饲料添加剂L-赖氨酸盐酸盐测定DB22／T 1695-2012.pdf

ICS 65.120 B 46 备案号：35986-2013 DB22 吉林省 地方标准 DB 22/T 1695 2012 饲料添加剂 L-赖氨酸盐酸盐测定 Determination of L-Lysine monohydrochloride for feed grade 2012-12-21发布 2013-01-01实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 1695 2012 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009和 GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院、吉林大学。本标准主要起草人：李媛媛、关树文、张庆波、安伟、赵立群、任明月、王伟、王宇、柴竹林、杨波、王莹、吕航、张文、韩晓红、姚忱。DB22/T 1695 2012 1 饲料添加剂 L-赖氨酸盐酸盐测定 1 范围 本标准规定了用氨基酸自动分析仪测定饲料添加剂 L-赖氨酸盐酸盐的方法。本标准适用于饲料添加剂 L-赖氨酸盐酸盐的含量测定。2 规范性引用文件 下列 文 件对 于本文 件 的 应 用 是必不可少 的。凡是注日期 的 引 用文 件，仅所注日期 的 版 本适用于本文 件。凡是不注日期 的 引 用文 件，其最新版 本（包括所有 的 修改 单）适用于本文 件。GB/T 6682 分析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验方法 3 原理 试样 用盐酸 溶液溶解、稀释后，用氨基酸自动分析仪测定赖氨酸的量，计算 赖氨酸盐酸盐的含量。4 试剂与材料 所有试 剂，如未注 明规 格，均指 分析 纯；除另有说 明 外，水为 GB/T 6682规定的 一级水。4.1 盐酸。4.2 赖氨酸标准 溶液 c(C6H14N2O2)=2.5 mol/L。4.3 盐酸 溶液 c(HCl)=0.1mol/L：吸取 8.3 mL盐酸(4.2)置 于 1000 mL容 量 瓶中，用 水稀释后，定容至刻度。4.4 盐酸 稀溶液 c(HCl)=0.02mol/L：吸取 1.67 mL盐酸(4.2)置 于 1000 mL容 量 瓶中，用 水稀释后，定 容至刻度。4.5 赖氨酸标准 工作溶液 c(C6H14N2O2)=2 nmol/L：取 1 mL赖氨酸标准 溶液(4.2)用盐酸 溶液(4.3)定 容至 25 mL后；取 1 mL用盐酸 溶液(4.3)定 容至 50 mL。4.6 0.45 m微孔滤膜，水相。5 仪器 5.1 氨基酸自动分析仪。5.2 超声 波仪。5.3 分析 天平：感 量 0.1 mg。5.4 粉碎机。6 试样制备 DB22/T 1695 2012 2 取具代表性 的饲料 样 品，用 四 分法 缩减 分 取 25 g左右，粉碎 并 过 0.45mm孔径筛，充 分 混匀后 装入磨 口 瓶中 备 用。7 分析步骤 7.1 样品处理 称 取 50 mg的 试样(精确 至 0.1 mg)于 50 mL比色管 中，加 30 mL盐酸 溶液(4.3)，超声 提 取 30 min，转移 至 50 mL容 量 瓶中，用盐酸 稀溶液(4.4)定 容后，再 用盐酸 稀溶液(4.4)进行 10倍 稀释 上 机 测定。7.2 测定 7.2.1 色谱参考条件 色谱参考条 件如下：a)色谱柱：离子交换柱（4.6 mm 60 mm）；b)反 应 器温 度：135；c)分 离柱柱温：57；d)缓冲 液 流速：0.400 mL/min；e)反 应液 流速：0.350 mL/min。7.2.2 色谱测定 按仪 器 说 明 书，调整好 仪 器操 作 参数，洗脱 用 缓冲 液 的 pH和适 当 的分析 程序参见附录 A，分 别 注入 赖氨酸标准 工作溶液 和 制备好 的 试样，赖氨酸标准 工作溶液 色谱谱参见附录 B中 图 B.1用氨基酸自 动分析仪 以 外 标法分析测定 试样中 赖氨酸的量，计算 赖氨酸盐酸盐的含量。7.3 空白试验 除不 称 取试样外，均 按 上述步骤进行。8 结果计算 测定 结果 可 由仪 器 工作 站 自动 计算，也 可 按 下 式（1）计算：10010X9=mM V F C.(1)式 中：X 样 品 中 L-赖氨酸盐酸盐的含量，单位 为 克每百克（g/100g）；C 试样 测定 液中 赖氨酸的量，单位 为微 摩尔每毫升（pmol/mL）；F 试样稀释 倍数；V 试样 的定 容 体积，单位 为 毫升（mL）；M L-赖氨酸盐酸盐的 摩尔 质量，182.65，单位 为 克每摩尔（g/mol）；m 样 品的质量，单位 为 克（g）；109将克换 算 成纳克 的 系数。结果保留 至一 位 小数。9 精密度 DB22/T 1695 2012 3 在重复 性 条 件下，获得 的 两次独 立测 试 结果 的 绝 对 差值 不超过算 术 平均 值 10%。在再现 性 条 件下，获得 的 两次独 立测 试 结果 的 绝 对 差值 不超过算 术 平均 值 10%。DB22/T 1695 2012 4 A A 附 录 A（资料性附录）推荐性洗脱程序方案 表 A.1 洗脱程序试剂用量 缓冲 液 流 量%洗脱时间 min B1 B2 B3 B4 B5 B6 R1 R2 R3 0.0 100 0 0 0 0 0 50 50 0 2.5 100 0 0 0 0 2.6 0 100 0 0 0 0 5.0 0 100 0 0 0 0 5.1 0 0 100 0 0 0 13.8 0 0 100 0 0 0 13.9 0 0 0 100 0 0 29.0 0 0 0 100 0 0 29.1 0 0 0 0 0 100 32.0 0 50 50 0 32.1 0 0 0 100 33.0 0 0 0 0 0 100 34.0 0 100 0 0 0 0 34.1 100 100 0 0 0 0 37.0 0 0 100 37.1 50 50 0 53.0 100 0 0 0 0 0 50 50 0 DB22/T 1695 2012 5 B B 附 录 B（资料性附录）L-赖氨酸盐酸盐的测定色谱图 赖氨酸标准品 色谱图见图 B.1。Minutes0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0mV02040mV0204023.180 Lys31.413 VIS 1Retention TimeNameVIS 2Name 图 B.1 氨基酸分析仪检测赖氨酸标准溶液的色谱图（100pmol/L）_