人参中辛硫磷农药残留量的测定 液相色谱-质谱质谱法DB22／T 1847-2013.pdf

ICS 67.060 X 11 备案号：38347-2013 DB22 吉林省 地方标准 DB 22/T 1847 2013 人参中辛硫磷农药残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of Phoxim residues in ginseng LC-MS/MS Method 2013-07-22发布 2013-09-01实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 1847 2013 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009和 GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林农业科技学院。本标准主要起草人：张忠宝、薛晓丽、刘丽华、赵权、姚运生、武晓琳、杜立财。DB22/T 1847 2013 1 人参中辛硫磷农药残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准规定了人参中辛硫磷农药残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于鲜人参、生晒参中辛硫磷农药残留量的液相色谱-质谱/质谱测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所 注日期的 版 本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版 本（包括所有 的 修改 单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室 用 水 规 格 和 试验 方法。3 原理 试样 中残留的辛硫磷农药用 丙酮超声 提 取，经氟罗里硅土固 相 萃取柱净化，供 液相色谱-质谱/质谱 仪 测定和 确证，外 标法定量。4 试剂与材料 除另有 规定 外，所 用 试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682规定的 一级水。4.1 丙酮（C3H6O）：色谱 纯。4.2 正己烷（CH3(CH2)4CH3）：色谱 纯。4.3 二氯甲烷（CH2CL2）：色谱 纯。4.4 甲醇（CH3OH）：色谱 纯。4.5 甲酸（HCOOH）：色谱 纯。4.6 0.05%甲酸水溶 液：量 取 0.5 mL甲酸加入 1000mL容 量 瓶 中，用 超纯水 定 容至刻度。4.7 氯化钠（NaCl）：分析纯，140烘干 4h，置干燥器 中 保存。4.8 无水 硫 酸钠（Na2SO4）：分析纯,650烘干 4h，置干燥器 中 保存。4.9 中 性氧化铝（Al2O3）：层析 用，650烘干 4h,置干燥器 中 保存。使 用 前加 5%一级水活化。4.10 正己烷+二氯甲烷（1+1,V+V）：量 取 100 mL正己烷 和 100 mL二氯甲烷，混匀。4.11 辛硫磷（Phoxim,CAS NO.14816-18-3）农药标准 品：纯度大 于 等 于 98.0。4.12 辛硫磷农药标准溶液 4.12.1 辛硫磷农药标准 储备溶 液：准 确称取 10 mg辛硫磷标准 品(精 确至 0.1 mg)，置 于 10 mL棕 色容 量 瓶 中，用 甲醇 定 容至刻度。该 溶 液 在 0 4 下 避光 保存，可 使 用 6个月。4.12.2 辛硫磷农药标准 工作 溶 液：用 移 液 管 准 确 移 取 标准 贮 备溶 液，根据需 要用 甲醇 稀释、定 容，配制 标准 工作 溶 液，现 用 现配，并注 意避光。DB22/T 1847 2013 2 5 仪器设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱 仪：配 有 电喷雾离子源（ESI）。5.2 电子天平：感 量 为 0.01 g和 0.1 mg。5.3 组织捣碎机：4000-25000 r/min。5.4 涡旋 混合器。5.5 氮吹 仪。5.6 固 相 萃取柱：Florisil，500 mg，6 mL或 相 当者。5.7 有 机 相 微孔滤膜：0.22 mm。6 试样制备 6.1 鲜人参：取 不少于 200 g 样品，置 于 组织捣碎机 中 捣碎、混匀，装 入 洁 净容器，密封，于-20保存。6.2 生晒参：取 适量 样品，用 粉碎机粉碎，过 0.25 mm筛，混匀，装 入 洁 净容器，密封，于-20保存。注：在抽 样 及制 样 的 操作过程 中，应 防止 样品 受到污染或发 生残留 物含 量的 变 化。7 分析步骤 7.1 提取 7.1.1 鲜人参 称取 鲜人参 试 料 10 g（6.1）（精 确至 0.01g）于 100 mL具塞 量 筒 中，加入 30 mL丙酮（4.1），密封，涡旋 2 min。超声 提 取 15 min。将 提 取 液 抽滤 于 100 mL 具塞 量 筒 中，残 渣再 用 20 mL丙酮（4.1）冲洗 一次，合 并 滤 液并 记录 其 体积，加入 7 g氯化钠（4.7）和 7 g无水 硫 酸钠（4.8），振摇 3 min，静 置 15 min。取 记录体积 1/10量的 上清 液于 15 mL试 管 中，于 46 下用 氮气吹 至 近 干，加入 2 mL二氯甲烷（4.3）溶 解，待 净化。7.1.2 生晒参 称取 生晒参 试 料 1 g（6.2）（精 确至 0.001 g）于 25 mL具塞 量 筒 中，加入 10 mL丙酮（4.1），密封，涡旋 2 min。超声 提 取 15 min。将 提 取 液 抽滤 于 25 mL 试 管 中，残 渣再 用 5 mL丙酮（4.1）冲洗 一 次，合并 滤 液，于 46 下用 氮气吹 至 近 干，加入 2 mL二氯甲烷（4.3）溶 解，待 净化。注：在整个 提 取 过程 中，注 意避免阳光直 射。7.2 净化 在 固 相 萃取柱（5.6）中 加入 1 g中 性氧化铝（4.9），依 次 用 3 mL正己烷（4.2）和 3 mL二氯甲烷（4.3）预淋 洗，流 出液 弃去。当 液 面 到 达 中 性氧化铝 顶部时，迅速 将待 净化 液（7.1.1和 7.1.2）转 移 至固 相 萃 取柱（5.6）中，并用 6 mL正己烷+二氯甲烷（4.10）分 3次洗 涤 试 管，将洗 涤 液 倾 入固 相 萃取柱（5.6）洗 脱，收集全部 洗 脱 液 至 15 mL 试 管 中，于 46 下 氮气吹 干，用 甲醇（4.5）溶 解 残 渣 并定 容至 1.0 mL，经 0.22 mm有 机微孔滤膜（5.7）过滤 后，供 液相色谱-质谱/质谱测定。注：在整个 净化 过程 中，注 意避免阳光直 射。7.3 测定 DB22/T 1847 2013 3 7.3.1 测定条件 7.3.1.1 色谱参考条件 a)色谱 柱：C18 色谱 柱，46mm 50 mm（i.d），粒径 1.8mm或 相 当者；b)流动 相 及 流速：见表 1；c)柱 温：40。表 1 流动相及流速 7.3.1.2 质谱参考条件 参 见附 录 A。注：由于测 试 结果 取 决 于 所使 用 仪器，因此 不可 能 给出液相色谱-质谱/质谱 分析 的 通 用参 数。设 定的参 数 应 保证 色谱测定 时被 测 组 分 与 其 它 组 分 能够得 到 有 效 的 分 离，表 1和 附 录 A给出的参 数 证 明 是可 行 的。7.3.2 定性测定 按照液相色谱-质谱/质谱 条 件测定 样品 和标准 工作 溶 液，样品 的质量色谱 峰 保 留 时间与 标准 品 中对 应的 保 留 时间偏差 在 2.5%之内；且 样品 中 各 组 分 定 性 离子 的相对 丰 度 与接 近 浓 度 的标准 工作 溶 液中相 应的定 性 离子 的相对 丰 度 进行比较，偏差 不 超 过 表 2 规定的 范围，则可 判 定 样品 中 存 在 对应的 被 测 物。对 混合 标准 溶 液 及 样 液按 上 述 规定的 条 件 进行 测定 时，如果 样 液 与 混合 标准 溶 液的 选择 离子 图 中，在 相 同 保 留 时间 有 峰 出 现，则 根据 定 性 选择 离子 的 种类 及 其 丰 度 比 对 其 进行 阳 性确证。表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许 偏差 相对 离子 丰 度 50%20%-50%10%-20%10%允许 的相对 偏差 20%25%30%50%7.3.3 定量测定 根据 试样 中 被 测 样 液中 目 标 物 的 含 量 情况，选 取 响 应 值 相 近 的标准 工作 液 进行 分析，对于 高浓 度样 品 须 适 当 进行系 列 稀释。标准 工作 液和 样 液中 待 测 物 的 响 应 值 均 应 在 仪器 线 性 响 应 范围内，外 标法定量。标准 溶 液的色谱 图 参 见附 录 D。7.4 空白 试 验 除 不 称取试 料 外，均 按 上 述步骤同步进行。8 结果计算和 表 述 步骤 时间/（min）流速/（ml/min）甲醇/（%）0.05%甲酸水/（%）1 0.01 200 30.0 70.0 2 1.0 200 30.0 70.0 3 1.01 200 95.0 5.0 4 15.0 200 95.0 5.0 5 20.0 200 30.0 70.0 6 30.0 200 30.0 70.0 DB22/T 1847 2013 4 用色谱 数 据 处理 机或 按 式(1)计算 试样 中农药残留量：10001000=m AV C AXs.(1)式 中：X 试样 中辛硫磷农药的残留量，单位 为 微 克每克（mg/g）；A 样 液中辛硫磷农药 峰面 积（或 峰高）；As 标准 工作 液中辛硫磷农药的 峰面 积（或 峰高）；C 标准 工作 液中辛硫磷农药的 浓 度，单位 为 微 克每 毫升（mg/mL）；V 样 液 最 终 定 容 体积，单位 为 毫升(mL)；m 最 终 样 液 所 代 表 的 试样 质量，单位 为 克(g)。注：计算结果表述 至 小 数 点 后 2位，计算结果 应 扣 除 空白 值。9 线 性范围、方法定量 限和回收率 9.1 线 性范围 见附 录 B中 表 B.1。9.2 方法定量 限和回收率：见附 录 C中 表 C.1。DB22/T 1847 2013 5 A A 附 录 A（资 料性 附录）液相色谱-质谱/质谱条件 A.1 液相色谱-质谱/质谱条件 A.1.1 扫描 方 式：正 离子 扫描，多反 应 监 测 MRM；A.1.2 离子源 温 度（TEM）：450；A.1.3 电离 方 式：电喷雾 ESI；A.1.4 离子源喷雾电 压：5000.00 V；A.1.5 雾 化 气 压力（GS1）：0.2068 MPa；A.1.6 气 帘 气 压力（CUR）：0.3448 MPa；A.1.7 辅助 加 热 气（GS2）：55.00 L/min；A.1.8 碰撞 气(CAD)压力：0.0344 MPa；A.1.9 定 性 离子 对、定量 离子 对、去 簇 电 压、碰撞 能 量、碰撞 室 出口 电 压 见表 A.1 表 A.1 选择 监测离子(m/z)、碰撞气能 量及 去簇电压 参 数 农药中文 名 农药 英 文 名 保 留 时间 定量 离子 定 性 离子 去 簇 电 压 DP 碰撞 气 能 量 CE 辛硫磷 Phoxim 17.74 299.1/129.1 299.1/97.0 20.0 18.0;35.0 DB22/T 1847 2013 6 B B 附 录 B（资 料性 附录）辛硫磷农药 线 性方 程、相 关系数 B.1 辛硫磷农药 线 性方 程、相 关系数 表 B.1 辛硫磷农药 线 性方 程、相 关系数 农药 名 称 定量 离子（m/z）线 性 方 程 相 关 系数（r）辛硫磷 299.1/129.1 Y=1.474e+006X-1.2758e+004 0.9999 _ DB22/T 1847 2013 7 C C 附 录 C（资 料性 附录）方法定量 限、添加浓 度范围及 回收率 C.1 方法定量 限、添加浓 度范围及 回收率 表 C.1 方法定量 限、添加浓 度范围及 回收率 农药 种类 样品 添 加水 平（mg/kg）平 均 回 收 率（%）方法定量 限（mg/kg）0.01 80.10%0.010 0.02 86.25%0.010 鲜人参 0.20 90.40%0.010 0.01 81.65%0.010 0.02 85.55%0.010 辛硫磷 生晒参 0.20 89.07%0.010 DB22/T 1847 2013 8 D D 附 录 D（资 料性 附录）辛硫磷液相色谱 串联 质谱 多反应检 测（MRM）色谱 图 D.1 辛硫磷液相色谱 串联 质谱 多反应检 测（MRM）色谱 图 图 D.1 辛硫磷标准 品（0.01 mg/kg）液相色谱 串联 质谱 检 测（MRM）色谱 图 _