人参食品中人参总皂苷的测定 分光光度法DB22／T 1668-2012.pdf

ICS 67.050 X 04 备案号：35802-2013 DB22 吉林省 地方标准 DB 22/T 1668 2012 人参食品中人参总皂苷的测定 分光光度法 Determination of total ginseng saponin component in Ginseng foods Spectrophotometric method 2012-12-17发布 2013-01-01实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 1668 2012 I 前 言 本标准按照 GB/T1.1-2009和 GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省卫生厅提出并归口。本标准起草单位：吉林省卫生监测检验中心。本标准起草人：李青、范明、刘思洁、石矛、张博、郭金芝。DB22/T 1668 2012 1 人参食品中人参总皂苷的测定 分光光度法 1 范围 本标准规定了人参食品中人参总皂苷含量的分光光度测定方法。本标准适用于人参食品中人参总皂苷的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修 改 单）适用于本文件。GB/T 6682 分 析实 验 室 用 水 规 格 和 试 验方法 3 原理 试料 中的人参总皂苷 经溶剂 提 取，层析柱净化 和 富集，在酸性条 件下人参皂苷 与香 草 醛发 生 显色反 应，用分光光度法 比色 定量。4 试剂与材料 除另 有规定 外，所用 试剂均为 分 析纯，实 验用 水符合 GB/T 6682规定的 三级水要求。4.1 甲醇（CH3OH）。4.2 无水乙醇（CH3CH2OH）。4.3 高氯酸（HClO4）。4.4 冰醋酸（CH3COOH）。4.5 70%乙醇溶液：取 70 mL无水乙醇加水 定 容至 100 mL。4.6 大孔吸附树脂。4.7 中 性氧化铝:层析 用 粒径为 148 m-200 m。4.8 人参皂苷 Re标准品（C48H82O18，CAS号：257-814-6）：纯 度 98%。4.9 标准 储备液：准 确称取 人参皂苷 Re标准品（4.8）10mg，精确到 0.00001g，配成 1 mg/mL标准 储备液，置 4 冰箱保存 6个月。4.10 标准 工作液：取 标准 储备液溶液 0 L、20 L、40 L、60 L、80 L、100 L(相当 于 0 g、20 g、40 g、60 g、80 g、100 g)分 别置 于 10 mL比色管 中，在 60 水浴上挥干，备 用。4.11 香 草 醛溶液：取 0.5 g香 草 醛（C8H8O3）加冰醋酸溶解 并定 容至 100 mL。5 仪器 5.1 分光光度 计。5.2 分 析天平：感 量 为 0.00001 g。DB22/T 1668 2012 2 5.3 高 速 分 散器。5.4 离 心 机：转速 5000r/min。5.5 超声波 提 取 仪：28 kHz。5.6 层析柱：装载 8 mL柱容 积 的 大孔吸附树脂（4.6）和 1cm 中 性氧化铝，最 佳承载 量 约 为 50 g 100 g。5.7 恒温 水浴箱。6 分析步骤 6.1 提取 6.1.1 固体试料 6.1.1.1 水溶性试料 称取 混 合均 匀 试料（根据 试料 含人参皂苷量 确 定 取 样 量），精确到 0.001 g，加水溶解，并定 容至 250 mL。6.1.1.2 非水溶性试料 6.1.1.2.1 普通固体试料 取 500 g试料，粉粹 并 过 740 m孔 筛，充 分 混匀，称取试料（根据 试料 含人参皂苷量 确 定 取 样 量），精确到 0.001 g，置 于 50mL离 心 管 中，分 别加水溶液 30ml4次 40 mL、40 mL、20 mL，分 别在高 速 分 散器 上（10000 r/min）匀质 2 min，再以 5000 r/min离 心 5 min；上 清 液 依次转移 至 250mL容 量 瓶 中，加 水至 刻 度 备 用。6.1.1.2.2 糖份含量高试料 取 500 g样 品，切碎后充 分 混匀，称取试料（根据 试料 含人参皂苷量 确 定 取 样 量），精确到 0.001 g，置 于 50 mL离 心 管 中，分 别加水溶液 40 mL、40 mL、20 mL，分 别在高 速 分 散器 上（10000 r/min）匀质 2 min，再以 5000 r/min离 心 5 min；上 清 液 依次转移 至 250 mL容 量 瓶 中，加水至 刻 度，取 10mL提 取液 于 125 mL的分 液 漏斗 中，加水 饱 和的 正丁 醇溶液 萃 取 3次，每次 10 mL，合 并 正丁 醇层，在 沸 水浴上挥干，水溶 解 并定 容至 10 mL，备 用。6.1.1.2.3 油脂含量高试料 取 500 g样 品，切碎后充 分 混匀，称取试料（根据 试料 含人参皂苷量 确 定 取 样 量），精确到 0.001 g，置 于 250 mL具塞 三 角烧瓶 中，分 别加 入 100 mL、50 mL和 50 mL石 油醚，在 超声波 提 取 仪 中分 别 提 取 10min，弃去 石 油醚，残渣 挥 去 石 油醚后转移 至 50 mL离 心 管 中，分 别加水溶液 40mL、40 mL、20 mL，分 别在高速 分 散器 上（10000 r/min）匀质 2min，再以 5000 r/min离 心 5min；上 清 液 依次转移 至 250 mL容 量 瓶 中，加水至 刻 度 备 用。6.1.2 液体试料 6.1.2.1 含乙醇类的液体试料 准 确吸取 一 定 体积 的 试料（根据 试料 含人参皂苷量 确 定 取 样 量），于 蒸 发 皿 中 沸 水浴挥干，用 水浴 溶解 残渣，转移 至 250 mL容 量 瓶 中，加水至 刻 度 备 用。DB22/T 1668 2012 3 6.1.2.2 非乙醇类的液体试料 准 确吸取 一 定 体积 的 试料（根据 试料 含人参皂苷量 确 定 取 样 量），于 250 mL容 量 瓶 中，加水至 刻 度 备 用。6.2 净化 用 15 mL层析管，内装 8 mL 大孔吸附树脂,加上 1cm中 性氧化铝。先 用 25 mL70%乙醇 洗 柱，弃去洗脱液，再 用 25 mL水 洗 柱，弃去洗脱 液，精确加 入 1.0 mL已处理好 的 试料溶液，用 25 mL水 洗 柱，弃去淋洗 液，用 25 mL70%乙醇 洗脱 人参皂苷，收 集 洗脱 液 于 10 mL比色管 中，置 于 60 氮吹仪 上 吹 干，备 用。6.3 标准工作曲线绘制 向 标准 工作液 中（4.10）准 确加 入 香 草 醛溶液 0.2 mL，混匀，使残渣 溶解，再 加 0.8 mL高氯酸，混匀，60水浴上加 热 10 min，取 出，冰浴 冷却后，加 入 冰乙酸 定 容至 5.0 mL，摇匀后，以 1 cm比色 皿 于 560 nm波长处进行 比色，得 出 吸 光度 值，以浓 度 为 横坐 标，以 吸 光度 值 为 纵坐 标，绘制 标准 曲线。6.4 测定 在上 述（6.2）试料管 中，从“准 确加 入 香 草 醛溶液 0.2 mL，混匀，（6.3）”起 依 法 操 作，由标准 曲线 计 算 出 待 测 样 液 中人参皂苷的含量。6.5 空白试验 除 不 加试料外，按 6.16.4操 作 步骤 进行 测定。7 结果计算%1001000 100021=V mV AX.(1)式 中：X 试料 中人参皂 甙 含量，单位 为 克 每 100克（g/100 g 或 g/100 mL）；A 从 标准 曲线 上计 算 出测定 液 人参皂苷的 质 量，单位 为 微克（g）；V1 试料 制 备 的总 体积，单位 为 毫升（mL）；V2 测定用 试料 制 备液 体积，单位 为 毫升（mL）；m 试料 质 量 或 试料 体积，单位 为 克或毫升（g或 mL）。计 算结果 保 留两 位有 效数字。8 精密度 8.1 重复 性 在 重复 性条 件下，获 得 的 两 次 独立 测定 结果 的 绝 对 差 值 不 得超过 算术 平均 值 的 10%。8.2 再现 性 在 再 现 性条 件下，获 得 的 两 次 独立 测定 结果 的 绝 对 差 值 不 得超过 算术 平均 值 的 10%。DB22/T 1668 2012 4 9 线性范围 和检出限 本方法的 线 性 范 围 为 0 g 100.0 g，检出 限 为 0.0075 g/100 g或 0.0075 g/100 mL。_