水质　藻类计数　视野计数法DB37／T 4163—2020.pdf

ICS 13.060 C 51 DB37 山东省地方标准 DB37/T 4163 2020 水质 藻 类计数 视野计数 法 Water quality Algae count Field count method 2020-09-25 发布 2020-10-25 实施 山 东 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB37/T 4163 2020 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 原理.1 4 试 剂和 材料.1 5 仪 器和 设备.1 6 样品.2 7 分 析步 骤.3 8 结 果计 算与 报告.4 9 精 密度.5 10 质 量保 证和 质量 控制.5 附录A（资 料性 附录）常见藻 类图 谱.6 参考文 献.20 DB37/T 4163 2020 II 前 言 本标准 按照GB/T 1.1 2009 给出 的规 则起 草。本标准 由山 东省 住房 和城 乡建设 厅提 出并 组织 实施。本标准 由山 东省 城镇 给水 排水标 准化 技术 委员 会归 口。本标准 起草 单位：山东 省 城市供 排水 水质 监测 中心、国 家城 市供 水水 质监 测 网福州 监测 站、东 营市自来水 公司 水质 检测 中心、国家 城市 供水 水质 监测 网武汉 监测 站、潍坊 市公 用事业 产品 服务 质量 监 测 中心、山 东省 济南 生态 环境 监测中 心。本标准 主要 起草 人：贾 瑞 宝、孙韶 华、王明 泉、赵 清 华、石近 淼、刘轲、逯南 南、朱 光 进、李 令春、张昊天、田 立平、郑 琳琳、王辉、王 晓波、钱 君丽、吴锦 铃。DB37/T 4163 2020 1 水质 藻 类计数 视野计 数法 1 范围 本标准 规定 了测 定水 中藻 类计数 的视 野计 数法。本标准 适用 于生 活饮 用水 及其水 源水 中藻 类计 数的 测定。取样1 L，浓缩 至50 mL 时，本方法 检测 限为0.1 万个/L。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 5750.2 2006 生 活 饮用水 标准 检验 方法 水 样的采 集与 保存 GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 水和 废水 监测 分析 方法（第 四版 增 补版）中 国环境 科学 出版 社 3 原理 藻类漂 浮在 水体 中，难以 进行活 体显 微观 察、计数。利用 鲁哥 氏液 固定 藻类，并使 藻类 的鞭 毛、纤毛、细 胞核 及细 胞内 淀粉 染色，通过 计数 藻类 细胞 或个体 数目，反 映水 体中 藻类的 分布 情况。4 试剂和 材料 除非另 有说 明，分析 时均 使用符 合国 家标 准的 分析 纯试剂，实 验用 水为 纯水。4.1 纯水：符 合GB/T 6682 二 级及以 上分 析实 验室 用水 要求。4.2 碘：分 析纯。4.3 碘化钾：分 析纯。4.4 甲醛：分析 纯，含 量 37%40%。4.5 鲁 哥氏 液：碘（4.2）50 g；碘化 钾（4.3）100 g；纯水（4.1）1 000 mL。称 取 100.0 g 碘化 钾，溶于800 mL 蒸 馏水 中，待 完全溶 解后 充分 摇动，再 加入 50.0 g 碘。待 碘完 全 溶解后 定容 至 1 000 mL，储存于 磨口 棕色 试剂 瓶内。4.6 40%甲 醛溶 液：甲醛（4.4）40 mL；纯水（4.1）60 mL。量 取40 mL 甲醛，倒 入100 mL 烧杯 中，再量取 60 mL 纯水，倒 入烧 杯中搅 拌均 匀，储存 于磨 口棕色 试剂 瓶内。5 仪器和 设备 5.1 显微镜：具10 倍目 镜，具 20 倍、40 倍、100 倍 物 镜，测 微尺。5.2 竖式 采 水器：不 锈 钢 2 L。5.3 样品瓶：棕 色玻 璃瓶，4 L。DB37/T 4163 2020 2 5.4 筒形分 液漏 斗：1 000 mL。5.5 虹吸管：管 内直 径3 mm5 mm，一端 使用 孔径 64 m 筛绢扎 紧。5.6 锥形离 心管：塑 料，具 盖50 mL。5.7 量筒：50 mL 和100 mL。5.8 滴管：1 mL。5.9 浮游生 物计 数框：体积100 L，面积 20 mm 20 mm，横 竖划 分 为 1010 行，共 100 个计 数小 格，每个计 数小 格面 积 为 2 mm 2 mm。5.10 浮游生 物计 数器。5.11 烧杯：500 mL。5.12 容量瓶：1 L。6 样品 6.1 样品的 采集 6.1.1 采样点 位的 设置 采样点 的设 置要 有代 表性，采集 的藻 类能 够代 表一 个水体 或者 一个 水体 不同 区域的 实际 状况。根 据水体和 周围 环境 的自 然生 态类型、人 类干 扰的 空间 特性，布设 有代 表性 的采 样点位（断 面），与 长 期 定位观测 及水 化学 监测 点位（断面）尽 可能 保持 一致，同时 考虑 采样 点位（断 面）布 设的 经济 性。6.1.2 采样频 次 采样频 率一 般全 年至 少四 次（每 季度 一次），条件 允许时，每 个月 一次。当 出现水 华风 险时，要 随时增加 采样次 数。考虑到 浮游藻 类的日 变化，监测 时间尽 量选择 在一 天的相 近时间，比如 上午 的810时，如 果无 法做 到，则需 记录下 每次 实际 的监 测时 间。6.1.3 采样要 求 生活饮 用水的 采集，参照GB/T 5750.2 2006，取 样 时应打 开龙头 放水数 分钟，排出 沉积物，采 集水样。地表水 的采 集，需根 据采 样点位 的水 深设 置采 样层 次。水 深2 m时，不 分层，在表 层下0.5 m 采集；水深为2 m 5 m时，分别在 表层下0.5 m、底层 上0.5 m 各采集 一次；水深5 m 时，则在 表层下0.5 m 处、中层以 及底 层上0.5 m处 各 采集一 次。不同 层次 采集 的样品 作等 比例 混合 样处 理。地下水 的采 集，对于 自喷 的泉水，可 在涌 口处 直接 采集；对于 不自 喷的 泉水，应将 停滞 在抽 水管 中的水汲 出，新水 更替 后再 进行采 集；从井 水采 集水 样，应 在充 分抽 汲后 进行，以保 证水 样的 代表 性。采样量 根据 浮游 藻类 的密 度而定。一 般原 则使 用竖 式采水 器（5.2）采 集不 少 于2 L 水样。6.1.4 样品标 识和 记录 在样品 瓶外 侧标 注样 品编 号，在 现场 采样 记录 表上 记录采 样日 期、天气 状况、水体名 称、采样 地点、采样方 法等 信息。6.2 样品的 固定 和保 存 按照 水和废水监测分 析方法（第四版 增补版），取混 匀水样1 L倒入筒形分液漏 斗（5.4），加入10 mL 鲁哥 氏液（4.5）混匀，静 置24 h。未固定 的水 样在4 10 条件 下避 光保 存不 得超 过4 h。DB37/T 4163 2020 3 7 分析步 骤 7.1 浓缩 将虹吸 管（5.5）带 有筛 绢 的一端 放入水 样中，将上 层清液 缓慢吸 出（不可搅 动溶液 底部，如被 搅动则需 重新 静置 沉淀24 h），虹 吸管 使用 时随 液面 缓 慢向下 移动 并接 近上 液面，最 后将 剩余30 mL 40 mL样品转 入50 mL 量筒（5.7）中。为 减少 藻类 损失，用 少许纯 水冲 洗筒 形分 液漏 斗1 2 次并 转入50 mL 量筒中，最 终定容 至50 mL，移 入锥形 离心管（5.6），室 温下避 光保存，待 检。浓 缩液在14 d内 镜检 计数。如需长 期保 存（14 d），补加1 mL 2 mL 40%甲 醛溶液（4.6）。7.2 制片 7.2.1 新购买 的浮 游生 物计 数框（5.9）应 对其 体积 进行 校 准：吸 取100 L 纯水 注 入计数 框内，制片后应达 到无 气泡、无 溢出 的要求。7.2.2 将浓缩 液缓 慢多 次摇 匀后，将盖 玻片 斜盖 在计 数框 上，用 滴管（5.8）吸取0.1 mL 浓缩 液移 入计数框，在 计数 框中 一边 进样，另一 边出 气，避 免 气泡产 生。注满 后把 盖玻 片移正，盖 上盖 玻片，盖 玻片下不 能存 有气 泡。将计 数框放 置于 潮湿、暗 室内 静置 15 min 30 min，使 具 有气囊 类藻 类沉 降至 计数框底层，便 于计 数。7.3 镜检 7.3.1 预观察 在10 倍 目镜、20 倍物 镜下 定性观 察，在10 倍目 镜、40 倍物 镜下 计数，每 个视 野 以十几 个藻 体为 宜。若计数 框中 藻类 分布 不均 匀或杂 质粘 附无 法分 辨清 楚，再 次混 匀浓 缩液 重新 制片；若视 野中 藻类 过 多 难以计数 时，将浓 缩液 用纯 水（4.1）稀释 后重 新制 片。7.3.2 分类鉴 定 按照藻 类形 态，对照 标准 图谱进 行分 类。藻类 形态 学鉴定 到属。常 见藻 类图 谱见附 录A。7.3.3 计数面 积选 择 计数时，对计 数框 中的第2、5、8行共30 个计数 小格 进行计 数，视 野数 可按浮 游藻类 多少而 酌情 增减，以 优势 种类 超过300 个 细胞为 宜。若每 个视 野中 只有1 2个 藻体，则 全片 计数。计数 面积 选择 见图1。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 2 3 4 5 6 7 8 9 10 图1 计数面 积选 择 DB37/T 4163 2020 4 7.3.4 计数 7.3.4.1 当藻体 一半 以上 处于 计数 视野内 则计 数；当藻 体的 一 半在计 数视 野内 而另 一半 在计数 视野 外，计上不 计下，计 左不 计右，计数 规则 见 图 2。7.3.4.2 单一细 胞个 体，按照 细胞 计数，例如 针杆 藻、小环 藻、曲 壳藻、衣 藻等。7.3.4.3 不规则 团块 藻体，例 如微 囊藻、团藻 等，按照 估计 细胞计 数。7.3.4.4 规则团 块、胶被 囊类 藻体，根据 其细 胞数 量的 偶数 倍数特 性计 数。例如：色 球藻等 以两 个细胞计为 一个 藻体，卵 囊藻、平裂 藻、栅藻 等以 四个 细胞计 为一 个藻 体。7.3.4.5 丝状藻 体，以20 m 为 一 个计数 单位 进行 计数。例 如：伪鱼 腥藻、浮 丝藻、泽 丝藻、束 丝藻、鱼腥藻、颤 藻、席藻、直 链藻、水绵 等。丝状 藻体 断裂形 成藻 殖段，不 足 20 m 时，与 视野 中观 察到的下一 个藻 殖段 相加 后计 数。7.3.4.6 藻体细 胞残 体不 计数，未 完成分 裂的 按一 个细 胞计。图2 计数规 则 8 结果计 算与 报告 8.1 结果计 算 按照公 式（1）计算 每升 水 中藻类 的数 量：4=10wcbV ANnA V V.(1)式中：N 每升 水中 藻类 的数 量（万 个/L）；A 计数 框面 积，即100 个计数 小格；Ac 计数 面积，当 计数 第2、5、8 行时，计 数面 积 为30个 计数 小格；Vw 水样 经沉 淀浓 缩后 的样品 体积（mL）；Vb 计数 框体 积（mL），0.1 mL；V 水样 体积（L）；n 计数 所得 的藻 体的 个体数 或细 胞数。8.2 结果报 告 DB37/T 4163 2020 5 测定结 果小 数点 后位 数的 保留与 检测 限一 致，最多 保留三 位有 效数 字。9 精密度 9.1 阳性纯 藻种 精密 度 6家实 验室 对阳 性纯 藻种 进 行测定，实 验室 内相 对标 准偏差 为1.2%20.4%。9.2 实际水 样精 密度 6 家 实 验 室 对 藻 类 总 数100 万个/L 500 万个/L 的 地 表 水 进 行 测 定，实 验 室 内 相 对 标 准 偏 差 为7.1%15.0%；对 藻 类 总 数500 万个/L 2 000 万个/L 的 地 表 水 进 行 测 定，实 验 室 内 相 对 标 准 偏 差 为1.7%14.5%。10 质量保 证和 质量 控制 每批次 样品，取其 中一 个 样品的 浓缩 液，计 数两 片 取其平 均值。若两 片计 数 结果相 对偏 差大 于15%，则进行 第三 片计 数，结果 取其中 相近 两片 的平 均值。DB37/T 4163 2020 6 A A 附 录 A（资料 性附 录）常见藻 类图 谱 A.1 硅藻门 图A.1 脆杆藻 图A.2 脆杆藻 DB37/T 4163 2020 7 图A.3 菱形藻 图A.4 平板藻 图A.5 曲壳藻 DB37/T 4163 2020 8 图A.6 曲壳藻（侧 面观）图A.7 双壁藻 图A.8 小环藻 DB37/T 4163 2020 9 图A.9 星杆藻 图A.10 针杆藻 图A.11 直链藻 DB37/T 4163 2020 10 图A.12 舟形藻 A.2 蓝藻门 图A.13 颤藻 图A.14 浮丝藻 DB37/T 4163 2020 11 图A.15 鞘丝藻 图A.16 束丝藻 图A.17 微囊藻 DB37/T 4163 2020 12 图A.18 伪鱼腥 藻 图A.19 鱼腥藻 DB37/T 4163 2020 13 图A.20 泽丝藻 A.3 绿藻门 图A.21 栅藻 图A.22 刚毛藻 DB37/T 4163 2020 14 图A.23 胶网藻 图A.24 空球藻 图A.25 空星藻 DB37/T 4163 2020 15 图A.26 卵囊藻 图A.27 盘星藻 DB37/T 4163 2020 16 图A.28 水绵属 图A.29 衣藻 DB37/T 4163 2020 17 图A.30 实球藻 A.4 甲藻门 图A.31 多甲藻 DB37/T 4163 2020 18 图A.32 飞燕角 甲藻 A.5 隐藻门 图A.33 蓝隐藻（鞭 毛丢 失）DB37/T 4163 2020 19 图A.34 隐藻属 A.6 裸藻门 图A.35 裸囊藻 DB37/T 4163 2020 20 A.7 金藻门 图A.36 锥囊藻 DB37/T 4163 2020 21 参 考 文 献 1 胡 鸿钧,魏 印心.中 国淡水 藻类 系统、分 类及生 态M.科学 出版 社,2006.2 马放,杨基 先,魏利.环境 微生 物图 谱M.中 国 环境科 学出 版社,2010.3 陈茜.浙江 省主 要常 见淡水 藻类 图集（饮 用水 水源）M.中 国环 境科 学 出版社,2010.4 郑 洪萍.福 建省 大中 型水库 常见 淡水 藻类 图集M.中 国环 境科 学出 版社,2012._