资源描述
ICS 11.020 C 62 DB32 江苏省 地 方 标 准 DB 32/T 3762.11 2020 新型冠状 病毒检测 技术规范 第 11 部分：全基因 组高通量 测序 Technical specifications for SARS-CoV-2 detection Part 11:Whole genome high-throughput sequencing 2020-07-29 发布 2020-07-30 实施 江 苏 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB32/T 3762.11 2020 I 前 言 DB32/T 3762 新 型冠 状病 毒检测 技术 规范 目 前分 为以下 部分：第1部 分：生物 样本 采 集、运 输和 保存；第2部 分：病毒 分离 与 鉴定；第3部 分：核酸 荧光PCR 检测 程序；第4部 分：重组 酶介 导 等温扩 增程 序；第5部 分：血清IgM 和IgG 抗体 酶联 免疫 吸附 检测 程序；第6部 分：血清IgM 和IgG 抗体 胶体 金免 疫层 析检 测程序；第7部 分：空气 样 本 检 测与评 估；第8部 分：物体 表面 检 测与评 估；第9部 分：医务 人员 职 业暴露 检测 与评 估；第10部 分：微量 血清 中和试 验；第11部 分：全基 因组 高通量 测序。本部分 为DB32/T 3762 的第11部 分。本部分 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。本部分 由江 苏省 卫生 健康 委员会 提出。本部分 由江 苏省 卫生 标准 化技术 委员 会归 口。本部分 起草 单位：江 苏省 疾病预 防控 制中 心、南京 医科大 学、苏州 第五 人民 医院、苏州 大学 附二 院、昆山市 疾病 预防 控制 中心。本 部分 主要 起草 人：崔 仑 标、葛以 跃、赵 康辰、朱 小娟、朱 宝立、程军 平、钱志远、罗晓 明、沈 欢喜。DB32/T 3762.11 2020 1 新型冠状 病毒检 测 技术规范 第 11 部分：全基 因组高通量 测序 1 范围 本 部分 规定 了新 型冠 状病 毒 全基 因组 高通 量测序 的 环境与 设施、设备 与耗 材、试剂、样 本前 处理 与核酸提 取、全基 因组 测序、结果 分析。本部分 适用 于新 型冠 状病 毒 全基 因组 高通 量测序。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅 注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。GB 19489 实 验室 生物安 全通用 要求 新型冠 状病 毒实 验室 生物 安全指 南 中华 人民 共和 国国家 卫生 健康 委员 会 医疗机 构临 床基 因扩 增管 理办法 原卫 生部 办公 厅 医疗机 构临 床基 因扩 增检 验实验 室工 作导 则 原 卫生部 检验 中心 国家卫 生计 生委 对高 通量 测序试 点实 验室 的要 求 原国 家卫 生计 生委 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件 3.1 全基因 组测 序 whole genome sequencing 对生物 体整 个基 因组 序列 进行测定，以获 得完 整的 基因组 信息。3.2 高通量 测序 high-throughput sequencing 能 一 次 并 行 对 几 十 万 到 几 百 万 条 DNA 分 子 进 行 序 列 测 定 的技术，又称 下 一 代 测序（next-generation sequencing）或 深度 测序（deep sequencing）技术。3.3 Reads 高通量 测序 平台 产生 的序列 称为reads，即测 序读 到 的碱基 序列 片段，是 测序 的最小 单位。3.4 测序深 度 sequencing depth 测序得 到的 总碱 基数 与待 测基因 组大 小的 比值。DB32/T 3762.11 2020 2 3.5 测序覆 盖度 sequencing coverage 测序得 到的 序列 占整 个基 因组的 比例。4 环境与 设施 4.1 实验室 资质 及级 别要 求 应 符合 新型 冠状 病毒 实 验室生 物安 全指 南 的 要 求，未经 培养 的感 染性 材 料的操 作在 采用 可靠 的方法灭 活前 进行 核酸 提取 及临床 样本 的灭 活等 操作，应在 生物 安全 二级 实验 室（BSL-2）进行，同 时 采用生物 安全 三级 实验 室（BSL-3）的个人防 护；感染 性材料 或活 病毒 在采 用可靠 方法 灭活 后 进 行的 核酸检测操 作应 在BSL-2进行。cDNA 制 备后 的相 关操 作可 在 生物 安全 一级 实验 室（BSL-1）进行。全 基因组测序实验室 应符合GB 19489、国家卫生计生 委对 高通量测序试点实验 室的 要求、医疗机构 临床基因扩 增管 理办 法、医疗机 构临 床基 因扩 增检 验实验 室工 作导 则 相关 要求。4.2 操作人 员资 质及 防护 要求 实验操 作人 员应 经过 生物 安全培 训并 取得 实验 活动 上岗证，在 身体 健康 状态 良好的 情况 下准 入。样本制备 及核 酸提 取防护 参照DB32/T 3762.3 的第4 章 进行，测序 相关 操作 采用BSL-1 的个人防护。5 设备与 耗材 5.1 设备 PCR 扩 增仪、核 酸提 取仪、核酸 定量 仪、高通 量测 序 仪。5.2 耗材 微量移 液器 及各 种配 套带 滤芯Tip 头、96孔 板磁 力架、1.5 mL EP 管、0.2 mL 8 联排管、96 孔PCR 板。6 试剂 核酸提 取试 剂盒、核酸 定 量试剂 盒、第 一链cDNA 合 成试剂 盒、随 机六 聚体 引 物、经验 证可 靠的 适合多重 反应 的PCR 扩 增试 剂盒、DNA 纯 化磁 珠、文 库制备 试剂 盒、高通 量测 序试剂 盒。7 样本前 处理 与核 酸提 取 参照DB32/T 3762.3 的 第7 章进行。8 模板制备 8.1 cDNA 制备 以提取 的核酸 为模 板，采用 第一 链cDNA 合 成试 剂盒 和随机 六聚体 引物，根据 试剂盒 说明书 在PCR扩增仪 上 制 备第 一链cDNA。DB32/T 3762.11 2020 3 8.2 混合引物 8.2.1 将所有 扩增 引物（附录 A）配置 为 100 M 储存 浓度，将 49 对 Pool 1 的 引物 各取 5 L 混匀，得490 L Pool 1 引物 池（引 物 总浓度 为 100 M），同样将 49 对 Pool 2 的 引物 各 取 5 L 混匀，得 490 L Pool 2 引物 池（引物 总浓 度为 100 M）。8.2.2 以去离 子水 分别 将 Pool 1 和 Pool 2 引 物池 作 10 倍稀 释，使其 引 物总 浓度 均为 10M，分装 后储存以防 止污 染和 降解。8.3 多重 PCR 扩增 8.3.1 采用 PCR 扩 增试 剂 盒，根 据试剂 盒说 明书 配置 多 重 PCR 扩增 体 系，反应 体系 中每一 条引 物的终浓度 为 0.015 M，Pool 1 和 Pool 2 各 配置 一套 扩 增体系，每 25L 反应体系 中加 入 2 L cDNA 模板。8.3.2 按以下 参数 进 行 PCR 扩增：98 30s；98 15s，65 5min，扩增 30 循 环；4 hold。8.4 PCR 产 物的 纯化 8.4.1 将每一 份样 本的 Pool 1 扩 增产物 和 Pool 2 扩增 产物 混合于 新的 8 联排 PCR 管或 96 孔 PCR 板中。8.4.2 采用 DNA 纯化 磁珠 法 对混 合后的 扩增 产物 进行 纯化，以 30L TE buffer(10 mM tris-HCl pH8.0,0.1 mM EDTA)洗脱 纯 化后 的产物。9 DNA 文 库构 建 9.1 纯化 产 物的 定量 与标 化 使用核 酸定 量试 剂盒 对纯 化产物 进行 双链DNA 定量，根据 所使 用建 库试 剂盒 说明对 其进 行标化。9.2 DNA 文 库制 备与混 合 根据所 使用 的建 库试 剂盒 说明 书 进行 文库 制备、定 量和文库 混合。10 上机测 序 根据 高 通量 测序 试剂 盒和 高通量 测序 仪操 作说 明完 成试剂 装载，设 置测 序参 数进行 测序。11 结果分析 可采用 不同 的生 物信 息学 软件进 行测序 结果 的 分析：首先 去除 测 序数 据中 的PCR 引物 序列（按照最大 引物长度30bp 进行Trim）和低质量的Reads，然后 以SARS-CoV-2 参 考 基 因 组（GeneBank 号：MN908947.3）为模板进行 序列mapping，mapping 之后对 测序覆盖度和测序深度 进行分析，最终生成 一致性（consensus）序列，即为 待 测样 本的 全基 因组 序列。DB32/T 3762.11 2020 4 A A 附 录 A（规范 性附 录）多重PCR 扩 增引 物序 列 序号 引 物名称 所 属引物池 引 物序列（5-3）长度 1 nCoV-2019_1_LEFT Pool 1 ACCAACCAACTTTCGATCTCTTGT 24 2 nCoV-2019_1_RIGHT Pool 1 AAGTGCCATCTTTAAGATGTTGACG 25 3 nCoV-2019_2_LEFT Pool 2 CTGTTTTACAGGTTCGCGACGT 22 4 nCoV-2019_2_RIGHT Pool 2 TAAGGATCAGTGCCAAGCTCGT 22 5 nCoV-2019_3_LEFT Pool 1 CGGTAATAAAGGAGCTGGTGGC 22 6 nCoV-2019_3_RIGHT Pool 1 AAGGTGTCTGCAATTCATAGCTCT 24 7 nCoV-2019_4_LEFT Pool 2 GGTGTATACTGCTGCCGTGAAC 22 8 nCoV-2019_4_RIGHT Pool 2 CACAAGTAGTGGCACCTTCTTTAGT 25 9 nCoV-2019_5_LEFT Pool 1 TGGTGAAACTTCATGGCAGACG 22 10 nCoV-2019_5_RIGHT Pool 1 ATTGATGTTGACTTTCTCTTTTTGGAGT 28 11 nCoV-2019_6_LEFT Pool 2 GGTGTTGTTGGAGAAGGTTCCG 22 12 nCoV-2019_6_RIGHT Pool 2 TAGCGGCCTTCTGTAAAACACG 22 13 nCoV-2019_7_LEFT Pool 1 ATCAGAGGCTGCTCGTGTTGTA 22 14 nCoV-2019_7_RIGHT Pool 1 TGCACAGGTGACAATTTGTCCA 22 15 nCoV-2019_8_LEFT Pool 2 AGAGTTTCTTAGAGACGGTTGGGA 24 16 nCoV-2019_8_RIGHT Pool 2 GCTTCAACAGCTTCACTAGTAGGT 24 17 nCoV-2019_9_LEFT Pool 1 TCCCACAGAAGTGTTAACAGAGGA 24 18 nCoV-2019_9_RIGHT Pool 1 TTTATGACAGCATCTGCCACAA 22 19 nCoV-2019_10_LEFT Pool 2 TGAGAAGTGCTCTGCCTATACAGT 24 20 nCoV-2019_10_RIGHT Pool 2 TCATCTAACCAATCTTCTTCTTGCTCT 27 21 nCoV-2019_11_LEFT Pool 1 GGAATTTGGTGCCACTTCTGCT 22 22 nCoV-2019_11_RIGHT Pool 1 TCATCAGATTCAACTTGCATGGCA 24 23 nCoV-2019_12_LEFT Pool 2 AAACATGGAGGAGGTGTTGCAG 22 24 nCoV-2019_12_RIGHT Pool 2 TTCACTCTTCATTTCCAAAAAGCTTGA 27 25 nCoV-2019_13_LEFT Pool 1 TCGCACAAATGTCTACTTAGCTGT 24 26 nCoV-2019_13_RIGHT Pool 1 ATAACCACAGCAGTTAAAACAC 22 27 nCoV-2019_14_LEFT Pool 2 CATCCAGATTCTGCCACTCTTGT 23 28 nCoV-2019_14_RIGHT Pool 2 AGTTTCCACACAGACAGGCATT 22 29 nCoV-2019_15_LEFT Pool 1 ACAGTGCTTAAAAAGTGTAAAAGTGCC 27 30 nCoV-2019_15_RIGHT Pool 1 AGAAACAGAAACTGTAGCTGGC 22 31 nCoV-2019_16_LEFT Pool 2 AATTTGGAAGAAGCTGCTCGGT 22 32 nCoV-2019_16_RIGHT Pool 2 CACAACTTGCGTGTGGAGGTTA 22 33 nCoV-2019_17_LEFT Pool 1 CTTCTTTCTTTGAGAGAAGTGAGGACT 27 34 nCoV-2019_17_RIGHT Pool 1 TTTGTTGGAGTGTTAACAATGCAGT 25 35 nCoV-2019_18_LEFT Pool 2 TGGAAATACCCACAAGTTAATGGTTTAAC 29 DB32/T 3762.11 2020 5 序号 引 物名称 所 属引物池 引 物序列（5-3）长度 36 nCoV-2019_18_RIGHT Pool 2 AGCTTGTTTACCACACGTACAAGG 24 37 nCoV-2019_19_LEFT Pool 1 GCTGTTATGTACATGGGCACACT 23 38 nCoV-2019_19_RIGHT Pool 1 TGTCCAACTTAGGGTCAATTTCTGT 25 39 nCoV-2019_20_LEFT Pool 2 ACAAAGAAAACAGTTACACAACAACCA 27 40 nCoV-2019_20_RIGHT Pool 2 ACGTGGCTTTATTAGTTGCATTGTT 25 41 nCoV-2019_21_LEFT Pool 1 TGGTGGCTATTGATTATAAACACTACACA 29 42 nCoV-2019_21_RIGHT Pool 1 TAGATCTGTGTGGCCAACCTCT 22 43 nCoV-2019_22_LEFT Pool 2 ACTACCGAAGTTGTAGGAGACATTATACT 29 44 nCoV-2019_22_RIGHT Pool 2 ACAGTATTCTTTGCTATAGTAGTCGGC 27 45 nCoV-2019_23_LEFT Pool 1 ACAACTACTAACATAGTTACACGGTGT 27 46 nCoV-2019_23_RIGHT Pool 1 ACCAGTACAGTAGGTTGCAATAGTG 25 47 nCoV-2019_24_LEFT Pool 2 AGGCATGCCTTCTTACTGTACTG 23 48 nCoV-2019_24_RIGHT Pool 2 ACATTCTAACCATAGCTGAAATCGGG 26 49 nCoV-2019_25_LEFT Pool 1 GCAATTGTTTTTCAGCTATTTTGCAGT 27 50 nCoV-2019_25_RIGHT Pool 1 ACTGTAGTGACAAGTCTCTCGCA 23 51 nCoV-2019_26_LEFT Pool 2 TTGTGATACATTCTGTGCTGGTAGT 25 52 nCoV-2019_26_RIGHT Pool 2 TCCGCACTATCACCAACATCAG 22 53 nCoV-2019_27_LEFT Pool 1 ACTACAGTCAGCTTATGTGTCAACC 25 54 nCoV-2019_27_RIGHT Pool 1 AATACAAGCACCAAGGTCACGG 22 55 nCoV-2019_28_LEFT Pool 2 ACATAGAAGTTACTGGCGATAGTTGT 26 56 nCoV-2019_28_RIGHT Pool 2 TGTTTAGACATGACATGAACAGGTGT 26 57 nCoV-2019_29_LEFT Pool 1 ACTTGTGTTCCTTTTTGTTGCTGC 24 58 nCoV-2019_29_RIGHT Pool 1 AGTGTACTCTATAAGTTTTGATGGTGTGT 29 59 nCoV-2019_30_LEFT Pool 2 GCACAACTAATGGTGACTTTTTGCA 25 60 nCoV-2019_30_RIGHT Pool 2 ACCACTAGTAGATACACAAACACCAG 26 61 nCoV-2019_31_LEFT Pool 1 TTCTGAGTACTGTAGGCACGGC 22 62 nCoV-2019_31_RIGHT Pool 1 ACAGAATAAACACCAGGTAAGAATGAGT 28 63 nCoV-2019_32_LEFT Pool 2 TGGTGAATACAGTCATGTAGTTGCC 25 64 nCoV-2019_32_RIGHT Pool 2 GGTAATAGCACATCACTACGCAAC 24 65 nCoV-2019_33_LEFT Pool 1 ACTTTTGAAGAAGCTGCGCTGT 22 66 nCoV-2019_33_RIGHT Pool 1 TGGACAGTAAACTACGTCATCAAGC 25 67 nCoV-2019_34_LEFT Pool 2 TCCCATCTGGTAAAGTTGAGGGT 23 68 nCoV-2019_34_RIGHT Pool 2 AGTGAAATTGGGCCTCATAGCA 22 69 nCoV-2019_35_LEFT Pool 1 TGTTCGCATTCAACCAGGACAG 22 70 nCoV-2019_35_RIGHT Pool 1 ACTTCATAGCCACAAGGTTAAAGTCA 26 71 nCoV-2019_36_LEFT Pool 2 ATTACAGTTAATGTTTTAGCTTGGTTGTA 22 72 nCoV-2019_36_RIGHT Pool 2 GAACAAAGACCATTGAGTACTCTGGA 26 73 nCoV-2019_37_LEFT Pool 1 ACACACCACTGGTTGTTACTCAC 23 74 nCoV-2019_37_RIGHT Pool 1 GTCCACACTCTCCTAGCACCAT 22 75 nCoV-2019_38_LEFT Pool 2 ACTGTGTTATGTATGCATCAGCTGT 25 76 nCoV-2019_38_RIGHT Pool 2 ATCATAAACACCAAGAGTCAGTCTAAA 25 DB32/T 3762.11 2020 6 序号 引 物名称 所 属引物池 引 物序列（5-3）长度 77 nCoV-2019_39_LEFT Pool 1 AGTATTGCCCTATTTTCTTCATAACTGGT 29 78 nCoV-2019_39_RIGHT Pool 1 TGTAACTGGACACATTGAGCCC 22 79 nCoV-2019_40_LEFT Pool 2 TGCACATCAGTAGTCTTACTCTCAGT 26 80 nCoV-2019_40_RIGHT Pool 2 CATGGCTGCATCACGGTCAAAT 22 81 nCoV-2019_41_LEFT Pool 1 GTTCCCTTCCATCATATGCAGCT 23 82 nCoV-2019_41_RIGHT Pool 1 TGGTATGACAACCATTAGTTTGGCT 25 83 nCoV-2019_42_LEFT Pool 2 TGCAAGAGATGGTTGTGTTCCC 22 84 nCoV-2019_42_RIGHT Pool 2 CCTACCTCCCTTTGTTGTGTTGT 23 85 nCoV-2019_43_LEFT Pool 1 TACGACAGATGTCTTGTGCTGC 22 86 nCoV-2019_43_RIGHT Pool 1 AGCAGCATCTACAGCAAAAGCA 22 87 nCoV-2019_44_LEFT Pool 2 TGCCACAGTACGTCTACAAGCT 22 88 nCoV-2019_44_RIGHT Pool 2 AACCTTTCCACATACCGCAGAC 22 89 nCoV-2019_45_LEFT Pool 1 TACCTACAACTTGTGCTAATGACCC 25 90 nCoV-2019_45_RIGHT Pool 1 AAATTGTTTCTTCATGTTGGTAGTTAGAGA 30 91 nCoV-2019_46_LEFT Pool 2 TGTCGCTTCCAAGAAAAGGACG 22 92 nCoV-2019_46_RIGHT Pool 2 CACGTTCACCTAAGTTGGCGTA 22 93 nCoV-2019_47_LEFT Pool 1 AGGACTGGTATGATTTTGTAGAAAACCC 28 94 nCoV-2019_47_RIGHT Pool 1 AATAACGGTCAAAGAGTTTTAACCTCTC 28 95 nCoV-2019_48_LEFT Pool 2 TGTTGACACTGACTTAACAAAGCCT 25 96 nCoV-2019_48_RIGHT Pool 2 TAGATTACCAGAAGCAGCGTGC 22 97 nCoV-2019_49_LEFT Pool 1 AGGAATTACTTGTGTATGCTGCTGA 25 98 nCoV-2019_49_RIGHT Pool 1 TGACGATGACTTGGTTAGCATTAATACA 28 99 nCoV-2019_50_LEFT Pool 2 GTTGATAAGTACTTTGATTGTTACGATGGT 30 100 nCoV-2019_50_RIGHT Pool 2 TAACATGTTGTGCCAACCACCA 22 101 nCoV-2019_51_LEFT Pool 1 TCAATAGCCGCCACTAGAGGAG 22 102 nCoV-2019_51_RIGHT Pool 1 AGTGCATTAACATTGGCCGTGA 22 103 nCoV-2019_52_LEFT Pool 2 CATCAGGAGATGCCACAACTGC 22 104 nCoV-2019_52_RIGHT Pool 2 GTTGAGAGCAAAATTCATGAGGTCC 25 105 nCoV-2019_53_LEFT Pool 1 AGCAAAATGTTGGACTGAGACTGA 24 106 nCoV-2019_53_RIGHT Pool 1 AGCCTCATAAAACTCAGGTTCCC 23 107 nCoV-2019_54_LEFT Pool 2 TGAGTTAACAGGACACATGTTAGACA 26 108 nCoV-2019_54_RIGHT Pool 2 AACCAAAAACTTGTCCATTAGCACA 25 109 nCoV-2019_55_LEFT Pool 1 ACTCAACTTTACTTAGGAGGTATGAGCT 28 110 nCoV-2019_55_RIGHT Pool 1 GGTGTACTCTCCTATTTGTACTTTACTGT 29 111 nCoV-2019_56_LEFT Pool 2 ACCTAGACCACCACTTAACCGA 22 112 nCoV-2019_56_RIGHT Pool 2 ACACTATGCGAGCAGAAGGGTA 22 113 nCoV-2019_57_LEFT Pool 1 ATTCTACACTCCAGGGACCACC 22 114 nCoV-2019_57_RIGHT Pool 1 GTAATTGAGCAGGGTCGCCAAT 22 115 nCoV-2019_58_LEFT Pool 2 TGATTTGAGTGTTGTCAATGCCAGA 25 116 nCoV-2019_58_RIGHT Pool 2 CTTTTCTCCAAGCAGGGTTACGT 23 117 nCoV-2019_59_LEFT Pool 1 TCACGCATGATGTTTCATCTGCA 23 DB32/T 3762.11 2020 7 序号 引 物名称 所 属引物池 引 物序列（5-3）长度 118 nCoV-2019_59_RIGHT Pool 1 AAGAGTCCTGTTACATTTTCAGCTTG 26 119 nCoV-2019_60_LEFT Pool 2 TGATAGAGACCTTTATGACAAGTTGCA 27 120 nCoV-2019_60_RIGHT Pool 2 GGTACCAACAGCTTCTCTAGTAGC 24 121 nCoV-2019_61_LEFT Pool 1 TGTTTATCACCCGCGAAGAAGC 22 122 nCoV-2019_61_RIGHT Pool 1 ATCACATAGACAACAGGTGCGC 22 123 nCoV-2019_62_LEFT Pool 2 GGCACATGGCTTTGAGTTGACA 22 124 nCoV-2019_62_RIGHT Pool 2 GTTGAACCTTTCTACAAGCCGC 22 125 nCoV-2019_63_LEFT Pool 1 TGTTAAGCGTGTTGACTGGACT 22 126 nCoV-2019_63_RIGHT Pool 1 ACAAACTGCCACCATCACAACC 22 127 nCoV-2019_64_LEFT Pool 2 TCGATAGATATCCTGCTAATTCCATTGT 28 128 nCoV-2019_64_RIGHT Pool 2 AGTCTTGTAAAAGTGTTCCAGAGGT 25 129 nCoV-2019_65_LEFT Pool 1 GCTGGCTTTAGCTTGTGGGTTT 22 130 nCoV-2019_65_RIGHT Pool 1 TGTCAGTCATAGAACAAACACCAATAGT 28 131 nCoV-2019_66_LEFT Pool 2 GGGTGTGGACATTGCTGCT 22 132 nCoV-2019_66_RIGHT Pool 2 TCAATTTCCATTTGACTCCTGGGT 24 133 nCoV-2019_67_LEFT Pool 1 GTTGTCCAACAATTACCTGAAACTTACT 28 134 nCoV-2019_67_RIGHT Pool 1 CAACCTTAGAAACTACAGATAAATCTTGGG 30 135 nCoV-2019_68_LEFT Pool 2 ACAGGTTCATCTAAGTGTGTGTGT 24 136 nCoV-2019_68_RIGHT Pool 2 CTCCTTTATCAGAACCAGCACCA 23 137 nCoV-2019_69_LEFT Pool 1 TGTCGCAAAATATACTCAACTGTGTCA 27 138 nCoV-2019_69_RIGHT Pool 1 TCTTTATAGCCACGGAACCTCCA 23 139 nCoV-2019_70_LEFT Pool 2 ACAAAAGAAAATGACTCTAAAGAGGGTTT 29 140 nCoV-2019_70_RIGHT Pool 2 TGACCTTCTTTTAAAGACATAACAGCAG 28 141 nCoV-2019_71_LEFT Pool 1 ACAAATCCAATTCAGTTGTCTTCCTATTC 29 142 nCoV-2019_71_RIGHT Pool 1 TGGAAAAGAAAGGTAAGAACAAGTCCT 27 143 nCoV-2019_72_LEFT Pool 2 ACACGTGGTGTTTATTACCCTGAC 24 144 nCoV-2019_72_RIGHT Pool 2 ACTCTGAACTCACTTTCCATCCAAC 25 145 nCoV-2019_73_LEFT Pool 1 CAATTTTGTAATGATCCATTTTTGGGTGT 29 146 nCoV-2019_73_RIGHT Pool 1 CACCAGCTGTCCAACCTGAAGA 22 147 nCoV-2019_74_LEFT Pool 2 ACATCACTAGGTTTCAAACTTTACTTGC 28 148 nCoV-2019_74_RIGHT Pool 2 GCAACACAGTTGCTGATTCTCTTC 24 149 nCoV-2019_75_LEFT Pool 1 AGAGTCCAACCAACAGAATCTATTGT 26 150 nCoV-2019_75_RIGHT Pool 1 ACCACCAACCTTAGAATCAAGATTGT 26 151 nCoV-2019_76_LEFT Pool 2 AGGGCAAACTGGAAAGATTGCT 22 152 nCoV-2019_76_RIGHT Pool 2 TCTCTGCCAAATTGTTGGAAAGGCA 22 153 nCoV-2019_77_LEFT Pool 1 CCAGCAACTGTTTGTGGACCTA 22 154 nCoV-2019_77_RIGHT Pool 1 CAGCCCCTATTAAACAGCCTGC 22 155 nCoV-2019_78_LEFT Pool 2 CAACTTACTCCTACTTGGCGTGT 23 156 nCoV-2019_78_RIGHT Pool 2 TGTGTACAAAAACTGCCATATTGCA 25 157 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CGACTACTAGCGTGCCTTTGTA 22 174 nCoV-2019_87_RIGHT Pool 1 ACTAGGTTCCATTGTTCAAGGAGC 24 175 nCoV-2019_88_LEFT Pool 2 CCATGGCAGATTCCAACGGTAC 22 176 nCoV-2019_88_RIGHT Pool 2 TGGTCAGAATAGTGCCATGGAGT 23 177 nCoV-2019_89_LEFT Pool 1 CGCGTACGCGTTCCATGTGGTC 22 178 nCoV-2019_89_RIGHT Pool 1 ATAGTAACCTGAAAGTCAACGAGAT 25 179 nCoV-2019_90_LEFT Pool 2 ACACAGACCATTCCAGTAGCAGT 23 180 nCoV-2019_90_RIGHT Pool 2 TGAAATGGTGAATTGCCCTCGT 22 181 nCoV-2019_91_LEFT Pool 1 TCACTACCAAGAGTGTGTTAGAGGT 25 182 nCoV-2019_91_RIGHT Pool 1 TTCAAGTGAGAACCAAAAGATAATAAGCA 29 183 nCoV-2019_92_LEFT Pool 2 TTTGTGCTTTTTAGCCTTTCTGCT 24 184 nCoV-2019_92_RIGHT Pool 2 AGGTTCCTGGCAATTAATTGTAAAAGG 27 185 nCoV-2019_93_LEFT Pool 1 TGAGGCTGGTTCTAAATCACCCA 23 186 nCoV-2019_93_RIGHT Pool 1 AGGTCTTCCTTGCCATGTTGAG 22 187 nCoV-2019_94_LEFT Pool 2 GGCCCCAAGGTTTACCCAATAA 22 188 nCoV-2019_94_RIGHT Pool 2 TTTGGCAATGTTGTTCCTTGAGG 23 189 nCoV-2019_95_LEFT Pool 1 TGAGGGAGCCTTGAATACACCA 22 190 nCoV-2019_95_RIGHT Pool 1 CAGTACGTTTTTGCCGAGGCTT 22 191 nCoV-2019_96_LEFT Pool 2 GCCAACAACAACAAGGCCAAAC 22 192 nCoV-2019_96_R
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