豆芽中 6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、2,4-滴和赤霉素的测定 液相色谱-串联质谱法DB12／T 986—2020.pdf

ICS 65.020.20 B 16 DB12 天津市 地 方 标 准 DB12/T 986 2020 豆芽中6-苄基腺嘌 呤、4-氯苯氧乙酸 钠、2,4-滴和赤霉素的 测定 液相 色谱-串联 质谱法 Determination of residues of 6-benzylam inopurine,4-chlorphenoxyacetic sodium,2,4-D and gibberellic acid in bean sprout by liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2020-10-14 发布 2020-11-15 实施 天 津 市 市 场 监 督 管 理 委 员 会 发布 DB12/T 986 2020 I 前 言 本标准 依据GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。本标准 由天 津市 农业 农村 委员会 提出 并归 口。本标准 起草 单位：天 津市 农业质 量标 准与 检测 技术 研究所。本标准 主要 起草 人：李娜、邵辉、林 宏芳、刘 磊、李辉、张玉 婷、郭永 泽、卢娜、绳慧 珊、梁 静。DB12/T 986 2020 1 豆 芽中 6-苄基 腺 嘌 呤、4-氯苯 氧乙 酸钠、2,4-滴和 赤霉素 的测定 液相 色谱-串联 质谱法 1 范围 本 标 准 规定 了 豆芽 中6-苄基 腺 嘌 呤、4-氯苯 氧 乙酸钠、2,4-滴 和赤 霉 素残 留量 的 测 定-液 相 色谱-串联质 谱法 的方 法提 要、试剂和 材料、仪 器和 设备、试样 制备 与保 存、测 定 步骤、灵敏 度、准 确度 和 精密度。本标准 适用 于豆 芽中6-苄 基腺嘌 呤、4-氯 苯氧 乙酸 钠、2,4-滴和 赤霉 素单 个或 混 合物残 留量 的测 定。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日期的 引用 文件，仅 所注 日期的 版本 适用 于 本 文件。凡 是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包 括 所有的 修改 单）适用 于本 文件。GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 3 方法提 要 试样经 酸化乙 腈提 取，提 取液浓 缩、甲 醇定 容后，用液相 色谱-串联质 谱仪（LC-MS/MS）测定，基质外标 法定 量。4 试剂和 材料 4.1 基本要 求 除另有 说明 外，所用 试剂 均为分 析纯。所 用水 为GB/T 6682 规定 的一 级水。4.2 乙腈 色谱纯。4.3 甲醇 色谱纯。4.4 甲酸 色谱纯 4.5 6-苄基 腺嘌 呤、4-氯 苯氧 乙酸钠、2,4-滴 和赤 霉素 标准品 纯度 98.0%。4.6 标准溶 液的 配制 DB12/T 986 2020 2 4.6.1 标准储 备溶 液（200 mg/L）：准 确称 取各 种标 准 品10 mg（精 确 至0.1 mg），用甲 醇溶 解并 定容至50 mL，-18 避光 保存，有效 期 6 个月。4.6.2 混合标 准溶 液：分别 吸取 一定量 各种 农药 标准 储备 液于 50 mL 容量 瓶，用甲 醇稀释 并定 容至 刻度，配 制浓 度 为10 mg/L 的混合 标准 溶液，04 避光保 存，有效 期1 个月。4.6.3 基质匹 配标 准工 作溶 液：用空白 豆芽 基质 配制 浓度 分别 为 0.005、0.02、0.05、0.2、0.5、1.0 mg/L 的系 列标 准溶 液，供 液相色 谱-串联 质谱 仪分 析，现用 现配。5 仪器和 设备 5.1 液相色 谱-串联 质谱 仪：配 备电喷 雾离 子源（ESI）。5.2 分析天 平：感 量0.0001 g 和0.01 g。5.3 台式高 速离 心机：转 速不 低于 4000 r/min。5.4 匀浆机。5.5 涡旋混 合器。5.6 旋转蒸 发仪。5.7 纯水仪。6 试样制 备与 保存 样品用 四分 法缩 分出 适量，经匀 浆机 捣碎，分 取两 份试样，装 入清 洁容 器内，密封 并标 记。一 份 作为检样，一 份作 为留 样，于-18 保 存。7 测定步 骤 7.1 样品前 处理 准确称 取捣 碎的 试样5.00 g（精 确至0.02 g）于50 mL 聚丙 烯离 心管 中，加入20 mL 乙 腈，于旋 涡混合器上 涡旋2 min，加入0.4 mL 甲 酸，再 涡旋2 min，4000 r/min 离心5 min，上 清液转 移至100 mL 梨形瓶中，于40 条 件下 旋转 蒸发至 约2.5 mL，转 移至 刻度试 管中，用 甲醇 定容 至5 mL，过0.22 m 有机滤膜，供 液相 色谱-串 联质 谱 仪分析。7.2 仪器测 定 7.2.1 液相色 谱参 考条 件如 下：色谱柱：AcquityTM BEH C18 柱（2.150 mm，1.7 m）；流动相：A 相：乙腈；B 相：0.1%甲酸 水；梯度 洗脱 条件见 表 1。进样量：10 L；柱温：30。表1 梯度洗 脱条 件 时间(min)流速(mL/min)VA(%)VB(%)0 0.2 10 90 3 0.2 90 10 4 0.2 90 10 DB12/T 986 2020 3 4.01 0.2 10 90 5 0.2 10 90 7.2.2 质谱参 考条 件如 下：电离模 式：电喷 雾电 离(ESI)毛细管 电压：3.0 kV；离子源 温度：120；脱溶剂 气温 度：400；脱溶剂 气流 量：600 L/hr；锥孔反 吹气 流量：60 L/hr；检测方 式：多反 应监 测（MRM）；质谱采 集参 数见 表2。表2 4 种化 合物 的中 英文 名称、保留 时间 和质 谱检 测条 件 名称 保留时间(min)电离方式 定性离子对(m/z)定量离子对(m/z)锥孔电压(V)碰撞能量(V)6-苄基腺 嘌呤(6-benzylam inopurine)1.76 ESI+226.291.0 226.2147.9 226.291.0 37 25 17 赤霉素(gibberellic acid)1.80 ESI-345.2142.8 345.2239.0 345.2239.0 25 25 15 4-氯苯氧乙酸钠(4-chlorphenoxyacetic sodium)2.54 ESI-184.8126.5 184.8140.5 184.8126.5 23 13 10 2,4-滴(2,4-D)2.81 ESI-219.0124.5 219.0160.5 219.0160.5 21 26 14 7.3 定性 以表3 中保 留时 间及 定性 离 子定性，用 液相 色谱-串 联 质谱法 确证 应同 时满 足三 个要求：待 测样 品的保留时 间在 外标 标准 品的 保留时 间的2.5%之内；定 性离子 的信 噪比 大于3（S/N3）；与 外标 标准 品相比，样 品的 两个 离子 相对 丰度在 表3 规定 的许 可范 围 内。空 白添 加样 品中4种 化 合物的 总离 子流 色谱 图和特征离 子的 色谱 图参 见附 录A。表3 定性确 证时 相对 离子 丰度 的最大 允许 偏差 相对离子丰度比（%）允许的最大偏差（%）50 2 0 2050 2 5 1020 3 0 1 0 5 0 7.4 结果计 算 以 浓度 为横 坐标，以 定量 离子的 峰面 积 为 纵坐 标，绘制标 准曲 线，采用 外标 法定量。采 用单 点 或 者多点校 准。用色 谱数 据处 理软件 或按 公式（1）计 算 试样中 的目 标物 含量（mg/kg）。DB12/T 986 2020 4 mVAAss.(1)式中：试样 中 目 标物 的 含 量，单 位为 毫克 每千 克（mg/kg）；s 目标 物标 准工 作溶 液的浓 度，单位 为微 克每 升（mg/L）；A 试样 测定 液中 目标 物定量 离子 的峰 面积；As 标 准工 作溶 液中 目 标物定 量离 子的 峰面 积；V 试样 溶液 定容 体积，单位 为毫 升（mL）；m 试样 溶液 所代 表试 样的量，单 位为 克（g）；注：计算结果保留两位有效数字，当结果大于1 mg/kg 时保留三位 有效数字。8 灵敏度 豆芽中6-苄 基腺 嘌呤 的定 量限为0.005 mg/kg，2,4-滴的 定量 限为0.02 mg/kg，4-氯 苯氧 乙酸 钠、赤霉素 的定 量限 为0.05 mg/kg。9 准确度 和精 密度 9.1 准确度 9.1.1 豆芽 中6-苄基 腺嘌 呤在 0.005 mg/kg 0.5 mg/kg 添 加水平 上的 回收 率 在 70%120%之间；9.1.2 豆芽 中2,4-滴在 0.02 mg/kg 0.5 mg/kg 添加 水平 上的回 收率 在 70%120%之间；9.1.3 豆芽 中4-氯苯 氧乙 酸钠、赤霉素 在 0.05 mg/kg 0.5 mg/kg 添 加水 平上 的回 收率 在 70%120%之间。9.2 精密度 在重复 性条 件下 获得 的两 次独立 测定 结果 的绝 对差 值不得 超过 算术 平均 值的15%。DB12/T 986 2020 5 A A 附 录 A（资料 性附 录）4 种化 合物 的总 离子 流（TIC）色 谱图 和多 反应 监测（MRM）色 谱图 4种化 合物 的总 离子 流（TIC）色 谱图 见图A.1。注1：1.76 min-6-苄基腺嘌呤 注2：1.80 min-赤霉素 注3：2.54 min-4-氯苯氧乙酸钠 注4：2.81 min-2,4-滴 图A.1 4 种化 合物 的总 离子 流（TIC）色 谱图 4种化 合物 的多 反应 监测（MRM）色谱 图见图A.2。Time 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00%-5 95 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00%-5 95 2:MRM of 2 Channels ES+TIC(6-BA)2.74e7 1.76 1:MRM of 6 Channels ES-TIC 7.49e4 2.81 1.80 2.54 DB12/T 986 2020 6 图A.2 4 种化 合物 的多 反应 监测（MRM）色 谱图 _ Time 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00%-5 95 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00%-5 95 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00%-5 95 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00%-5 95 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00%-5 95 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00%-5 95 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00%-5 95 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00%-5 95 226.2 147.9(6-BA)5.22e5 1.75 226.2 91(6-BA)2.69e7 1.76 345.2 239(CHMS)2.00e4 1.79 345.2 142.8(CHMS)1.56e4 1.80 184.8 140.5(4-Cl-BYYSN)984 2.51 184.8 126.5(4-Cl-BYYSN)1.44e4 2.54 219 160.5(24-D)7.13e4 2.81 219 124.5(24-D)2.95e3 2.81