冬虫夏草中虫草酸的测定 液相色谱法DB54／T 0317-2024.pdf

ICS：67.050CCS：B 04 54西藏自治区地方标准DB 54/T 03172024冬虫夏草中虫草酸的测定 液相色谱法 2024-04-08发布 2024-05-08实施西藏自治区市场监督管理局 发 布DB54/T 03172024I目 次前言.II1范围.12原理.13试剂和材料.14仪器和设备.15试样的制备和保存.26分析步骤.27结果计算.28精密度.39检出限和定量限.3附录 A虫草酸液相色谱图.4DB54/T 03172024II前言本文件按照GB/T 1.1-2020规则起草。本文件由拉萨海关技术中心提出。本文件由西藏自治区市场监督管理局归口。本文件起草单位：拉萨海关技术中心、西藏自治区农牧科学院农业质量标准与检测研究所、西藏自治区标准化研究所、福州海关技术中心、广州海关技术中心。本文件主要起草人：王君、曹晓钢、王晓龙、王顺芝、魏娜、李继荣、扎西央宗、赵春艳、李二鹏、文艺、唐庆强、刘青、魏霜、席静。DB54/T 031720241冬虫夏草中虫草酸的测定 液相色谱法1范围本文件规定了冬虫夏草中虫草酸的测定方法。2原理样品经水浸泡、超声提取，采用液相色谱分离、示差检测器检测，外标法定量。3试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为色谱纯，水为GB/T 6682规定的一级水。3.1试剂乙腈（C2H3N）：色谱纯。3.2标准品虫草酸(C7H12O6，CAS:69-65-8)：纯度99.0%。3.3标准溶液配制3.3.1准确称取 1.0 g虫草酸标准品于 100 mL容量瓶，用纯水定容到刻度，配制成 10000.0 mg/L 的标准储备液，4 避光冷藏。3.3.2用流动相将标准储备液稀释成 0、200.0、500.0、1000.0、2000.0、5000.0 mg/L的标准工作溶液，4避光冷藏。3.4材料3.4.1水相微孔滤膜：0.22 m。3.4.2塑料离心管：50 mL。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪，带有示差检测器。4.2超纯水仪系统。4.3天平：感量为 0.1 mg及 0.01g。4.4离心机：转速4000 r/min。4.5超声波清洗仪。DB54/T 0317202425试样的制备和保存冬虫夏草样品去除泥沙至无肉眼可见外来杂物，自然风干，水分10 g/100g。研磨成粉末，60 目筛子过筛，混匀，常温保存。6分析步骤6.1样品处理称取粉碎混匀后的试样 0.70 g，于 50 mL 塑料离心管中，加水约 15 ml，混匀后室温浸泡 15 h（或放置过夜），涡旋混匀后超声 30 min，于 4000 r/min离心 5 min，将水相转移至 50 mL容量瓶中，再重复超声步骤 2 次，将水相转移到同一 50 mL 容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀。取适量上清液过0.22 m 滤膜，待液相色谱测定。6.2色谱条件色谱柱：糖类分离色谱柱，250 mm4.6 mm，5 m。或其他具有同等分析效果的色谱柱。柱温：30。流动相：乙腈超纯水=7525（V:V）。流速：1.0 ml/min。进样量：10 L。示差折光检测器池温度：35。6.3测定待系统稳定后，按上述色谱条件依次进样。用虫草酸标准系列溶液进样后，以标液浓度对峰面积作标准曲线。将待测样品液进样，根据标准品的保留时间定性样品中虫草酸的色谱峰。根据样品的峰面积，以外标法计算样品中虫草酸的含量。6.4空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行。7结果计算样品中虫草酸的含量计算按式(1)计算，计算结果需扣除空白值：(1)式(1)中：x 样品中虫草酸的含量，单位为%；c 从标准曲线中求得样品溶液中虫草酸的含量，单位为毫克每升（mg/L）；c0 空白溶液中虫草酸的含量，单位为毫克每升（mg/L）；v 样液定容体积，单位为毫升（ml）；10000）（0 mv c cxDB54/T 031720243m 冬虫夏草的质量，单位为克（g）；10000 单位由 mg/kg 转换为%的换算因子。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。8精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。9检出限和定量限 虫草酸的方法检出限为1.5 mg/kg，定量限为4.5 mg/kg。DB54/T 031720244附 录 A（资料性）虫草酸液相色谱图500mg/L虫草酸标准溶液液相色谱图见图A.1 图A.1 500mg/L虫草酸标准溶液液相色谱图0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 min-2.50.02.55.07.510.012.515.017.520.022.525.0mV虫草酸