鹿茸中磷脂含量的测定 分光光度法DB22／T 2288-2015.pdf

ICS 65.020.30 B 44 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 22882015 鹿茸中磷脂含量的测定 分光光度法 Determination of phospholipid in cornu cervi pantotrichumSpectrophotometry 2015-04-07发布 2015-05-01实施吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 22882015 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省食品药品监督管理局提出 本标准由吉林省畜牧业管理局归口。本标准起草单位：吉林省药品检验所。本标准主要起草人：杨献玲、李秀芬、申玉华、彭振宇、杨继芳。DB22/T 22882015 1 鹿茸中磷脂含量的测定 分光光度法 1 范围 本标准规定了鹿茸中磷脂含量的分光光度测定方法。本标准适用于梅花鹿和马鹿鹿茸中磷脂含量的测定。本标准最低检出限为：0.3 mg/kg。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试料经用无水乙醇提取，磷脂与硫氰铁铵反应生成溶于三氯甲烷的红色的配位化合物，在485 nm 波长处有最大吸收，通过测定该配位化合物的吸光度可测定磷脂的含量。4 试剂和材料 除非另有注明，本标准所用试剂均为分析纯试剂，水为 符合GB/T 6682规定的三级水。4.1 三氯甲烷（CHCl3）。4.2 无水乙醇（CH3CH2OH）。4.3 三氯化铁（FeCl3）。4.4 硫氰酸铵（NH4SCN）。4.5 卵磷脂标准品：纯度大于 99.0%，CAS 8002-43-5。4.6 硫氰酸铁铵溶液：取三氯化铁（4.3）2.70 g、硫氰酸铵（4.4）2.30 g，置于 100 mL 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。4.7 卵磷脂标准储备液：准确称取卵磷脂标准品（4.5）约75 mg（准确至 0.1 mg），置于100 mL 容量瓶中，用三氯甲烷（4.1）溶解并定容至刻度，于 4 C 冰箱中保存。此标准储备液溶液每 1 mL 含卵磷脂750 g。4.8 卵磷脂标准工作液：准确量取卵磷脂标准储备液（4.7）10 mL，置于100 mL 容量瓶中，用三氯甲烷（4.1）定容至刻度，于 4 C 冰箱中保存。此标准工作液每 1 mL 含卵磷脂 150 g。5 仪器 5.1 可见分光光度计。5.2 分析天平：感量0.0001 g、感量 0.001 g、感量0.01 g。DB22/T 22882015 2 5.3 超声波清洗器：功率：700 w、频率：40 kHz。5.4 旋转蒸发仪。5.5 漩涡混合器。5.6 离心机：转速2000 rpm。5.7 粉碎机：功率：800 w、转速：26000 rpm。6 试样的制备 6.1 取样及粉碎 根据不同规格鹿茸，在不同部位（上段、中段、下段）均匀等重取样，鹿茸样品初步粉碎（通过一号标准筛），再用四分法缩减分取约25g样品，粉碎并过四号标准筛，筛上部分样品量0.5 g，将筛上和筛下部分充分混匀后装入磨口瓶中备用。茸片：用四分法缩减分取约25g样品，粉碎并过四号标准筛，筛上部分样品量0.5 g，将筛上和筛下部分充分混匀后装入磨口瓶中备用。茸粉：直接过四号筛，筛上部分样品量0.5 g，如果筛上部分样品0.5 g，继续粉碎，直到符合要求，将筛上和筛下部分充分混匀后装入磨口瓶中备用。6.2 试样溶液的制备 准确称取试样（6.1）约1.5 g（精确至0.01 g），置于250 mL具塞锥形瓶中，加入乙醇50 mL，准确称定重量，超声处理1 h，放至室温，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，收集全部滤液，取滤液25 mL，低温减压浓缩至干，准确加入10.0 mL三氯甲烷（4.1）充分溶解残渣，摇匀，过滤，滤液即为试样溶液（于4 C冰箱中保存）。7 分析步骤 7.1 标准曲线 准确吸取标准工作溶液（4.8）0.0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL，分别置于10 m L具塞刻度试管中，加三氯甲烷（4.1）至5.0 mL刻度，加硫氰酸铁铵溶液（4.6）2.0 mL，置漩涡混合器混匀1 min，离心（5.6）10 min，取下层溶液，在485 nm波长处测定吸光度，同时以零号管作为空白，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。7.2 试料的测定 准确吸取试样溶液（6.2）1.0 mL，置与10mL具塞刻度试管中，加三氯甲烷至5.0 mL刻度，参照（7.1）项下自“硫氰酸铁铵溶液（4.6）2.0 mL”起，依法操作，测定吸光度，根据标准曲线计算出试料溶液中的磷脂浓度。8 结果计算 8.1 试样中磷脂含量按公式进行计算。DB22/T 22882015 3 10001000=mV CX.(1)式中：X 试样中磷脂的含量（以卵磷脂计），单位为毫克每千克（mg/kg）；C 测定试样溶液中磷脂的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V 稀释倍数，单位为毫升（mL）；m 试样质量，单位为克（g）。8.2 以重复性条件下获得的两次独立测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9 精密度 9.1 重复性 在重复性条件下，获得的两次平行独立测定结果10.00 mg/kg时，相对偏差应不超过5%；获得的两次平行独立测定结果10.00 mg/kg时，相对偏差应不超过10%。9.2 再现性 在再现性条件下，获得的两次平行独立测定结果10.00 mg/kg时，相对偏差应不超过10%；获得的两次平行独立测定结果10.00 mg/kg时，相对偏差应不超过20%。_