大白菜霜霉病抗性鉴定技术规范DB22／T 2024-2014.pdf

ICS 65.020.20 B 05 DB22 吉林省 地方标准 DB 22/T 2024 2014 大白菜霜霉病抗性鉴定技术规范 The technical standard of resistance identification to downy mildew for Chinese Cabbage 2014-02-28发布 2014-04-30实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 2024 2014 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林农业大学。本标准主要起草人：王晓梅、韩玉珠、张浩、马贵龙、王薇、赵欣欣、刘朴、王雪。DB22/T 2024 2014 1 大白菜霜霉病抗性鉴定技术规范 1 范围 本标准规定了大白菜霜霉病抗性鉴定的接种体制备、接种方法、室内抗性鉴定、病情调查、抗病性 评价以及鉴定记载表格。本标准适用于大白菜资源对大白菜霜霉病抗性的室内鉴定及评价。2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。2.1 霜霉病 cabbage downy mildew 由 卵菌门 霜霉 菌属芸薹叉梗 霜霉 菌（Peronospora parasitica Fr.）引 起的 一 种 气传 病 害，属专 性寄生 性 卵菌 病 害，该 病 害是我 省大白菜 最重 要的 叶部 病 害之一,不同生育期均严重发生，流行重 病 年份造成 大白菜 减产 50%60%，导致 大白菜 品质 下 降、产量降低。参见附录 A。2.2 抗病性 disease resistance 植物 体 所具有 的 能够减轻或克服 病 原物致 病 作 用的 可遗传 性 状。2.3 人工接种 artificial inoculation scale 在 适 宜条 件下，通过 人 工操作将 接种体 置 于 植物 体适 当部 位并 使之发 病的 过程。2.4 接种体 inoculm 用于接种 引 起病 害 的病 原物或 病 原物 的 一部分 2.5 接种悬浮液 inocululn suspension 用于接种的 含有 定 量 接种体的 液 体。2.6 病情级别 disease rating DB22/T 2024 2014 2 人 为 定 量植物个 体 或群 体 发 病 程度 的 数值化描述。2.7 病情指数 disease index(Dl)通过 对 植物个 体 发 病 程度（病情 级别）数值 的 计算 所 获得 的 群 体 发 病 程度 的 数值化描述 形式。3 接种体制备 3.1 采集 从田间采集 具有 典型 霜霉病病 斑 的大白菜病 叶，用 清水冲洗掉 病 斑上老 的霉 层后，置 于 20、湿 度（RH)100 的 培养箱中，黑暗保湿 24h，待长 出 灰色 霉 层后，将 病 叶 浸 于 水中，用 干净 的 毛刷 将 病 斑上新 产生 的 孢子囊刷 于 盛 有 无 菌 水 的 烧杯中，获得 分 离 物。分 离 物 经形态 学鉴定 确认 为芸薹叉梗 霜霉菌 Peronospora parasitica Fr.后，直 接用于接种 或 扩繁 备用。3.2 接种体繁殖和制备 3.2.1 接种体繁殖 常 用的 繁殖 方法 为：在 温 室内 将 霜霉病 菌 的 分 离 物 接种 在 感 病 品 种 上繁殖。3.2.2 接种悬浮液制备 接种 前 用 干净毛刷刷取 叶 片上长 出的 新鲜孢子囊 于 盛 有 无 菌 水 的 烧杯中，再滴加 0.06 g/L Tween-20，高速搅拌（1200 r/min)3 min 5 min后即得孢子囊悬浮 液，用 血球计 数 板计 数 稀释至 接种浓 度。霜霉病 菌 孢子囊悬浮 液 放 置 时间 最 好 不 超 过 30 min，从 菌液 制备 到 接种 完 成 应限 制 在 2 h内。3.3 病原物保存 3.3.1 活体植株保存法 选择易感 霜霉病的大白菜 品 种，用 喷雾 接种法接种 感 病 品 种 幼苗活 体 保 存。3.3.2 离体子叶接种法 将 霜霉病 菌 接种 到易感 霜霉病的大白菜 品 种 叶 片上，4 d 5 d后取 发 病 叶，置 于 5%蔗糖 液 内 保湿，这 种方法 可 保 存 霜霉 菌 30 d，可产生 大 量 接种体。3.3.3 低温冷冻保存方法 病 叶 存 于-20 条 件下，保 存 60 d后孢子囊 仍 有致 病 力。可将 此 法 与 寄 主 活 体 保 存交替进 行。4 室内抗性鉴定 4.1 鉴定室 人 工 接种鉴定室 应 具 备人 工 调 节 温 度、湿 度 及 光 照的 条 件，使 人 工 接种 后 具 备 良 好 的 发 病 环境。4.2 鉴定设计 DB22/T 2024 2014 3 鉴定 材料随机排 列 或 顺序排 列，重 复 3次，每 一 处理 10株苗。4.3 鉴定对照材料 设 高 抗 品 种 为 抗病对照 品 种，设 当 地 易感 病 品 种 为 感 病对照 品 种。4.4 鉴定材料育苗 4.4.1 种子消毒 鉴定种 子经 5%次氯酸钠溶 液 浸 种 10 min后，清水冲洗，放 入垫 有 两 层 滤纸 的 培养 皿 中，置 于 恒 温 培养箱中 28 催芽。待 胚根 长至 0.5 cm时，播 种于 育 苗钵 内。4.4.2 育苗基质 育 苗基 质为 草 炭：蛭石：菜 田 土=2：1：1，经 134 高温 蒸汽灭 菌 30 min。4.4.3 育苗 在 日光 温 室 里 育 苗，室内 温 度为 20 25，每钵 1苗。4.5 接种 4.5.1 接种时期 大白菜 为 9 10叶期。4.5.2 接种体浓度 5 103个 孢子囊/mL。4.5.3 接种方法 采 用 喷雾 接种法。用 小 型 手持 喷雾 器，将 接种 液均 匀地 喷 于大白菜 叶 片 正、反两面欲 下 滴 为 止。4.5.4 接种后管理 将植 株 置 于 18 20 鉴定室内 黑暗保湿（RH 为 100%)24h，每日天光 照 14 h，不 再保湿。接种 后 管理 期 间 适 时 浇 水（每五天浇 一 次 水），温 度 控 制 在 20 24 范围 内。5 病情调查 5.1 调查时间 接种 后 7 d调查病情。5.2 病情级别划分 病情 级别 及 其相 对 应 的 症 状描述见 表 1。DB22/T 2024 2014 4 表 1 大白菜霜霉病病情级别划分 病情 级别 症 状描述 0 无 症 状 1 病 斑 面积占 叶 面积 的 1/10 以下 2 病 斑 面积占 叶 面积 的 1/10 1/4 3 病 斑 面积占 叶 面积 的 1/4 1/2 4 病 斑 面积占 叶 面积 的 1/2 3/4 5 病 斑 面积占 叶 面积 的 3/4，以 至干 枯 5.3 调查方法 调查接种 株 发 病情 况，根据 病 害 症 状描述，进 行 调查，记载单 株 病情 级别，计算 病情 指 数（DI）。病情 指 数 按 公 式(1)计算：100)(=S Nn sDI.(1)式中：DI 病情 指 数 s 各 病情 级别 代 表 数值；n 各 病情 级别 病 株（叶）数；N 一 调查 总株（叶）数；S 最 高 病情 级别 代 表 值。注：计算 结 果精 确到 小 数 点 后 两 位。6 抗病性评 价 6.1 抗病性评 价 标准 依 据 鉴定 材料 3次 重 复 病情 指 数（DI）的 平 均值 确 定 其 抗性 水 平，划 分 标准 见 表 2。表 2 大白菜霜霉病抗性 的 评 价 标准 病情 指 数（DI）抗性评价 DI=0 免疫（I）0 DI 10 高 抗（HR）10 DI 30 抗病（R）30 DI 50 中 抗（MR）50 DI 70 感 病（S）DI 70 高感（HS）6.2 鉴定 有效 性 判 别 DB22/T 2024 2014 5 当 感 病对照 材料 达 到 其相 应感 病 程度（DI 50），该 批 次 抗霜霉病鉴定 视 为有 效。7 鉴定 记载 表 格 大白菜霜霉病抗性鉴定 结 果 记载表格 见 表 3。表 3 大白菜霜霉病抗性鉴定 结果记载 表 病 情 级 别 编 号 品 种/种 质 名 称 来 源 重 复 区号 0 1 2 3 4 5 病情 指 数 平 均 病 指 抗性 评价 播 种 日 期 接种 日 期 接种 生育期 调查 日 期 鉴定 技 术 负责 人（签字）DB22/T 2024 2014 6 A A 附 录 A（资 料性 附录）大白菜霜霉病病原 菌的相关资 料 A.1 分 类 地 位 大白菜霜霉病病 原菌（Peronospora parasitica Fr.）属 管 毛 生物 界(Stramenopila)，卵菌门(Oomycota)，卵菌 纲（Oomycetes），霜霉 目(Peronosporales)，霜霉 科（Peronosporaceae），霜霉 属（Peronospora）。A.2 形态描述 菌 丝 体 无色，无 隔，在 丝胞 间 生 长，靠吸 器 伸 入 细胞 内 吸 水 分 和 营 养，吸 器 为 囊 状、球 状或分叉状。无 性 繁殖时，从 菌 丝 上 生 出 孢囊 梗，由 气 孔伸 出，无色，无 隔，单 生或 2 4根 束 生，长 260 m 300 m，主 枝 基 部 稍膨 大，重 复 的 两 叉分 枝，顶端 2 5次 分 枝，主 轴 和 分 枝呈锐角，顶端 的 小 梗 尖锐，弯曲，每 端 长 一个 孢子囊。孢子囊无色，单 胞，长 圆 形至 卵 圆 形，（24 27）m（15 20）m，萌 发 时 多 从 侧 面 产生 芽管，不 形 成 游动 孢子。卵 孢子 单 胞，球形，黄褐 色，直 径 30 m 40 m，表 面光 滑，胞壁厚，表 面 皱缩 或 光 滑，抗 逆 性 强，条 件适 宜 时 可 直 接 萌 生 芽管 侵染 寄 主。A.3 寄主 范围 大白菜霜霉病 菌可 以 侵染 大白菜、小 白菜、萝卜、油 菜、花椰 菜、芥 菜 等十字花科蔬 菜。A.4 病 害症状 幼苗 受 害,子 叶 正面 产生 黄绿 色斑 点,叶 背 面 有 白 色 霜 状 霉 层；成 株 期发 病,主要 为害叶 片,最 初 叶 正 面 出 现淡黄 色 或 黄绿 色 不 明显 病 斑,后扩 大 变 为 黄褐 色 病 斑,病 斑 因受 叶 脉 限 制 呈多角 形 或不 规则 形,叶 背密 生 灰 白 色 霜 状 霉 层；留 种 株 茎 部、花 梗发 病 呈肥 肿 弯曲 畸 形；种 荚 染 病表 现 黑 褐 色 坏死 斑。大白菜霜霉病 发 病 特 性 与环境 湿 度 密 切 相 关，天 气 潮 湿时，叶 背 面 产生 白 色稀 疏 的霉 层，病 斑 连 片，常 造成 大白菜 叶 片 变黄 枯 死，严重 影响 大白菜 包心。低 温 多 雨、温 度 忽 高 忽 低、昼夜 温 差 大、露 水 大 易 发生 霜霉病，而且 病 害 症 状 易 发生 变 化，为 病 害 正 确 诊断 造成 了 困难。A.5 传播途径 大白菜霜霉病 菌 主要由病 斑上长 出的 孢子囊 通过 风、雨 传 播，从 植 株 的表 皮 和 气 孔侵 入，引 起 发 病。病 菌 随 病 残 体 在 土 壤 中 或 十字花科蔬 菜 植 株 上 或 冬贮 种 株 的 根 头 上 越冬，有 时 还 可 混 在 种 子中 越夏 或 越 冬，次 年 春季 条 件适 宜 时 萌 发 侵染 幼苗，由 春 播 十字花科蔬 菜 传 到 白菜 等 秋 播 十字花科蔬 菜 上，混 在 秋 播 种 子上 的病 菌，播 后直 接 为害 幼苗。南 方 全 年 种 植 十字花科蔬 菜的 地 区，病 菌可在寄 主 上 全 年传 播 为害。A.6 大白菜霜霉病发 生 规 律 DB22/T 2024 2014 7 A.6.1 侵染循环 病 菌 主要以 卵 孢子 随 病 残 体 在 土 壤 中 越冬，或 以 休眠 菌 丝 潜伏 在 白菜 留 种 株 组织 内 越冬，也 可 以 卵 孢子 附 着 在 种 子 表 面 或 随 病 残 体 混杂 在 种 子中 越冬。来 年 春季，越冬 卵 孢子 萌 发 侵染 小 白菜、白菜、甘 蓝、薹 菜 等，以 后再 侵染 大白菜，引 起 发 病。秋季 大白菜 播 种 越早 发 病 越 重；病 毒 病 流行年份 霜霉病 也 大 发生。A.6.2 影响 病 害 发 生 发 展的主要因素 A.6.2.1 温度 菌 丝 生 长温 度为 20 24，产生 孢子囊 的适 温 为 8 12，孢子囊 萌 发 适 温 为 7 13，侵 入寄 主的 最 适 温 度为 16。孢子囊形 成、萌 发 和 侵 入 均 需 要 较 高湿 度，最 好 有 水滴 存 在。孢子囊 对 光 敏 感，不 耐 干 燥。A.6.2.2 湿 度 高湿 是 孢子囊形 成、萌 发 和 侵染 的 重 要 条 件，多 雨 时 病 害 常 严重发生，田间高湿，即 使 无 雨，病情 也 加 重。北 方大白菜 莲座 期 以 后至 包心 期，若 气 温 偏 高，或 阴 天 多 雨，日 照 不 足，多 雾，重 露，病 害 易流行。A.6.2.3 温室管理 连 作 土 中 菌量 多，发 病 发生 早而 重。基 肥 不 足、追 肥 不 及 时，植 株 生 长 不 良，抗病 力 下 降，发 病 植株 中 卵 孢子形 成 的适 温 为 10 15，适 宜 湿 度为 70 75；总 之，病 菌发育 要 求 稍 低 的 温 度 和 较 高 的 湿 度。_