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ICS 67.080.20 B 31 DB14 山西省地方标准 DB 14/T 17742019 斜面菌种 培育桑蚕 蛹虫草技 术规程 2019-06-25 发布 2019-08-25 实施 山西省市场监督管理局 发布 DB14/T 17742019 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性 引用 文件.1 3 术语和 定义.1 4 设施和 用 具.1 5 人员要 求.2 6 菌液制 备.2 7 蚕蛹选 择与 准备.2 8 蚕蛹接 种.2 9 接种后 管理.2 10 采收.3 11 烘干和 包装.3 DB14/T 17742019 II 前 言 本标准 按照GB/T 1.1-2009 给出的 规则 起草。本标准 由山 西省 农业 农村 厅提出 并监 督实 施。本标准 由山 西省 农业 标准 化技术 委员 会归 口。本标准 起草 单位：山 西省 蚕业科 学研 究院。本标准 主要 起草 人：卢建珍、韩红 发、王玉珏、王建伟、刘有志、韩淑 鸿、张超虹、杜利 梅、黄凡哲、沈 琦、李淑 芳、景雅 兰、靳 月琴、韩 敏、张娟、毛铃 哲。DB14/T 17742019 1 斜 面菌种 培育桑蚕 蛹虫草 技术规程 1 范围 本标准 规定 了斜 面菌 种培 育桑蚕 蛹虫 草培 育技 术的 设施和 用具、人员 要求、菌液制 备、蚕 蛹选 择与准备、蚕蛹 接种、接 种后 管理、采收、烘 干和 分级 包装。本标准 适用 于斜面菌 种 培 育桑蚕 人工 蛹虫 草。2 规范性 引用 文件 下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的。凡 是注 日 期的引 用文 件，仅注 日期 的 版本适 用于 本文 件。凡是不 注日 期的 引用 文件，其最 新版 本（包括 所有 的修改 单）适用 于本 文件。GB/T 12728 食用菌 术语 NY/T 528 食用 菌菌 种生 产技术 规程 NY/T 5010 无公害 农产 品 种植 业产 地环 境条 件 NY/T 2798.5 无公 害农 产品 生产质 量安 全控 制技 术规范 第5部分：食用 菌 中华人 民共 和国 食品 安全 法 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 桑蚕蛹 虫草 桑蚕蛹 虫草 是蛹 虫草 中的 一种，是人 工将 虫草 菌种 接种到 鲜活 桑蚕 蛹体 内培 育而成。4 设施和 用具 4.1 设施 应选择 生 态环境 良好、无污染的 生产 区域，培 养设 施干净、整 洁、无杂 菌污 染。桑蚕蛹 虫草 的设 施及洁净 程度 应符 合NY/T 5010和NY/T 2798.5的规定。4.2 接种针 蚕蛹接 种针 使用 注射 量程 为5L 10 L 的尖 头微 量移液器。4.3 培养器 具 接种后 存放 蚕蛹 及后 期进 行菌丝 培育 和子 实体 培养 的器具。DB14/T 17742019 2 5 人员要 求 5.1 接种前 工作 人员 应经 过 专 业技术 培训。5.2 工作人 员应配备 专用、提 前消毒 的工 作服。5.3 接种前，工作人 员应 用酒 精消毒 双手，佩 戴口 罩。6 菌液制 备 6.1 菌种 选用抗逆性 强、出草 快的 优良菌 株。6.2 PDA 培养基 制备 取去掉 外皮 的小 块 土豆200 g，加 水煮 25 min，过 滤后 取澄清 液加 水至1 000 mL，依次放 入琼 脂20 g、磷酸二 氢钾2 g、硫 酸镁1 g、葡 萄糖20 g、蛋 白胨3 g、VB10.05 g、柠檬 酸三 铵1 g，充分 搅拌，溶 化后装入1.8 cm 18 cm 试管，装管 量约1/5 1/4（10 mL）处，加 盖棉 塞，高压121 灭菌30 min，趁 培养基还是 液体 状态 时，摆成 斜面凝 固后 制成 斜面 培养 基，用 于菌 种活 化和 母种 扩繁。6.3 菌种活 化和 扩繁 母种在 无菌条 件下 接入斜 面培养 基，在23 恒温 培 养箱中 避光培 养，待菌丝 布满整 个培养 基表 面后给以 散射 光光 照，直至 菌丝呈 现淡 黄色，保 存备 用。6.4 菌种液 制作 无菌条 件下，用无 菌铲刮 下经扩 繁后的1支试 管菌种 斜面上 的菌苔，放 入研磨 钵内，加无菌 生理 水或无菌 水10 mL 均匀 研磨，直至研 磨钵 内菌 丝分 布均 匀，液 体混 浊，制备 成菌 悬液。7 蚕蛹选 择与 准备 7.1 选择25 保护，上 簇后7 d 左右、大小 均匀 的健 康桑蚕蛹。7.2 接种前 用75%的 食用 酒精 均匀喷 洒蛹 体，保持 蛹体 体表湿 润，均匀 消毒 后，用无菌 水清 洗蛹体，在超净 工作 台内 晾干。8 蚕蛹接 种 无菌条 件下用10L 微量 移液器吸 取6L 7L 接种 液，在 蛹腹面 倒数 第二腹 节间膜 处，用 尖头 微量移液 器平 行扎 入蛹 体注 射，针头 旋转 拔出，接 种 后的蚕 蛹消 毒后 单层 摆放 平铺于 培养 器中，封口 膜 封口，送 入培 养室。9 接种后 管理 9.1 发菌培 养期 9.1.1 温度 DB14/T 17742019 3 前期温 度18，蛹 体变 硬 出现白 色绒 毛状 菌丝 时室 温保持22 23 继续 培养1 2 d。9.1.2 湿度 室内湿 度保持 在65%70%左右。9.1.3 光线 保持黑 暗，蚕蛹 感染 菌液7 10 d 后硬 化，13 d 左右 在蚕蛹 体侧 气门 处出 现白 色菌丝。9.2 转色培 养期 每天感光12 h左右，白 天 自然光，阴 天或 傍晚 补充 日光灯 照射，光 照强 度100 lex 200 lex，晚上保持黑 暗；白天室 内温 度保持在21 23，夜晚15 16；室内 相对湿度75%；3 d后菌丝 变成淡黄色，7 10 d后，蛹 体 表面菌 丝体 变成 桔黄 色，并且菌 蕾原 基显 现。9.3 出草管 理期 9.3.1 温度 温度控 制在20 23。9.3.2 湿度 室内相 对湿 度80%85%。9.3.3 光照 光照时 间12 h/d，光 照强 度200lex。子实 体形 成后 及时调 整培 养瓶 与光 的方 向。9.3.4 氧气 封口膜 上扎 孔给 子实 体补 充氧气,培养10 d左右子 实体 达到3 cm，每 天开 窗换 气2次，每 次30 min。10 采收 子实体 培养 至40 d 左右，长至5 cm 8 cm，子实 体头 部 膨大，表面 有许 多黄 色粉 状的子 囊孢 子出 现，颜色呈 桔黄 色时 培养 成熟，连同 蚕蛹 一起 取出，保 留子实 体形 状完 好无 损。11 烘干和 包装 采收后避免阳 光直射，在通 风阴凉处自 然晾干，或用40 以下 低温烘 干至蛹虫 草的含水量 在10%以下即可 包装。_
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