桃胚培养及移栽技术规程DB41／T 2655-2024.pdf

ICS 65.020.20 CCS B 61 41 河南省地方标准 DB41/T 2655 2024 桃胚培养 及移栽技 术规程 2024-03-12 发布 2024-06-11 实施 河南省市 场监督 管 理局 发 布 DB41/T 2655 2024 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 胚 培养.1 5 炼苗.2 6 大 田移 栽.3 附录A（资 料性）胚培 养所 需 WPM 培养 基的 主要 成分表.4 附录B（资 料性）单位 培养基 加入 母液 量.5 DB41/T 2655 2024 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分：标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由河 南省 林业 局提 出并归 口。本文件 起草 单位：河 南农 业大学。本文件 主要 起草 人：连晓 东、冯 建灿、张 海朋、王 小贝、谭彬、程 钧、王伟、叶霞、张 郎郎、李 志谦、李 继东。DB41/T 2655 2024 1 桃胚培养 及移栽 技术规程 1 范围 本文件 规定 了桃 胚培 养及 移栽的 术语 和定 义、桃胚 培养、炼苗 和大 田移 栽 等 技术。本文件 适用 于桃 胚培 养及 移栽技 术管 理的 全过 程。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 8321（所 有部 分）农药合 理使 用准 则 DB41/T 1815-2019 桃简 约栽培 技术 规程 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 胚培养 对由于 营养 或生 理原 因造 成败育、发 育不 完善 或需 要后熟、从 而导 致播 种后 难以获 得成 苗或 在发 育早期就 败育 或退 化的 种胚 进行的 早期 离体 培养。3.2 胚 培苗 通过胚 培养 技术 获得 的 幼 苗。4 胚培养 4.1 培养容 器与 接种 器械 的灭 菌 种胚接 种容 器推 荐使 用直 径为3 cm，高度 为18 cm 的 平底玻 璃试 管，接种 器械 为手术 刀和 长柄 镊子。用洗洁 精溶 液洗 刷试 管和 接种器 械，再 用清 水冲 洗3 5遍，放入 烘箱 烘干 后，用纱布 或纸 等包 好接种器械；将 滤纸（11 cm 规格）放入合 适培养 皿中，然后 用纸包 裹；将 所有 用品用 具 在高 压 蒸汽 灭菌 锅中，121 温度 下灭菌20 min。4.2 培养基 的配 制与 灭菌 4.2.1 培养基 选择 以WPM 培养 基为 桃种 胚接 种 培养基，培 养基 成分 表见 附录A。DB41/T 2655 2024 2 4.2.2 母液配 制 所需化 学试 剂使 用去 离子 水配制。根 据附 录A 中培 养 基配方 成分，配 制大 量元 素母液A（20 倍）、大量元素 钙盐 母液B（20 倍）、微量 元素 母液C（100 倍）、铁盐 母液D（100 倍）、有 机成分 母液E（100 倍）。培养基 母液 试剂 瓶分 别贴 上标签，标 注母 液名 称、配 制倍数 和日 期，置于 冰箱 冷藏保 存。铁盐（母液D）保存在 棕色 试剂 瓶中。4.2.3 培养基 配制 依据培 养基配 方和 需要培 养基体积，计 算各 种母液 需用量 和其它 成分 用量，见附录B。按 照计算 结果，称 取琼脂 和蔗 糖用量，加入 蒸馏水 中，蒸馏水 的量以 培养基 配制 体积的1/3 1/2 为宜，不 断搅拌，熬至沸 腾；然后 加入 相应 母液，加蒸 馏水 定容，充 分搅拌 均匀；用1.0 mol L-1盐酸 或1.0 mol L-1氢氧 化钠，调节pH 值至5.8；将 培 养基分 装到 平底 试管 中，深度占 试管 高度 的1/3 左 右，用透气 封 口膜（过 滤孔径0.3 um）封 口；将培养 基放入 高压 灭菌 锅中，121，灭菌20 min。灭菌 后 培养基 在干 净、阴凉 的室内常温 存放，保 存时 间不 宜超过2周。4.3 种胚获 取与 消毒 从硬熟 期的 桃果 实中 取出 桃核，将桃 核上 果肉 去除 干净，清水 洗净 备用。将桃核 放入 有效 氯浓 度5%次氯酸 钠溶 液消 毒20 min；破核，用 无菌镊 子小 心夹 出种胚，放入灭 菌 的三角瓶 中；在超 净工 作台 上，用75%酒精 浸泡 种胚30 s，无 菌水 冲洗2 3 遍，然 后用0.1%的 升汞 消毒5 min或 有效 氯浓 度为5%次 氯酸 钠溶液 消毒10 min，用无 菌水冲 洗3 5次。4.4 种胚接 种 将灭菌 过的 种胚 放在 无菌 滤纸上，用手 术刀 和镊 子 将种皮 去除，然后 接种 到WPM 培养 基上，约1/3 1/4核仁 长度（胚 根朝 下）深入培 养基，每瓶 接种1个。用封口 膜封 口。在 培养 瓶 上标示 代号 和接 种日 期。4.5 低温处 理及 培养 接种完 毕，置于 黑暗 环境 下，根 据种 子不 同需 冷量，4 处理60 d 90 d，以完成种 胚休 眠。之 后转移至 培养 室中，培 养温 度为23 27，光照 强 度2000 lx 3000 lx，光 周 期为16 h 光 照，8 h 黑 暗。种胚萌 发后15 d 20 d，根部长 到约3 cm 5 cm，56 片 叶时，可 进行 移栽。5 炼苗 5.1 胚培苗 移栽 5.1.1 移栽前 准备 去掉胚 培苗 培养 瓶 顶 部封 口膜，在培 养室 内锻 炼3 d 4 d。配制基 质。按 草炭 土 珍 珠岩 蛭石（体积 比）为1 1 1 比例配 制，配制好 的混合 基质装 入营 养钵中（推荐 使用 直径10 cm，高度9 cm 尺寸 营养 钵），并压 紧实，移 栽前 用0.5 gL-1的多 菌灵（50%可湿性粉 剂）溶液 浸透。5.1.2 移栽 DB41/T 2655 2024 3 取出胚 培苗，用流 水洗 净 根部 培 养基，移栽 至营 养 钵中，喷施0.1 g L-1多 菌 灵液（50%可 湿性 粉剂）防病。放 置在温室或大棚，保证空 气湿度在90%以上，温度 在25 左右。7 d 10 d 后 逐渐通风，直 至完全去 除棚膜。移栽后，胚 培苗 在温 室或 大棚中 易发 生立 枯病，可 每 隔5 d 7 d 喷1 次0.1 g L-1多 菌灵 液（50%可湿性粉 剂）；每20 d 30 d，喷施1次 碧护20000 倍液（0.136%总 有效 成份），以强壮 幼苗。农 药的 使 用符合GB/T 8321（所 有部 分）的规 定。移栽后 根据 幼苗 生长 情况，可适 当补 充营 养液。6 大田移 栽 当外界 环境 最低温度达到5 以上，胚培苗 地上部达到15 cm 以上 时，可将 胚培苗从移 栽容器中倒出，带 基质 定植 于田 间。移栽 后 田间 管理 按照DB 41/T 1815 确 定的 桃简 约化 栽 培技术。DB41/T 2655 2024 4 附录A（资料 性）胚培养 所 需WPM 培养 基的 主要成 分表 表A.1 给出 了胚 培养 所需WPM 培养 基的 主要 成分 表。表A.1 胚培 养所 需WPM 培 养基 的主要 成分 表 名称 化学试剂 剂量 mg L-1 母液加入药品量 g L-1 大量元素（母液 A，20 倍）K2SO4 990.00 19.800 HN4NO3 400.00 8.000 MgSO4 7 H2O 370.00 7.400 KH2PO4 170.00 3.400 钙盐（母液 B，20 倍）Ca(NO3)2 4H2O 556.00 11.120 微量元素（母液 C，100 倍）MnSO4 4H2O 22.50 2.250 ZnSO4 7 H2O 8.60 0.860 H3BO3 6.20 0.620 Na2MoO4 2 H2O 0.25 0.025 CuSO4 5 H2O 0.25 0.025 铁盐（母液 D，100 倍）FeSO4 7H2O 27.80 2.780 Na2EDTA 37.30 3.730 有机成分（母液 E，100 倍）甘氨酸 2.00 0.200 VB1 1.00 0.100 VB6 0.50 0.050 VB5 0.50 0.050 肌醇 100.00 10.000 DB41/T 2655 2024 5 附录B（资料 性）单位培 养基 加入 母液 量 表B.1 给出 了单 位培 养基 加 入母液 量。表B.1 单位 培养 基加 入母 液量 单位为mLL-1 名称 单位培养基需加入母液 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 母液 A（20 倍）25 50 100 150 200 母液 B（20 倍）25 50 100 150 200 母液 C（100 倍）5 10 20 30 40 母液 D（100 倍）5 10 20 30 40 母液 E（100 倍）5 10 20 30 40 注：琼脂加入量：5 g L-1；蔗 糖加入量：20 g L-1。