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ICS 67 X 04 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 5189.9 2020 天然植物 提取物中 危害成分 检测 第9 部分：辣椒提取 物中叔丁 基对苯二 酚的测定 2020-06-28 发布 2020-07-28 实施 河 北 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB13/T 5189.9 2020 I 前 言 本标准 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。DB13/T 5189 天然 植物 提 取物中 危害 成分 的测 定 共分12 个部 分：第1 部 分：亚硝 酸盐 的测 定；第2 部 分：二氧 化硫 的测 定；第3 部 分：正己 烷、丙酮、乙酸 乙酯、甲 醇和 乙 醇5 种有 机溶 剂残 留的 测定；第4 部 分：辣椒 提取 物中 砷、铅、镉、铬、汞 的测 定；第5 部 分：万寿 菊提 取物 中对氧 基苯 胺的 测定；第6 部 分：万寿 菊提 取物 中乙氧 基喹 啉的 测定；第7 部 分：天然 番茄 红中 苯并 芘 的测 定；第8 部 分：辣椒 提取 物中 苏丹红 的测 定；第9 部 分：辣椒 提取 物中 叔丁基 对苯 二酚 的测 定；第10 部分：辣 椒红 中赭 曲 霉毒 素 A 的 测定；第11 部分：叶 黄素 中苯 的 测定；第12 部分：甜 菊糖 苷中 邻 苯二甲 酸酯 的测 定。本部分 为DB13/T 5189的 第9部分。本标准 由河 北省 市场 监督 管理局 提出。本标准 起草 单位：河 北省 食品检 验研 究院、晨 光生 物科技 集团 股份 有限 公司、石家 庄海 关技 术 中心、清 河县 食品 药品 检验 检测中 心。本标准 主要 起草 人：王红、张凤 霞、焦良、李 挥、田俊生、卜 丽双、艾 连峰。DB13/T 5189.9 2020 1 天 然植物 提取物中 危害成 分检测 第 9 部分：辣椒提 取物中 叔丁基对 苯二酚 的测定 1 范围 本部分 规定 了 辣 椒提 取物 中叔丁 基对 苯二 酚的 测定 方法。本部分 适用 于 辣 椒提 取物 中叔丁 基对 苯二 酚的 测定。2 原理 辣椒提 取物 中叔 丁基 对苯 二酚经 环己 烷-乙酸 乙酯 溶 解后，使用 凝胶 渗透 色谱（GPC）净 化，采用反相C18（4.6mm250mm，5 m）色 谱柱，以 乙腈-1.0%乙酸水（40+60）为 流动 相，等 度洗 脱，荧光 检测器检 测，根据 色谱 峰的 保留时 间定 性，外标 法定 量。3 试剂或 材料 除非另 有说 明，本方 法所 用试剂 均为 分析 纯，水为GB/T 6682 规 定的 一级 水。3.1 试剂 3.1.1 甲醇（CH3OH）：色 谱纯。3.1.2 乙腈（C2H3N）：色谱 纯。3.1.3 冰醋酸（CH3COOH）。3.1.4 环己烷（C6H12）3.1.5 乙酸乙 酯（C4H8O2）3.2 试剂配 制 环己烷-乙 酸乙 酯（1+1，V/V）：量取500mL 环己 烷与500mL 乙酸 乙酯 混合 均 匀。3.3 标准品 叔丁基 对苯 二酚（Tert butylhydroquinone，C10H14O2，CAS:1948-33-0）标准 物质，纯度 99%，或采用 具有 标准 物质 证书 的 叔丁 基对 苯二 酚 标 准溶 液。3.4 标准溶 液配 制 3.4.1 叔 丁基 对苯 二酚 标准 储备 溶液（1000 mg/L）：准确 称取 叔 丁基 对苯 二酚 标准 物质 100.00 mg，用甲醇 定容 至 100 mL，摇 匀，0 4 避光 保存，有效 期 6 个月。DB13/T 5189.9 2020 2 3.4.2 叔丁基 对苯 二酚 标准 使用 溶液（10 mg/L）：准确 量 取1000 mg/L 叔 丁基 对苯 二酚标 准储 备液1 mL，于 100 mL 容 量瓶 中，用甲 醇溶 解，定容 于 100 mL，0 4 避 光保 存，有 效 期 6 个 月。3.4.3 叔丁基 对苯 二酚 标准 系列 工作溶 液：分别 吸取 叔丁 基 对苯 二酚 标准 使用 溶 液0mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL，用 甲醇 定容 至 10mL，配 制成 质量浓 度 分别 为 0mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L 的混 合标 准使 用液，现 用现配。4 仪器和 设备 4.1 高效液 相色 谱仪：配 有荧 光检测 器。4.2 凝胶渗 透色 谱净 化系 统（GPC）。4.3 分析天 平：感 量 0.1mg 和0.01 mg。4.4 涡旋混 匀器。4.5 超声波 清洗 器。4.6 离心机：转 速3000r/min 4.7 旋转蒸 发仪。5 试验步 骤 5.1 提取 准确称 取样 品1g（精 确至0.0001 g）于10 mL 容量 瓶 中，加入 环己 烷-乙酸 乙酯（1：1，V/V）混 合溶液溶 解，定容，摇 匀，上清液 过0.45 m有 机滤 膜 后作待 净化 液。5.2 净化 取待净 化液 于GPC 样 品管 中，进行GPC 净化，进 样量5 mL，收 集洗 脱液，于40 下旋转 蒸发 至干。残渣用1.0 mL甲醇 超 声溶 解，过0.45 m 有机 滤膜，供液相 色谱 检测。凝胶渗 透色 谱净 化参 考条 件：a)凝胶渗 透色 谱净 化系 统；b)凝胶柱 规 格400 mm 25 mm（内 径）；c)色谱柱 填 料Bio-Beads S-X3（38-75 m）；d)流动相：环 己烷-乙 酸乙 酯（1+1，V/V）；e)流速：4.7 mL/min；f)收集时 间：25-35 min。5.3 测定 5.3.1 色谱参 考条 件 a)色谱柱：C18，粒径5m，250 mm4.6 mm（内径），或 性能 相当 者；b)流动相：乙 腈-1.0%乙酸 水（40+60）等 度洗 脱；c)柱温：40 C；DB13/T 5189.9 2020 3 d)激发波 长：293nm；发射 波 长：332 nm；e)流速：1.0 mL/min；f)进样量：20 L。5.3.2 测定 根据样 液中 叔丁 基 对 苯二 酚含量 情况，选 定与 样液 浓度相 近的 标准 使用 溶液，标准 使 用 溶液 和 样液中的 叔丁 基 对 苯二 酚响 应值均 应在 仪器 检测 的线 性范围 内，如果 样液 中 叔 丁基 对 苯二 酚含 量超 出 检测的线 性范 围，则稀 释 至 适当倍 数后 后再 进样。以 保留时 间定 性，外标 法定 量。叔 丁基 对苯 二酚 液相色谱图 参见 附录A。按上述 条件，同 时做 空白 试验。6 试验结 果 试样中 叔丁 基 对 苯二 酚含 量按式（1）计 算。fmV cX 10001000 c 0）（1）式中：X 试样 中 叔 丁基 对苯 二酚 的含量，单 位为 毫 克 每千 克，mg/kg；c 试 样 溶 液中 叔丁 基对苯二酚的 浓度，mg/L；c0 空 白试 样溶 液中 叔丁 基 对苯 二酚 的 浓 度，mg/L；V样液 最终 定容 体积，单 位为毫 升，mL；f稀释 倍数；m试样 溶液 代表 试样 的 质 量，g。计算结 果以 重复 性条 件下 获得的 两次 独立 测定 结果 的算术 平均 值表 示，结果 保留三 位 有 效 数 字。7 精密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测试 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的10%。8 检出限 和定 量限 检出限 为0.02 mg/kg，定 量限为0.06mg/kg。DB13/T 5189.9 2020 4 A A 附 录 A（资料 性附 录）叔丁基 对苯 二酚 标准 液色 谱图 叔丁基 对苯 二酚 标准 液相 色谱图，如 图A.1 所 示。图A.1 0.1mg/L 叔丁 基对 苯 二酚标 准溶 液液 相色 谱图
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