资源描述
异种移植用无指定病原体(DesignatedPathogen Free,DPF)医用供体猪第 2部分:微生物、寄生虫学等级与监测DB43/T95 2023 9.243湖南省地方标准发 布 湖南省市场监督管理局 2023-11 发 布-09 2024-02 实 施-09代替 DB43/T 95.2 2014 9Medical grade DPF donor pig for xenotransplantationPart 2:mircrobiological parasitological standards and surveillanceICSCCS 70.080 B 44DB43/T 959.22023 I 目 次 1 1 2 1 3 1 4 3 5 3 6 3 7 3 8 5 9 6 10 6 11 6 A PCR 7 B PCR 8 C DNA PCR 9 D ELISA 10 E 11 F 12 G ELISA 13 H PCR 14 I FQ-PCR 15 J 17 K SADS CoV RT PCR 19 L PRCV PCR 20 M 21 N C PERV-C PCR 24 O 3 TaqMan PCR 25 P 26 DB43/T 959.2 2023 II DB43/T 959.22023 III 前 言 GB/T 1.1 2020 1 DB43/T 959 Designated Pathogen Free,DPF 2 DB43/T 959 1 2 3 4 5 DB43/T 959.2 2014 Designated Pathogen Free,DPF 2 DB43/T 959.2 2014 a Designated Pathogen Free,DPF 2 Designated Pathogen Free,DPF 2 b c 1 7 2014 7 d 8.1 2014 8.1 e 2 8.2.2 2014 8.2.2 2014 DB43/T 959.2 2014 DB43/T 959.2 2023 IV DB43/T 959.22023 V 引 言 Designated Pathogen Free,DPF DB43/T 959 Designated Pathogen Free,DPF DB43/T 959 1 2 3 4 5 2014 DB43/T 959.2 2018 DB43/T 959.2 DB43/T 959.2 DB43/T 959.2 DB43/T 959.22023 1 异种移植 用无指 定病原体(Designated Pathogen Free,DPF)医用供体猪 第2 部分:微生 物、寄生 虫学 等 级与监测 1 范围 Designed Pathogen Free,DPF DPF 2 规 范性 引用 文件 GB/T 14926.1 GB/T 14926.4 GB/T 14926.8 GB/T 14926.27 GB/T 14926.30 GB/T 14926.46 GB/T 14926.47 GB/T 14926.48 GB/T 14926.56 GB/T 16551 GB 17013 GB/T 18090 GB/T 18448.1 GB/T 18448.2 GB/T 18448.6 GB/T 18648 GB/T 18638 GB/T 18641 GB/T 18646 GB/T 18647 GB/T 18935 GB/T 19200 GB/T 19915.1 2 DB43/T 959.2 2023 2 GB/T 19915.2 2 GB/T 19915.3 2 PCR GB/T 19915.7 2 PCR GB/T 21674 GB/T 22333 GB/T 22915 RT-PCR GB/T 22917 RT-PCR GB/T 27517 RT-PCR GB/T 27536 GB/T 21674 GB/T 34757 RT-PCR GB/T 35912 RT-PCR GB/T 36871 RT-PCR NY/T 537 NY/T 541 NY/T 545 NY/T 546 NY/T 548 NY/T 550 NY/T 564 NY/T 679 SN/T 0420 SN/T 1379.1 SN/T 1396 SN/T 1446.1 SN/T 1699 SN/T 1919 SN/T 2708 SN/T 3499 SN/T 4235 SN/T 5124 Delta 3 术 语和 定义 异种移 植 用DPF 医用 供体 猪 medical grade DPF donor pig for xenotransplantation 12 50kg World Health Organization WHO DB43/T 959.22023 3 4 微 生物 学等 级 DPF 5 检 测要 求 5.1 临床 观察 5.2 微生 物检 测项 目 DPF 1 6 检 测程 序 1 图1 异种 移植 用DPF 医 用供体 猪检 测程 序 7 检 测方 法 1 DB43/T 959.2 2023 4 表1 异种 移植 用 DPF 医 用供体 猪病 原微 生物 检测 项目及 检测 方法 Bacterium 1 Brucella spp GB/T 18646 2 Leptospira spp GB/T 14926.46 3 Serpulinahyodysenteriae NY/T 545 4 Mycobacterium bovis A 5 Mycobacterium tuberculosis GB/T 14926.48 6 Mycobacterium avium-intracelluare complex B 7 Mycoplasma hyopneumoniae GB/T 14926.8 8 Salmonella typhi GB/T 14926.1 NY/T 550 9 Shigella GB/T 14926.47 10 Bordetella bronchiseptica NY/T 546 11 Pasteurella multocida NY/T 546 NY/T 564 12 Actinobacillus pleuropneumoniae NY/T 537 13 2 Streptococcus suis type 2 GB/T 19915.1-3 GB/T 19915.7 Fungi 14 Pathogenic dermal fungi GB/T 14926.4 15 Cryptococcus neoformans C 16 Histoplasma capsulatum D Parasites 17 Ectozoa GB/T 18448.1 18 Ascaris suum GB/T 18448.6 19 Echinococcus sp.GB 17013 20 Isospora sp GB/T 18647 21 Strongyloides ransomi E 22 Toxoplasma gondii GB/T 18448.2 SN/T 1396 23 Trichinella spiralis SN/T 0420 24 Neospora SN/T 3499 25 Fasciolopsis buski F Viruses 26 Adenovirus(porcine)GB/T 14926.27 27 Encephalomyocarditis virus G 28 porcine Influenza virus GB/T 27536 29 Human Influenza viruses H 30 Porcine cytomegalovirus I 31 Porcine gama-herpesvirus J 32 Porcine reproductive andrespiratory syndrome virus GB/T 27517 DB43/T 959.22023 5 表1 异种 移植 用 DPF 医 用供体 猪病 原微 生物 检测 项目及 检测 方法()Viruses 33 Porcine reproductive andrespiratory syndrome virus GB/T 35912 34 Procine parvovirus SN/T 1919 35 Rotavirus GB/T 14926.30 36 Pseudorables virus GB/T 18641 37 Rabies virus GB/T 14926.56 38 Foot and mouth disease virus GB/T 18935 GB/T 22915 39 Classical swine fever virus GB/T 16551 SN/T 1379.1 40 Japaneses encephalitis virus GB/T 18638 GB/T 22333 41 1 Porcine circovirus type 1 GB/T 21674 SN/T 2708 42 2 Porcine circovirus type 2 GB/T 21674 SN/T 2708 43 Porcine transmissible gastroenteritis virus GB/T 36871 NY/T 548 SN/T 1446.1 44 Porcine epidemic diarrhea virus GB/T 36871 GB/T 34757 SN/T 1699 45 Porcine deltacoronavirus SN/T 5124 46 Swine acute diarrhea syndrome coronavirus K 47 Porcine Respiratory Coronavirus L 48 Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus M 49 Swine vesicular disease virus GB/T 19200 GB/T 22917 50 C Porcine endogenous retrovirus C(PERV-C)N 51 Porcine lymphotropic herpesvirus(PLHV)O 52 Hepatitis E virus(HEV)SN/T 4235-2015 53 Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 SARS-CoV-2 P 54 Diagnostic techniques for African swine fever GB/T 18648 8 检 测规 则 8.1 检测 频率 3 8.2 抽样 8.2.1 方式 3 DPF DB43/T 959.2 2023 6 8.2.2 数量 DPF 2 表 2 抽样 数量 50 3 50-100 5 100-500 10 500 25 注:100 8.2.3 方法 8.2.3.1 8.2.3.2 NY/T 541 8.3 样本 标识 要求 9 结 果判 定 9.1 合格 判定 PCR 90 10 判 定结 论 DPF DPF 11 样 本保 存 11.1 1 11.2 DB43/T 959.22023 7 附 录 A(规范 性)牛分枝 杆 菌PCR 检测 方法 A.1 原理 16SrRNA IS6110 PCR A.2 样品 采集 A.2.1 样 品类 型 A.2.2 0.5-1g 1.5mL EP 400 L K l mg/mL 55 8h EP 8000rpm 5min 1.5mL EP 25 24 l l2000rpm 10 min 1.5mL EP 1-20 30min 12000rpm 10min 70 37 30 LTE RNA 37 40min-20 A.3 操作 步骤 A.3.1 引 物的 设计 Mycobacterium bovis AF2122/97 gi:31742509 16SrRNA IS6110-CACATGCAAGTCGAACGGAAAGG-16SrRNA P2:5-GCCCGTATCGCCCGCACGCT-3 584bp-GGCTTGCCGGGTTTGA-TTTGTCACCGACGCCTACGCT-3 309bp A.3.2 PCR 反应 oligo6.0 Tm PCR 2 L 1.75pg-1.75 g10 PCR buffer 2.5 L dNTPs 2 L IS6110 0.5 L 5pM 16SrRNA 1.5 L 15pM 14 L Taq 0.5 L 2.5U 25 L PCR 95 10min 95 30s 59.5 30s 72 45s 30 7min 4 A.3.3 PCR 扩 增产 物的 鉴 定 0.8 120V 12-15min A.4 PCR 309bp IS6110 584bp 16SrRNA PCR DB43/T 959.2 2023 8 附 录 B(规范 性)细胞内 鸟型 分枝 杆 菌 PCR 检测方 法 B.1 IS1245 B.2 样品 采集 B.2.1 样 品类 型 B.2.2 样 品采 集 1g 1.5mL EP B.3 操作 步骤 B.3.1 组 织处 理 2mL 2 B.3.2 PCR 扩 增和 检测 IS1245 1 5-GCCGCCGAA ACGATCTAC-3 2 5-AGGTGGCGTCGAGGAAGAC-3 50 L PCR 10 PCR 5 L 25mmol/L MgCl2 5 L dNTPs 200 mol/L 1 mol/L DNA10 L TaqDNA 1U 94 5min 94 30s 65 30s 72 45s 1.5 B.4 结果 判定。427bp 427bp DB43/T 959.22023 9 附 录 C(规范 性)新型隐 球 菌DNA 实时 荧光 定量 PCR 检测 C.1 ITS PCR C.2 样品 采集 C.2.1 样 品类 型 C.2.2 样 品采 集 PBS C.3 操作 步骤 C.3.1 引 物的 设计-TTACCTGTTGGACTTGGATTTGG-CATAGGCCCAGCGAAACTTATT-C.3.2 DNA 的 提取 SDS K 50 1h 15 20ul 5ul 50uL C.3.3 目 的基 因的 扩增 50 L PCR 10 PCR Buffer 15mmol/L MgCl2 5 L dNTP mixture 10 mol/L 1 L Taq DNA 5U/L 0.4 L DNA 2 L 3 L dd H2O 50 L 94 5min 94 30s 58 1min 40 C.4 结果 判定 5 LPCR 1.5 10 GoldView 5V/cm 60-75min 124bp DB43/T 959.2 2023 10 附 录 D(规范 性)抗荚膜 组织 胞浆 菌抗 体 ELISA 检 测方 法 D.1 purified protein from Histoplasma capsulatum P-HTPM D.2 样品 采集 D.2.1 样 品类 型 D.2.2 样 品采 集 3mL-5mL D.3 操作 步骤 D.3.1 1 g/50 L/37 2h D.3.2 0.05 Tween-20 0.01mol/L pH7.4 PBS PBST 300 L/3 3min D.3.3 D.3.4 5 PBST 100 L/37 30min D.3.5 1:1000 100/37 30min D.3.6 3 D.3.7 D.3.8 1:10000 100 L/37 45min D.3.9 3 D.3.10 D.3.11 TMB 100 L/10-15min D.3.12 50 L 2mol/L H2SO4 D.3.13 P/N P/N=OD/OD D.4 结果 判定 A 0.135 A 0.059-0.135 A 0.059 DB43/T 959.22023 11 附 录 E(规范 性)猪兰氏 类圆 线虫 病镜 检法 诊断 E.1 消化 道蠕 虫粪 学检 查 E.2 样品 采集 E.2.1 样 品类 型 E.2.2 样 品采 集 E.3 操作 步骤 E.3.1 饱 和食 盐水 漂浮 法 检查 10g 40 30min 40 E.3.2 尼 龙筛 淘洗 法检 查 25 g 260 10 40 E.4 结果 判定 E.4.1 饱 和食 盐水 漂浮 法 42-53 m 24-32 m E.4.2 经 尼龙 筛淘 洗法 3.1-4.6 mm 0.055-0.080 mm DB43/T 959.2 2023 12 附 录 F(规范 性)布氏姜 片吸 虫镜 检法 诊断 F.1 消化 道蠕 虫粪 学检 查 F.2 样品 采集 F.2.1 样 品类 型 F.2.2 样 品采 集 F.3 操作 步骤 F.3.1 直 接涂 片法 2-3 50 F.3.2 沉 淀法 5-10 g 20 mL F.4 结果 判定 130-145 m 85-97 m DB43/T 959.22023 13 附 录 G(规范 性)猪脑心 肌炎 病毒 间 接 ELISA 检测 G.1 2C 2C ELISA G.2 样品 采集 G.2.1 样 品类 型 G.2.2 样 品采 集 3mL-5mL G.3 操作 步骤 G.3.1 2C 0.05mol/L pH9.6 100 L/37 1h 4 G.3.2 0.05 Tween-20 0.01mol/L pH7.4 PBS PBST 300 L/3 3min G.3.3 G.3.4 5 PBST 100 L/37 1h G.3.5 100 L/37 45min G.3.6 3 G.3.7 G.3.8 100 L/37 45min G.3.9 3 G.3.10 G.3.11 TMB 100 L/10-15min G.3.12 50 L 2mol/L H2SO4 G.3.13 OD450 nm P/N P/N=OD/OD G.4 结果 判定 OD 0.27 OD 0.27 DB43/T 959.2 2023 14 附 录 H(规范 性)人流感 病毒 多 重 PCR 检测 H.1 HA M RT-PCR H.2 样品 采集 H.2.1 样 品类 型 H.2.2 12 h 24 h H.3 操作 步骤 H.3.1 PCR HA H1F-agcaaaagcaggggaaaata-H1R-aacaagggtgtttttcctca-H3F-agcaaaagcaggggataattc-H3R-ctcaaatgcaaatgttgcacc-BF-gggacatgaacaacaaagatgc-BR-tgtcagctattatggagctg-H1 H3 431bp 210bp 390bp H.3.2 病毒 RNA 提取 RNA RT-PCR-20 H.3.3 病 毒逆 转录 RNA H.3.4 PCR 25 L 10 Buffer 2.5 L MgCl2 25mM 2 L dNTP 2 L Taq 5U/L 0.4 L H 10mM 1.25 L cDNA 4 L 25 L 94 3min 94 30s 51 1min 68 1min 35 68 10min H.3.5 PCR 产 物的 鉴定 PCR 5 L 1 H.4 结果 判定 431bp 210bp 390bp DB43/T 959.22023 15 附 录 I(规范 性)猪巨细 胞病 毒 FQ-PCR 检测 I.1 原理 TaqMan PCR Taq 3 5 I.2 样品 采集 I.2.1 样 品类 型 I.2.2 样 品采 集 1 g 1.5 mL EP I.3 操作 步骤 I.3.1 RNA 1.5 mL 1mLTrizol 5min-70 12000rpm 15min 1.5 mL 200ul 30s 3-5min 12000rpm 15min 1.5 mL 4 DNA 0.5 mL 30s 15min 12000rpm 10min RNA 1 mL 75 8000rpm 5min 5s 2min 15 L DEPC 55-60 10-15min OD260/280-70 I.3.2 反 转录 0.2mL 1 L RNA 1 L oligo dt 10 L DEPC 5s 70 5min 2min 4 L 5 Buffer 2 L 0.1M DTT 2 L 10Mm dNTPs 2min 1 L 42 50min 70 10min-70 I.3.3 引 物与TapMan 探 针的设 计与 合成 P1/P2 TapMan P1:-TGGCACTGATACTTGACAAGC-CTCCCGTGAAGCCGTAAA-TapMan:FAM-5-CAGCTTGCCCTCAAGGTGACGTG-3-TAMRA I.3.4 标 准曲 线的 建立 pGEMT/PCMV 10 1.0 1010-1.0 100/L 11DB43/T 959.2 2023 16 FQ-PCR X FQ-PCR Ct Y PCMV I.3.5 FQ-PCR 反应 条件 5 mol/L 2.5 mol/L 60 FQ-PCR 25 L 10 ExTaq Buffer 2.5 L Mg2+2.0mmol/L dNTPs 2 L ExTaq 0.25 L 0.5ul 10 mol/L 0.25 L 10 mol/L 1 L dd H2O 18.00 L PCR 94 4min 94 15s 60 40s 40 FAM/TAMRA I.3.6 I.3.7 PCR I.4 结果 判定 DB43/T 959.22023 17 附 录 J(规范 性)疱疹病 毒核 酸检 测 J.1 原理 PHV DNA DNA Taq SD-Buffer Mg2+Tris-HCl dNTPs EB J.2 标本 采集 J.2.1 样 本类 型 J.2.2 样 本采 集 1 g 1.5 mL EP 2-5 mL 10000rpm 3min 200 L 1.5 mL EP J.3 操作 步骤 J.3.1 引 物设 计 PHV-GGGACGCTCTGATTAAGGAAT-PHV-CTTGGTGATCAGCAGCAGCTTG-J.3.2 DNA 提取 DNA DNA PCR J.3.3 PCR 扩增 25 L 10 Buffer 2.5 L Mg2+2.0mmol/L dNTPs 2 LExTaq 0.25 L 0.5 L 10 mol/L DNA 1 L dd H2O 19.00 L PCR 95 3min 53 45s 72 3min 35 J.3.4 电 泳检 测 J.3.4.1 2 50 TAE 1 TAE 4 g 500 mL 1 TAE 200 mL 20 L EB DB43/T 959.2 2023 18 J.3.4.2 PCR 15 L 5V/cm 1 TAE J.4 检测 结果 判定 242bp 242bp DB43/T 959.22023 19 附 录 K(规范 性)猪急性 腹泻 综合 征冠 状病 毒(SADS CoV)RT PCR 检测 SADS CoV RT PCR K.1 原理 N RT-PCR K.2 样品 采集 K.2.1 样 品类 型 K.2.2 样 品采 集-80 K.3 操作 步骤 K.3.1 PBS 20 w/v 10,000 g 10-80 K.3.2 N F GGTCCCTGTGACCGAAGTTTTAG R GCGTTCTGCGATAAAGCTTAAAACTATTA K.3.3 RT PCR RT PCR 50 30 94 3 94 30 35 55 30 72 30 72 5 K.3.4 PCR K.4 结果 判定 DB43/T 959.2 2023 20 附 录 L(规范 性)猪呼吸 道冠 状病 毒(PRCV)巢 式PCR 检测 L.1 原 理 PCR(PCR)PCR PCR PCR PCR PCR PCR PCR L.2 样品 采集 L.2.1 样 品类 型 L.2.2 样 品采 集/处理-80 L.3 操作 步骤 L.3.1 RNA RNA RNA L.3.2 PERV F1-GGGTAAGTTGCTCATTAGAATAATGG R1-CTTCTTCAAAGCTAGGGACTG PCR F2-TTGTGGTYTTGGTYGTAATKCC R2-GGCTGTTTGGTAACTAATTTRCCA L.3.3 ISU-1 PRCV MEM-E PRCV L.3.4 PCR MgCl2 20 U Rnasin 5U AMV 2.5 U Taq DNA F1 R1 42 90 95 5 L.3.5 94 1 60 1.5 72 2.5 30 72 10 L.3.6 PCR 1:10 PCR PCR 2 2.5 U Taq DNA F2 R2 L.3.7 94 1 62 1.5 72 2.5 30 72 10 L.3.8 1.5 PCR PRCV 193 253 bp L.4 结果 判定 DB43/T 959.22023 21 附 录 M(规范 性)猪血凝 性脑 脊髓 炎病 毒检 测 M.1 原理 PHEV S 5 FAM 3 TAMRA Taq 5 3 PCR PCR M.2 样品 采集 M.2.1 样 品类 型 M.2.2 样 品采 集/处理 2 8 24 h-70 M.3 引物 和探 针序 列信 息 1 表M.1 引 物和 探针 序列 信息见-F CCAGGATAAATTTCTGTGG R AACCAGGACTAACCTTTGC TaqMan FAM ATGTCCCCACCAAGTATGTTACAGCAAA TAMRA M.4 操作 步骤 M.4.1 病毒 RNA 提取 1.0 g 0.2 mL TRIzol 1.5 mL RNase 2 1.5 mL RNase 1 mL TRIzol 15 s 10 min RNA 200 L 15 s 10 min DB43/T 959.2 2023 22 4 12 000 r/min 15 min 1.5 mL RNase-20 30 min 4 12 000 r/min 10 min 1 mL 75 4 12000 r/min 5 min 2 min 20 L RNase H2O 4 8 h-70 M.4.2 cDNA 模 板制 备 2 PCR 3 s 42 1 h 70 10 min 2 min-20 表M.2 反 转录 系配 制表 RNA Oligo dT 18 dNTP 2.5 mmol/L RNase M-MLV RNase H2O M.4.3 反 应体 系 PCR n+2 3 n 1 3 3 PCR 500 r/min 30 s 表M.3 PCR 反 应体 系配 制表 dNTP 2.5 mmol/L F 10 mmol/L R 10 mmol/L TaqMan FAM 10 mmol/L cDNA 4.0-40.0 ng Taq DNA DB43/T 959.22023 23 M.4.4 反 应参 数 PCR PCR TaqMan PCR PHEV 50 2 min 95 3 min 95 15 s 60 30 s 40 60 30 s M.5 结果 判定 M.5.1 结 果分 析条 件设 定 Ct M.5.2 质 控标 准 M.5.2.1 Ct M.5.2.2 Ct 30 M.5.2.3 M.5.3 结 果描 述及 判定 M.5.3.1 阴性 判定 Ct PHEV M.5.3.2 阳性 判定 Ct 35 PHEV M.5.3.3 有效 原则 M.5.3.3.1 Ct 35 M.5.3.3.2 DB43/T 959.2 2023 24 附 录 N(规范 性)猪内源 性逆 转录 病 毒C(PERV-C)PCR 检测 N.1 原理 env PERV-A PERV-B PERV-C 3 PCR N.2 样品 采集 N.2.1 样 品类 型 N.2.2 样 品采 集/处 理 2-3mL PBS PBMC-80 N.3 操作 步骤 N.3.1 DNA RNA 200ulPBMC 20 mg/mL K10ul DNA/RNA DNA RNA.N.3.2 PERV 3 PERV-A PERV-B PERV-C 3 PERV-A F-GAGATGGAAAGATTGGCAACAGC R-AGTGATGTTAGGCTCAGTGGGGAC PERV-B F-AATTCTCCTTTGTCAATTCCGGCCC R-CCAGTACTTTATCGGGTCCCACTG PERV-C F-CTGACCTGGATTAGAACTGG R-ATGTTAGAGGATGGTCCTGG N.3.3 PCR 10umol/L 1.0ul 2XMix12.5ul 1.0ul dd H2O 9.5ul 25ul 94 4 min 94 40 s 57.5 40 s 72 30 s 35 72 5 min 2 PCR N.4 结果 判定 DB43/T 959.22023 25 附 录 O(规范 性)猪嗜淋 巴细 胞疱 疹病 毒 3 型 TaqMan 荧光 定量PCR 检测 O.1 原理 GenBank 3 DNA PCR O.2 样品 采集 O.2.1 样 品类 型 O.2.2 样 品采 集/处理 2-3 mL PBS 3000rpm/min 6-70 2g 5mLPBS-70 200ul DNA 12000rpm/min 5 200ul DNA O.3 操作 步骤 O.3.1 病毒 DNA 提取 O.3.2 TapMan GenBank 3 AY170316.1 DNA DNAPol Oligo PCR PLHV3-DF CTGTATTGCTGAACCGATTG/PLHV3-DR CCATGGTGTCATCAACCTTA 3172bp Primer Express3.1 PCR PLHV3-fF TTATVAATTTCCCTCAGAGCTT/PLHV3-fR TTGGTGCGAGTATAAGACTCTG TaqMan PLHV-Fp FAM-TGCAAATTTTGACTTTCCATAT-TAMRA O.3.3 PCR 20umol/L 2.5ul 2XMix12.5ul 2.0ul dd H2O 5.5ul 25ul 95 5 min 94 30s 58 30s 72 30s 35 72 10min 1.5 O.3.4 PCR 10umol/L 0.5ul TaqMan 20umol/L 0.3ul 1.0ul dd H2O 13.8ul 10X EX Taq Buffer 2ul Mg2+2.0mmol/L 1.2ul dNTPs 25mmol/L 0.5ul EX Taq 0.2ul 20ul 95 2min 95 10s 60 30s 40 O.3.5 PCR PCR PMD18-T PMD18-T/PLHV3 O.4 结果 判定 PMD18-T/PLHV3 qPCR DB43/T 959.2 2023 26 附 录 P(规范 性)新型冠 状病 毒肺 炎防 控方 案(第 七版)P.1 样品 的采 集与 处理 P.1.1 样 品的 采集 种类:a.b.c.P.1.2 样 品的 处理:每 份 样品分 别处 理 P.1.2.1 粪便 标本:1 mL 3 5 10 8000 rpm 5 HANK S 3 5 mL 8000 rpm 5 P.1.2.2 血液 标本:EDTA 5 mL 1500 2000 rpm 10 P.1.2.3 血清 标本:5 mL 30 1500 2000 rpm 10 P.2 样本 保存 24 4 24-70-70-20 4 3-20 P.3 实时 荧光RT-PCR 方 法检测 新型 冠状 病毒 核酸 1ab open reading frame 1ab ORF1ab nucleocapsid protein N ORF1ab:F CCCTGTGGGTTTTACACTTAA R ACGATTGTGCATCAGCTGA P 5-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3 N:F GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT R CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG DB43/T 959.22023 27 P 5-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3 RT-PCR P.4 结果 判断:Ct Ct 40 Ct 37 Ct 37-40 Ct 40,注:
展开阅读全文