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ICS 67.050 X 04 备案号：36360-2013 DB22 吉林省 地方标准 DB 22/T 1535 2011 人参中黄曲霉素 B1的测定 液相色谱法 Determination of aflatoxin B1 in Gginsengs Liquid chromatography 2012-04-01发布 2012-05-01实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 1535 2011 I 前 言 本标准按 GB/T 1.1 2009 给出的规则起草。本标准由吉林省工信厅提出并归口。本标准起草单位：吉林省现代检测技术工程研究中心。本标准起草人：石莹岩、丁兰、周丽、王旭、宋薇、陈雷。DB22/T 1535 2011 1 人参中黄曲霉素 B1的测定 液相色谱法 1 范围 本标准规定了人参中黄曲霉素 B1的测定方法的原理、试剂、材料、检测仪器、分析步骤、结果计算 和方法的精密度。本标准适用于生晒参中黄曲霉素 B1的测定。本标准的检出限：1 g/kg。本标准的测定范围：0.5 g/L 100 g/L。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用 是必不可少 的。凡是注日期 的 引 用文件，仅所注日期 的 版 本适用于本文 件。凡是不注日期 的 引 用文件，其最新版 本（包括所有 的 修改 单）适用于本文件。GB/T 6682 分析 实验室 用 水 规 格 和试 验 方法 3 原理 试 样经乙腈-水 提 取，提 取液过滤后，经多功能净化柱净化，去除脂肪、蛋白质、色 素 及碳水化合物等干扰物质。净化液 中的黄曲霉素 B1以三氟乙酸衍 生，用 带有荧光 检测器的 液相色谱系统 分析，外 标法定 量。4 试剂和材料 除另有 规定 外，所 用试剂 均为 分析 纯。4.1 水，符合 GB/T 6682规定的 一级水要求。4.2 乙腈。4.3 乙腈，色谱纯。4.4 三氟乙酸。4.5 正己烷。4.6 乙腈-水 提 取液（84+16）：量取乙腈（4.2）840 mL，加水 160 mL，混匀。4.7 水-乙腈溶液（85+15）：量取乙腈（4.3）150 mL，加水 850 mL，混匀。4.8 标准 储备液（20000 mg/L）：分 别 准 确称取 黄曲霉素 B10.2000 g（精 确至 0.000 1 g），置 于 10 mL容 量 瓶 中，加乙腈（4.3）溶 解，并 稀释 至 刻 度。此 溶液 密 封 后 避 光-30 保存，两年 有 效。4.9 标准工 作 液（200 mg/L）：准 确 移 取 标准 储备液 0.100 mL，至 10 mL容 量 瓶 中，加乙腈（4.3）稀释 至 刻 度。此 溶液 密 封 后 避 光 4 保存，两个月 有 效。4.10 标准 系 列 溶液：准 确 移 取 标准工 作 液，至 10 mL容 量 瓶 中，加乙腈（4.3）稀释 至 刻 度（含 黄曲 霉素 B1浓 度 为 0.10 g/L、0.50 g/L、1.00 g/L、2.00 g/L、5.00 g/L、10.00 g/L、25.00 g/L、50.00 g/L、100.00 g/L的 系 列标准 溶液），注 意避 光。DB22/T 1535 2011 2 5 仪器和设备 5.1 液相色谱 仪：具 荧光 检测器。5.2 可 调式振荡 器。5.3 涡旋 混合 器。5.4 烘箱。5.5 氮吹 仪。5.6 离 心 机。5.7 植 物样 本 粉碎机。5.8 分析 天平：感 量 0.1 mg。5.9 含 有 反向离子交换吸附 剂的 多功能净化柱。6 样品制备 6.1 试样制备 人参 样 品 去 杂 后，磨碎，过 20目筛（40 m 60 m），全部通 过，储 于 洁 净 容 器中，保存 备 用。注：在采 样 和 制 备过 程中，应 避免 试 样 污染。6.2 提取 称取 20.000 g（精 确 到 0.001 g）具 有 代 表性 的试 样至 250 mL的 三 角瓶 中，加 80 mL乙腈-水（4.6）定容，震荡 30 min后过滤，收集 滤液。6.3 净化 移 取 约 8 mL提 取液至多功能净化柱 的 玻璃管 中，将 多功能净化柱 的 填 料 管插入玻璃管 中并 缓慢推 动填 料 管，净化液 就被收集到 多功能净化柱 的 收集池 中。6.4 衍生化 从 多功能净化柱 的 收集池内转移 2 mL净化液 到 液相色谱 用 棕 色样 品瓶 中，在 60 水 浴 下 氮气吹 干。加 入 200 L正己烷（4.5）和 100 L 三氟乙酸（4.4），密 闭 混匀 30 s后，在 40 1 烘箱 中 衍 生 15 min。室 温 水 浴 下 氮气吹 干，以 200 L水-乙腈（4.7）溶 解，混匀 30 s，1 000 r/min离 心 15 min，取 上清 液至液 相色谱 仪 样 品瓶 中，供 测定用。6.5 标准系列溶液的衍生化 吸 取 标准 系 列 溶液 各 200 L，在 60 水 浴 下 氮气吹 干，衍 生 化 方法 同 6.4。6.6 测定 6.6.1 液相色谱参考条件 6.6.1.1 色谱柱：反 相 C18柱，长 12.5 cm、内 径 2.1 mm、粒径 5 m；或 等 效 柱。6.6.1.2 柱 温：30。6.6.1.3 流 动 相：乙腈（4.3），水，梯 度 洗脱 的 变 化可 参 考 表 1。DB22/T 1535 2011 3 表 1 流动相的梯度变化 时间 min 乙腈%水%0.00 15.0 85.0 6.00 17.0 83.0 8.00 25.0 75.0 14.00 15.0 85.0 6.6.1.4 流速：0.5 mL/min。6.6.1.5 荧光 检测器：激发波长：360 nm；发射波长：440 nm。6.6.1.6 进 样量：25 L。6.6.2 色谱分析 以 标准 系 列的 峰面积 对 浓 度 绘 制 黄曲霉素 B1的标准曲 线。试 样 通 过 与 标准 色谱 图 保 留时间 的 比较 定性，根据 黄曲霉素 B1的标准曲 线 及 试 样 中的 峰面积 计算试 样 中的黄曲霉素 B1含 量。6.6.3 色谱图 色谱 图 参 见 附 录 A。7 结果计算 样 品 中黄曲霉素 B1的 含 量 按 式（1）计算。f mV Ax=.(1)式 中：X 试 样 中黄曲霉素 B1的 含 量，单位 为 微克每千克（g/kg）；A 试 样 按 外 标法 在 标准曲 线 中对应的 浓 度，单位 为 微克每升（g/L）；V 试 样 提 取过 程中提 取液 的 体积，单位 为 毫升（mL）；f 试 样溶液衍 生 后 较 衍 生 前 的 浓 缩倍数；m 试 样质量，单位 为 克（g）；计算结果 保 留 三 位 有 效 数字。8 精密度 在 重复 性 条 件下 获得 的 两 次独立 测定结果的 绝 对 差值 不 得超 过 算术 平 均 值 的 15%。DB22/T 1535 2011 4 A A 附 录 A（资料性附录）黄曲霉素混合标准溶液的色谱图 黄曲霉素 混合 标准 溶液 的 色谱 图见图 A.1。1、黄曲霉素 G1；2、黄曲霉素 B1；3、黄曲霉素 G2；4、黄曲霉素 B2。图 A.1 黄曲霉素混合标准溶液的色谱图 _
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