶 物 存 在 时，多 次 加 入 少 量 水 至 约 2 5 m L 将 凝 胶 状 物 溶 解，移 入 1 0 0 m L 容 量 瓶，定 容。此 溶 液 现 配 现 用。5.7 葡 聚 糖 标 准 系 列 溶 液：分 别 吸 取 葡 聚 糖 标 准 储 备 液（1 m g/m L）0 m L、0.2 m L、0.4 m L、0.6 m L、0.8 m L、1.0 m L 于 1 0 m L 容 量 瓶，再 分 别 吸 取 蔗 糖 储 备 液（2 5 0 g/L）6 m L 于 上 述 6 个 1 0 m L 容 量 瓶 中，定 容。此 葡 聚 糖 标 准 系 列 溶 液 的 质 量 浓 度 分 别 为 0 m g/L、2 0 m g/L、4 0 m g/L、6 0 m g/L、8 0 m g/L 和 1 0 0 m g/L。可 根 据 样 品 中 葡 聚 糖 的 实 际 含 量 配 制 相 应 质 量 浓 度 的 葡 聚 糖 标 准 系 列 溶 液，质 量 浓 度 不 超 过 6 0 0 m g/L。5.8 葡 聚 糖 单 克 隆 抗 体 溶 液：称 取 0.0 6 0 g 葡 聚 糖 单 克 隆 抗 体（鼠 抗 葡 聚 糖 I g M，效 价 大 于 1 06），溶于 1 5 m L 缓 冲 溶 液 中，静 置 3 0 m i n，移 入 带 盖 棕 色 小 瓶，盖 好，备 用。该 溶 液 应 现 配 现 用，在 4 下 贮存 期 为 7 d。6 仪 器 和 设 备6.1 浊 度 仪：配 1 c m 四 面 透 光 测 试 皿；入 射 光 波 长：(8 6 0 3 0)n m（L E D 光 源）或 4 0 0 n m 6 0 0 n m（钨 灯），检 测 器 处 在 与 入 射 光 垂 直 的 位 置 上。6.2 分 析 天 平：感 量 为 0.1 m g。6.3 干 燥 箱：控 温 范 围 室 温 为+5 至 2 5 0，温 度 分 辨 率 为 0.1。6.4 移 液 器：量 程 为 2 0 L。6.5 滤 膜：水 系，厚 薄 均 匀，膜 面 上 分 布 着 对 称、均 匀、穿 透 性 强 的 微 孔，孔 径 为 0.2 2 m。6.6 秒 表：精 度 为 1 s。7 测 定 步 骤7.1 试 样 制 备初 压 汁、混 合 汁、中 和 汁、清 汁 等 锤 度 小 于 2 5 B x 的 液 态 样 品，用 滤 网 或 滤 布 过 滤，再 以 水 系 滤 膜过 滤 备 用；糖 浆、糖 膏、糖 糊 等 锤 度 大 于 或 等 于 2 5 B x 的 液 态 样 品 和 固 态 样 品，称 取 1 5.0 g 2 0.0 g 样品（m），用 水 稀 释 或 溶 解，移 入 1 0 0 m L 容 量 瓶，定 容，以 水 系 滤 膜 过 滤 备 用。7.2 测 定 方 法7.2.1 标 准 曲 线 制 作用 2 m L 吸 量 管 吸 取 1.5 m L 葡 聚 糖 单 抗 溶 液 置 于 测 试 皿，放 入 浊 度 仪，盖 上 浊 度 仪 盖 子，放 置 1 m i n后 立 即 测 定 浊 度 值（N标 0）；取 出 测 试 皿，用 移 液 器 将 1 5 L 葡 聚 糖 标 准 系 列 溶 液 加 入 葡 聚 糖 单 抗 溶 液中，开 启 秒 表 计 时，盖 上 测 试 皿 盖 子，上 下 颠 倒 6 次 混 匀，混 匀 过 程 中 应 避 免 产 生 气 泡，取 下 测 试 皿 盖子，将 测 试 皿 放 入 浊 度 仪，盖 上 浊 度 仪 盖 子，放 置 1 m i n 后 立 即 测 定 浊 度 值（N标），应 在 2 m i n 内 测 定完 毕，按 8.1.1 计 算 反 应 溶 液 体 系 浊 度 增 量（N T U标）。以 葡 聚 糖 浓 度 为 横 坐 标，浊 度 增 量 为 纵 坐 标，绘 制 标 准 曲 线。7.2.2 试 样 中 葡 聚 糖 浓 度 测 定吸 取 1.5 m L 葡 聚 糖 单 抗 溶 液 置 于 测 试 皿，放 入 浊 度 仪，盖 上 浊 度 仪 盖 子，放 置 1 m i n 后 立 即 测 定 浊 度值（N样 0）；取 出 测 试 皿，用 移 液 器 将 1 5 L 试 样 溶 液 加 入 葡 聚 糖 单 抗 溶 液 中，开 启 秒 表 计 时。盖 上 测 试D B 4 5/T 2 2 0 5 2 0 2 03皿 盖 子，上 下 颠 倒 6 次 混 匀，混 匀 过 程 中 应 避 免 产 生 气 泡。取 下 测 试 皿 盖 子，将 测 试 皿 放 入 浊 度 仪，盖上 浊 度 仪 盖 子，放 置 1 m i n 后 立 即 测 定 浊 度 值（N样），应 在 2 m i n 内 测 定 完 毕，按 8.1.2 计 算 反 应 体 系 浊 度增 量（N T U样），与 标 准 系 列 比 较 定 量，得 到 试 样 中 葡 聚 糖 浓 度（c）。8 计 算 及 结 果 表 示8.1 浊 度 增 量8.1.1 标 准 品 测 定反 应 溶 液 体 系 的 浊 度 增 量 按 式（1）计 算：标 标 标.（1）式 中：标 测 定 标 准 品 时 反 应 溶 液 体 系 的 浊 度 增 量，单 位 为 散 射 浊 度 单 位（N T U）；标 测 定 标 准 品 时 反 应 后 体 系 浊 度，单 位 为 散 射 浊 度 单 位（N T U）；标 测 定 标 准 品 时 反 应 前 体 系 浊 度，单 位 为 散 射 浊 度 单 位（N T U）。计 算 结 果 表 示 到 小 数 点 后 一 位。8.1.2 试 样 测 定反 应 溶 液 体 系 的 浊 度 增 量 按 式（2）计 算：样 样 样.（2）式 中：样 测 定 样 品 时 反 应 溶 液 体 系 的 浊 度 增 量，单 位 为 散 射 浊 度 单 位（N T U）；样 测 定 样 品 时 反 应 后 体 系 浊 度，单 位 为 散 射 浊 度 单 位（N T U）；样 测 定 样 品 时 反 应 前 体 系 浊 度，单 位 为 散 射 浊 度 单 位（N T U）。计 算 结 果 表 示 到 小 数 点 后 一 位。8.2 样 品 中 葡 聚 糖 含 量低 锤 度 液 态 样 品：将 浊 度 增 量 代 入 标 准 曲 线，得 到样 品 中 葡 聚 糖 含 量，单 位 为 毫 克 每 升（m g/L），计 算 结 果 取 整 数。高 锤 度 液 态 样 品 及 固 态 样 品 按 式（3）计 算：.（3）式 中：样 品 中 葡 聚 糖 含 量，单 位 为 毫 克 每 千 克（m g/k g）；由 标 准 曲 线 计 算 得 到 的 葡 聚 糖 浓 度，单 位 为 毫 克 每 升（m g/L）；样 品 称 样 量，单 位 为 克（g）；1 0 0 样 品 定 容 体 积，单 位 为 毫 升（m L）。计 算 结 果 取 整 数。D B 4 5/T 2 2 0 5 2 0 2 049 精 密 度在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 大 于 算 数 平 均 值 的 1 5。1 0 其 他对 初 压 汁、混 合 汁、中 和 汁、清 汁 等 锤 度 小 于 2 5 B x 的 液 态 样 品，本 方 法 检 出 限 为 3.5 m g/L,定 量限 为 1 5 m g/L；对 糖 浆、糖 膏、糖 糊 等 锤 度 大 于 等 于 2 5 B x 的 液 态 样 品 和 固 态 样 品，以 取 样 量 1 5.0 g 计，本 方 法 检 出 限 为 2 3.3 m g/k g，定 量 限 为 1 0 0 m g/k g。_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _中华人民共和国广西地方标准甘蔗及其制品中葡聚糖的测定方法 免疫比浊法DB45/T 22052020广西 壮族自治区市场监督管理局统一印制 版权专有 侵权必究