饲料中玉米赤霉烯酮的测定 液相色谱-质谱质谱法DB22／T 1618-2012.pdf

ICS 65.120 B 04 备案号：35746-2013 DB22 吉林省 地方标准 DB 22/T 1618 2012 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of zearalenone in feeds HPLC-MS/MS method 2012-12-01发布 2013-01-01实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 1618 2012 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009和 GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心、长春大成实业有限公司、吉林出入境 检验检疫局。本标准主要起草人：康明芹、姚天玲、黄军生、梁红锐、杨帆、张勋、顾婷婷、刘友林。DB22/T 1618 2012 1 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准规定了饲料中玉米赤霉烯酮的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于饲料中玉米赤霉烯酮的测定和确证。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的 应 用 是必不可少 的。凡是注日期 的 引 用文件，仅注日期 的 版 本适用于本文件。凡是不注日期 的 引 用文件，其最新版 本(包括所 有的 修改 单)适用于本文件。GB/T 6682 分析 实验 室 用 水 规 格 和 试 验方法。3 原理 试样 用 乙腈-水溶 液提 取，免 疫 亲 和 柱净化，液相色谱-质谱/质谱 仪 测定，外 标法定 量。4 试剂与材料 除另 有 说 明 外，所 用 试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的 一级水。4.1 氯化钠(NaCl)。4.2 三水乙酸铅(C4H6O4Pb 3H2O)。4.3 乙腈（CH3CN）：色谱 纯。4.4 甲醇(CH3OH)：色谱 纯。4.5 甲酸（HCOOH）：纯度 98%。4.6 玉米赤霉烯酮标准 物 质（C18H22O5，CAS号：17924-92-4）：纯度 98%。4.7 25%乙酸铅溶 液：称取 58 g三水乙酸铅（4.2），用 142 mL水溶解，混匀。4.8 乙腈-水（65+35）：650 mL乙腈 和 350 mL水混匀。4.9 0.1%甲酸溶 液：取 1 mL甲酸(4.5)，用 水稀释 并定 容至 1 000 mL。4.10 样品 定 容 液：乙腈-0.1%甲酸溶 液(75+25)。量取 75 mL乙腈(4.3)与 25 mL的 0.1%甲酸溶 液(4.9)，混匀。4.11 玉米赤霉烯酮标准 储备 液：100.0 mg/L。准确 称取 适 量 玉米赤霉烯酮标准 物 质（4.6）用 甲醇溶解并 全部转移至 50 mL容量瓶 中，用 甲醇 定 容至刻度，混匀，0 4 可避光保存 6个月。DB22/T 1618 2012 2 4.12 玉米赤霉烯酮标准 工作 液：准确 吸取 玉米赤霉烯酮标准 储备 液（4.11）1.0 mL于 100 mL容量瓶 中用 甲醇稀释 成 1.0 mg/L的 溶 液，准确 吸取上述 标准 溶 液适 量 于 容量瓶 中，用 甲醇依次 配制 成 浓 度为 2.0 g/L、5.0 g/L、10.0 g/L、50.0 g/L、100.0 g/L、200.0 g/L、500.0 g/L的 系 列标准 溶 液。4.13 玉米赤霉烯酮 免 疫 亲 和 柱：60 mg/3 mL。4.14 纤维滤纸：直径 11 cm，孔径 1.5 m，无荧 光 特性。4.15 滤膜：0.22 m，有 机系。5 仪器与设备 5.1 液相色谱-串联 质谱 仪：配 备 电喷雾离子源（ESI）。5.2 高速 匀 浆机。5.3 高速离 心 机：10 000 r/min。5.4 超声波清洗器：40 kHz。5.5 天 平：感 量 0.0001 g和 0.01 g。5.6 具塞聚丙 烯 或聚四氟 乙 烯 离 心 管：50 mL。5.7 涡旋 混 合器。5.8 氮吹 仪。5.9 0.28 mm孔筛。6 试样制备与保存 取 有 代表性 样品，粉碎，过 0.28 mm筛，混匀备 用。7 分析步骤 7.1 提取 称取 4 g试样（精 确 至 0.01 g）于 50 mL离 心 管 中，加 入 0.6 g氯化钠，20 mL乙腈-水溶 液(4.8)，涡旋 混 合 1 min，10 000 r/min均 质 1 min，超声 15 min后，10 000 r/min冷冻离 心 4 min，取 4 mL上 清 液于 另一 离 心 管 中，加 入 16 mL水 进行 稀释，加 入 200 L乙酸铅溶 液（4.7），涡旋 混匀 后 10 000 r/min冷冻离 心 4 min，过纤维滤纸，滤 液 待 净化。7.2 净化 将 注 射器连接 于 免 疫 亲 和 柱（4.13）上 方，准确 加 入 上述 滤 液 10 mL，使滤 液 以 不 超过 1滴/秒 的 速 度 通过 免 疫 亲 和 柱，直 至 有 部分 空气通过 柱 体。用 5 mL水 淋洗 柱 子，并 使 部分 空气通过 柱 体，用 1.5 mL以 不 超过 1滴/秒 的 流速洗脱 至 玻璃 试 管 中，55 氮气吹干，用 样品 定 容 液（4.10）定 容至 1 mL，过 0.22 m滤膜，待 测。DB22/T 1618 2012 3 7.3 空白试验 除不称取试样外，均 按 7.1、7.2进行。7.4 测定 7.4.1 色谱参考条件 色谱 参考条 件 如 下：a）色谱 柱：C18，2.1mm 150 mm，3.5 m；b）柱 温：室 温；c）流速：0.20 mL/min；d）进 样量：10 L；e）流动 相：乙腈-0.1%甲酸溶 液（75+25)。7.4.2 质谱参考条件 质谱 参考条 件 如 下：a)电离 方 式：电喷雾电离（ESI）；b)扫描 方 式：负离子扫描；c)检测方 式：多反 应 监 测（MRM）；d)电离电压：-3 kV-5 kV；e)脱 溶剂 气：0.75 MPa；f)雾 化 气：0.625 MPa；g)辅助 气：0.625MPa；h)碰撞 气：0.15 MPa；i)离子源温 度：300 550.0；j)定 性离子 对、定 量 离子 对、去簇 电压、碰撞能 量 见 表 1。表 1 玉米赤霉烯酮的监测离子对、去簇电压和碰撞能量 化 合 物 名 称 母 离子 m/z 子离子 m/z 去簇 电压 V 碰撞能 量 V 175*-100-31 273-93-28 玉米赤霉烯酮 317 299-102-27 注：带“*”的 为 定 量 离子。7.4.3 定性分析 在同 一 色谱/质谱 条 件下 进行 标准 溶 液和 样品溶 液的测定，如 果 样品溶 液中检出的色谱 峰 的 保 留时 间 与 标准 物 质色谱 峰 的 保 留时间 一 致，所 选择 的 两 对 子离子 的质 荷比也 一 致，而且 样品 定 性离子 的相对 丰 度与 浓 度 相 当 标准 工作溶 液的定 性离子 的相对 丰 度 相 比较，相对标准 偏差 不 超过表 2规定的 范围，则可 判 定 样品 中 存 在该 物 质。标准 溶 液的 多反 应 监 测色谱 图 参 见附录 A。DB22/T 1618 2012 4 表 2 定性确定时相对离子丰度的最 大允许偏差 相对 离子 丰 度 50%20%至 50%10%至 20%10%允许 的相对 偏差 20%25%30%50%7.4.4 定量测定 根据 试样 中 被 测 样 液中 被 测 组 分 的 含 量 情况，选 取 响 应 值 相 近 的标准 工作 液 进行 分析，对于 高浓 度样品 须 适 当 进行系 列 稀释。标准 工作 液和 样 液中 被 测 组 分 的 响 应 值 均应 在 仪 器 线 性 响 应 范围内。在 上述色谱 条 件下，玉米赤霉烯酮的 参考 保 留时间 为 3.00 min，外 标法定 量。标准 溶 液的 多反 应 监 测色谱 图 参 见附录 A。8 结果计算 和表 述 按（1）式 计算 试样 中玉米赤霉烯酮 含 量，计算结果需扣 除 空 白值。mV cX=.(1)式 中：X 试样 中玉米赤霉烯酮 残留 量，单位 为 微克每千克(g/kg)；c 从 标准 曲线读 出的玉米赤霉烯酮 溶 液 浓 度，单位 为 微克每升(g/L)；V 样 液 最 终 定 容 体 积，单位 为 毫升(mL)；m 样 液 所 代表 的 最 终 试样 的质 量，单位 为 克(g)。计算结果 表 示到小数点 后 一 位。9 定量 限、回收率 和 精密 度 9.1 定量 限 本标准方法玉米赤霉烯酮的定 量 限 为 5.0 g/kg。9.2 回收率及精密 度 在重复 性条 件下 获得 的 两 次 独立 测 试 结果 的 绝 对 差值 不 大于 这两 个 测定 结果 的 算 术 平 均 值 的 15%。试样 中玉米赤霉烯酮的 添 加浓 度 及 其 回收率、精 密 度 实验 数据 参 见附录 B。DB22/T 1618 2012 5 A A 附 录 A（资 料性 附录）标准 溶 液 多反应 监测（MRM）色谱 图 图 A.1 玉米赤霉烯酮标准 溶 液 多反应 监测（MRM）色谱 图(10.0 mg/L)DB22/T 1618 2012 6 B B 附 录 B（资 料性 附录）不同添加水平平均回收率及精密 度（n=10）表 B.1 不同添加水平平均回收率及精密 度（n=10）样品 名 称 添 加浓 度 mg/kg 回收率范围%相对标准 偏差%5.0 95.6 105.0 2.95 10.0 93.1 103.1 3.19 玉米 蛋 白 饲 料 50.0 96.8 103.8 2.23 5.0 85.6 99.6 4.06 10.0 79.0 99.6 2.90 纤维 饲料 50.0 84.8 90.6 1.68 5.0 97.6 104.8 2.38 10.0 89.2 102.2 3.83 玉米 麸 质饲料 50.0 92.6 98.8 1.87 _