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ICS 65.120 B 46 备案号：35987-2013 DB22 吉林省 地方标准 DB 22/T 1696 2012 饲料中阿福特罗的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of Arformoterol in feeds LC-MS/MS method 2012-12-21发布 2013-01-01实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 1696 2012 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009和 GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院、吉林大学。本标准主要起草人：李媛媛、刘斌、关树文、张爽、刘静秋、李滢倩、王颖、王庆峰、刘桂华、石金娥、李宁、毛燕、郎乐、包懿、李丹。DB22/T 1696 2012 1 饲料中阿福特罗的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准规定了饲料中阿福特罗的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于饲料中阿福特罗的测定。本标准方法检测限为 10 g/kg。2 规范性引用文件 下列文 件对 于本文 件 的 应 用 是必不可少 的。凡是注日期 的 引 用文 件，仅所注日期 的 版 本适用于本文 件。凡是不注日期 的 引 用文 件，其最新版 本（包 括所有 的 修改 单）适用于本文 件。GB/T 6682 分析实 验 室 用 水 规 格 和 试 验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 原理 试样 用 盐酸-甲醇混合溶 液 溶解 提 取、醋酸铅沉淀蛋白后 用 固 相 萃取小柱净化，洗脱 液 经氮气吹干 后 用 甲酸胺溶 液 溶解，供 液相色谱-质谱质谱检测，外 标法定量。4 试剂与材料 所有试剂，如未注明 规 格，均指分析纯；除另有说明外，水 为 GB/T 6682规定的 一级水。4.1 盐酸（36%）。4.2 氨水（25%）。4.3 醋酸铅。4.4 甲酸胺。4.5 甲醇。4.6 甲酸:色谱 纯。4.7 阿福特罗（C23H30N2O10,CAS号:73573-87-2）：纯度 98%。4.8 盐酸溶 液 c(HCl)=0.1mol/L：吸取 8.3 mL盐酸(4.1)置 于 1000 mL容 量 瓶 中，用 水稀释后，定 容 至刻度。4.9 盐酸甲醇溶 液：取 80 mL盐酸溶 液(4.8)，加入 20 mL甲醇(4.5)混匀。4.10 饱 和 醋酸铅溶 液：在 50 mL水 中 加入一 定量的 醋酸铅(4.3)，超声 5 min，直 至固 体 不 再 溶解。4.11 甲酸水溶 液(0.2%)：取 1 mL甲酸(4.6)，加水 定 容至 500 mL。4.12 氨甲醇水溶 液(5%)：取 5 mL氨水(4.2)与 95 mL甲醇(4.5)混合。4.13 甲酸 铵 溶 液(c=10 mmol/L)：称 取 0.063 g甲酸 铵 至 100 mL容 量 瓶，加水 定 容。4.14 阿福特罗标准 贮备 液(1 mg/mL)：称 取 0.1 g（精确 至 0.1 mg）阿福特罗(4.7)，至 100 mL容 量瓶，甲醇(4.5)定 容。2 8 冷藏保存。保 质 期一 周。DB22/T 1696 2012 2 4.15 阿福特罗标准 工作 液(1 g/mL)：吸取 0.1 mL阿福特罗标准 贮备 液(4.14)，用 甲酸水溶 液(4.11)定 容至 100 mL。2 8 冷藏保存。保 质 期一 周。4.16 固 相 萃取小柱：混合 型阳离子交换 柱（60 mg,3 mL）。4.17 滤膜:0.22 m。5 仪器 5.1 液相色谱-质谱 联 用 仪：配 有 电喷雾电离源。5.2 氮气吹干 仪。5.3 离心机，转速 大于 7000 r/min。5.4 分析 天平：感 量 0.1 mg。5.5 粉碎机。5.6 旋涡振荡器。5.7 固 相 萃取 装 置。6 试样制备 按照 GB/T 14699.1采样，将 实 验 样 品 粉碎，充 分混合均匀后 待 用。7 分析步骤 7.1 提取 称 取试样 2 g(精确 至 0.01 g)于 50 mL离心管 中，准 确 加入 19 mL盐酸甲醇溶 液(4.9)和 1 mL饱 和 醋酸 铅溶 液(4.10)，充 分 振荡 20 min，然 后 于 7000 r/min离心 10 min，上清 液 备 用。7.2 净化 固 相 萃取小柱 先 用 3 mL甲醇、3 mL水 活 化。取 上清 液 5 mL过 柱，用 2 mL水 和 2 mL甲醇 淋 洗，空 气 抽干 2 min，用 5 mL氨甲醇水溶 液(4.12)洗脱，收集 洗脱 液，氮吹干，用 1 mL甲酸胺溶 液(4.13)溶解，过 滤膜，待 测。8 液相色谱-串联质谱测定 8.1 色谱参考条件 色谱 参考条 件如 下：a)色谱 柱：C8柱(50 mm 2.1 mm(i.d)，3 m)，或 其 他等效 柱；b)流动 相：A为 10mmol/L 甲酸胺溶 液（pH 4），B为 甲醇，梯 度洗脱 程序见表 1；c)柱 温：40；d)流速：0.5 mL/min；e)进 样 体积：5.0 L。表 1 梯度洗脱程序 DB22/T 1696 2012 3 时间 min A%B%0 65 35 1.5 80 20 2 80 20 2.5 30 70 3 30 70 3.5 65 35 8.2 质谱参考条件 质谱 参考条 件如 下：a)电离 方 式：电喷雾电离，正离子；b)电喷雾电压：4 kV；c)扫描模式：多 反 应 监测（MRM），母 离子 m/z 345.2，定量 离子 m/z 149.1，定 性 离子 m/z 327.5；d)裂 解 电压：115 V。8.3 定性测定 按照 上 述 条 件 测定 试样 和标准 工作 溶 液，如 果 试样 中的质量色谱峰 保 留 时间与 标准 工作 溶 液 一 致（变 化 范围 在 2.5%之内）；试样 中 目 标 化合 物 的 两个 子离子 的相 对 丰 度 与 浓 度 相 当 标准 溶 液的相 对 丰度一 致，相 对 丰 度 偏差 不 超过表 2的规定，则 可 以判断 试样 中 存在 阿福特罗。表 2 定性离子相对丰度的最大允许偏差 8.4 定量测定 本方法 采 用 外 标法单 离子 定量测定，定量 离子 m/z 345.2/149.1，待 测 样 液中阿福特罗的相 应 值 应 在 标准 曲线线性范围内，超过 线性范围 则 应稀释后 再进 样分析。在上 述 色谱 条 件 下，阿福特罗标准 物 质的 多 反 应 监测（MRM）色谱 图 参见 附录 A中 图 A.1。8.5 平行试验 按 上 述步骤，对 同 一样 品 进 行 平 行 试 验测定。9 结果计算 测定 结果 可 由 计算 机 自 动 计算 阿福特罗的 含 量，也 可 按 式（1）计算：mn V C=X.(1)式 中：相 对 离子 丰 度 50%20%至 50%10%至 20%10%允许 的相 对 偏差 20%25%30%50%DB22/T 1696 2012 4 试样 中阿福特罗的 含 量，单位为 微克每千克（g/kg）；c 由标准 曲线查得 试 液中阿福特罗的 浓 度，单位为 微克每升（g/L）；V 试样 定 容 体积，单位为 毫升（mL）；n 稀释 倍数；m 试样取样 质量，单位为 克（g）。10 精 密 度 在 重复性 条 件 下，获得 的 两次独立 测 试 结果 的 绝 对 差值 不 超过 算 术 平 均 值 10%。在再 现性 条 件 下，获得 的 两次独立 测 试 结果 的 绝 对 差值 不 超过 算 术 平 均 值 10%。DB22/T 1696 2012 5 A A 附 录 A（资 料性 附录）阿福特罗参考谱 图 阿福特罗标准 溶 液 参见 色谱 图 A.1。图 A.1 阿福特罗标准 溶 液 LC-MS/MS多反应 监测质量色谱 图(50 g/kg)_
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