拉萨裂腹鱼DB54／T 0329-2024.pdf

ICS 65.150CCS B 5254西 藏 自 治 区 地 方 标 准DB54/T 03292024 拉萨裂腹鱼 2024-04-09发布 2024-05-09实施西藏自治区市场监督管理局发 布DB54/T 03292024I目 次前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 术语和定义.14 主要形态结构特征.14.1 外部形态特征.14.2 内部结构特征.35 生长与繁殖.35.1 生长.35.2 繁殖.46 遗传学特性.56.1 细胞遗传学特性.56.2 生化遗传学特性.57 检测方法.67.1 抽样.67.2 性状鉴定.67.3 年龄测定.67.4 染色体检测.67.5 血清乳酸脱氢酶（LDH）.68 检验规则与结果判定.7附录A（资料性）生长方程、体长与体重关系式.8A.1 体长和体重生长方程.8A.2 体长与体重关系式.8附录B（规范性）同工酶各种试剂的配置.9B.1 凝胶的制备.9B.2 加样指示剂.9B.3 电极缓冲液.9B.4 染色液的配制.10DB54/T 03292024II前 言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由西藏自治区农业农村厅提出。本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会归口。本文件起草单位：华中农业大学、中国水产科学研究院长江水产研究所、西藏自治区畜牧总站、四川律贝生物技术有限公司。本文件的主要起草人：覃剑晖、林少卿、霍斌、马宝珊、党发发、谢从新、周贤君、邵俭、尼玛群宗、拉巴次仁、央珍、边巴卓玛、格桑达瓦、杨君辉、程方方、次仁卓嘎、尼玛次仁、苏中华、马娇林、袁齐涛、孙锋博、于航、乐地、郭荣明、王润锦、吴海彬、石彬、邹雨婷、孙建春、张鑫崴、胡程鹏。DB54/T 032920241拉萨裂腹鱼1范围本文件给出了拉萨裂腹鱼（Schizothorax waltoni）的主要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特性、检测方法和检验规则。本文件适用于拉萨裂腹鱼的种质检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 18654.1 养殖鱼类种质检验 第1部分：检验规则GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分：抽样方法GB/T 18654.3 养殖鱼类种质检验 第3部分：性状测定GB/T 18654.4 养殖鱼类种质检验 第4部分：年龄与生长的测定GB/T 18654.6 养殖鱼类种质检验 第6部分：繁殖性能的测定GB/T 18654.12 养殖鱼类种质检验 第12部分：染色体组型分析GB/T 18654.13 养殖鱼类种质检验 第13部分：同工酶电泳分析3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1学名拉萨裂腹鱼（Schizothorax waltoni）。3.2地方名尖嘴鱼。3.3分类位置硬骨鱼纲（Osteichthyes），鲤形目（Cypriniformes），鲤科（Cyprinidae），裂腹鱼亚科（Schizothoracinae），裂腹鱼属（Schizothorax）。4主要形态结构特征4.1外部形态特征4.1.1外形DB54/T 032920242拉萨裂腹鱼体修长，稍侧扁。头长，吻较尖，口下位，马蹄形。唇发达，下唇分左、右两叶，部分个体具有细小的中间叶，唇后沟连续。须2对，后须稍长，末端达眼后缘下方。体被不规则细鳞，身体前部腹侧的鳞片细小，后部鳞片较大，胸部自鳃峡以后具有明显的鳞片。背部黄褐色，腹部浅黄色，体侧有许多不规则黑色斑点，胸鳍、腹鳍和尾鳍淡红色，背鳍浅灰色。背鳍最后一根不分枝鳍条坚硬，其后侧缘锯齿发达，背鳍基部起点到吻端的距离大于到尾鳍基部的距离；腹鳍基部起点位于背鳍基部起点之前的下方。下咽骨狭窄，呈弧形。拉萨裂腹鱼的外形见图1。图1拉萨裂腹鱼外形图4.1.2可数性状4.1.2.1背鳍鳍式D.iii，78。4.1.2.2臀鳍鳍式A.iii，5。4.1.2.3鳞式 9231332326v1014.1.2.4第一鳃弓鳃耙数外侧鳃耙数1722，内侧鳃耙数2232。4.1.3比例性状体长155mm450mm个体的比例性状变动范围见表1。表1拉萨裂腹鱼比例性状比例性状 数值 比例性状 数值体长/体高 5.5（4.36.9）头长/吻长 2.5（2.32.9）体长/头长 4.1（3.24.5）头长/眼径 7.6（5.49.2）体长/尾柄长 5.5（5.24.6）头长/眼间距 3.4（2.93.8）DB54/T 032920243体长/尾柄高 8.2（7.69.4）尾柄长/尾柄高 1.7（1.52.0）4.2内部结构特征4.2.1鳔鳔2室，后室较细长，为前室的2.3倍3.2倍。4.2.2下咽齿下咽齿3行，235/532。下咽齿细圆，顶端尖，略钩曲，咀嚼面凹入。4.2.3脊椎骨脊椎骨总数47枚。4.2.4腹膜腹膜为黑色。5生长与繁殖5.1生长雌鱼最大年龄 40龄，雄鱼最大年龄 37龄。依据 768尾样本估算的各年龄组的体长和体重实测值见表 2。表2 拉萨裂腹鱼主要年龄组的体长和体重实测值雌鱼 雄鱼龄组龄 体长(平均 S.D)mm体重(平均 S.D.)g体长(平均 S.D.)mm体重(平均 S.D)g4 151 46.0 186.015.6 86.028.55 200.124.4 105.540.8 205.713.9 112.225.16 228.536.2 153.559.9 243.224.7 183.451.37 261.030.2 229.581.8 275.933.9 257.482.98 300.335.5 339.7130.1 295.927.9 322.8102.09 337.748.6 514.5299.9 319.128.4 409.5120.110 361.233.1 618.9198.9 339.330.2 491.4144.311 411.843.4 876.6295.4 358.234.3 663.9149.512 412.640.6 904.7282.2 373.027.4 688.3218.513 432.138.4 1043.7299.5 377.237.7 807.7241.314 457.031.4 1455.6525.5 398.833.8 902.1219.515 482.947.3 1451.0352.1 411.028.1 836.2208.116 501.649.0 1532.5423.8 393.159.0 829.6390.817 479.841.8 1458.0416.4 418.738.0 922.2310.9DB54/T 03292024418 517.030.1 1681.1356.3 427.228.9 943.1262.519 503.554.1 1699.0481.2 442.729.7 1200.744.420 514.332.2 1606.6437.1 436.051.6 1098.1311.121 536.028.2 1967.5450.7 441.046.7 807.4340.122 505.162.5 1708.2588.5 447.037.6 1069.1257.923 512.747.2 1570.6340.6 468 1213.424 519.854.2 1692.9491.4 448.823.7 1083.3165.725 520.344.6 1765.7443.126 522 1603.5 419.734.8 928.0309.827 560 1792.7 439 1117.728 487 1308.229 514.345.9 1681.0564.330 504.529.0 1597.8285.4 430 929.531 490 1301.032 420.021.2 889.382.333 642 3788.1 470 1096.234 566.042.4 2120.7805.7 476 1437.935 383 736.336 504 1706.4 456.520.5 1283.411.037 636 3038.3 458 1235.738 595 2824.539 584 2722.940 553 2390.3生长方程和体长与体重关系式参见附录 A。5.2繁殖5.2.1成熟年龄雌鱼为13龄；雄鱼10龄。5.2.2产卵类型性腺一年成熟一次，一次性产卵。5.2.3繁殖期3月4月，3月为繁殖高峰期。5.2.4怀卵量依据 60尾样本估算的各年龄组怀卵量见表 3。表3拉萨裂腹鱼不同年龄组怀卵量DB54/T 032920245年龄龄体重范围g怀卵量（均值标准差）粒相对怀卵量（均值标准差）粒/克10 1643.5 13800112 1213.8-1473.8 12733.93059.4 10.70.913 1083.7-2177.9 17696.49211.4 12.05.414 1248.1-1896.9 19296.914943.9 12.77.015 1171.4-2250.7 18094.910910.8 12.74.716 1057.7-2668.3 18345.48228.9 12.62.817 1121.2-2461.3 20733.711144.2 13.55.418 1727.6-2183.4 23898.612618.0 14.16.419 2198.5 31145 16.320 1460-2398.6 21735.05317.3 12.90.321 1308.2-2739.9 18722.57745.7 11.21.922 1420.2-2730.6 25377.215248.6 13.25.123 1415.6-2267.7 26376.79022.9 16.12.924 2182.7 22200 11.325 1428.8-2303.4 21503.913414.5 12.63.827 1792.7 21738 13.929 1657.9-2480.7 19030.110789.5 11.82.730 1799.8-1395.7 19880.31846.6 14.74.238 2824.5 33913 14.039 2722.9 34766 16.06遗传学特性6.1细胞遗传学特性染色体数 2n=92。核型公式：26m+28sm+22st+16t；臂数（NF）：146。染色体核型见图 2。图2拉萨裂腹鱼染色体核型图DB54/T 0329202466.2生化遗传学特性拉萨裂腹鱼血清乳酸脱氢酶（LDH）酶带扫描图见图 3。图3拉萨裂腹鱼血清乳酸脱氢酶（LDH）酶带扫描图7检测方法7.1抽样按GB/T 18654.2的规定执行。7.2性状鉴定按按GB/T 18654.3的规定执行。7.3年龄测定采用耳石鉴定年龄。方法按GB/T 18654.4的规定执行。7.4染色体检测按GB/T 18654.12的规定执行。7.5血清乳酸脱氢酶（LDH）7.5.1试剂及配置方法同工酶各种试剂的配制见附录A。7.5.2样品的采集与制备血清血清制备，从尾静脉抽取2ml血，于4、1000r/min离心6min，取上清备用。7.5.3制胶先将混匀的6.5%分离胶液倒入模板约3/4高度，小心在上面注入双蒸水，置于36左右30min。待凝胶聚合好以后，倒掉上面的水，将混匀的3.0%浓缩胶倒入模板，插好梳子，置于36左右30min，待凝胶聚合好以后，置于冰箱中备用。7.5.4点样DB54/T 032920247点样量为20L。吸取20L样与2L3L加样指示剂混匀，一起加到样孔中。7.5.5电泳分离1)采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳。分离胶浓度 6.5%，浓缩胶浓度 3.0%。2)电极缓冲液：pH 为 8.3的 Tris甘氨酸。3)电泳：稳压 280 V（起始电流约 1824mA）电泳 0.5h 后，将电压调到 220v，继续电泳 5 h6h（溴酚蓝跑出胶后 2h以上）。4)染色:电泳结束后，放入预先配好并在 37恒温箱中保温的同工酶染色液中染色。8检验规则与结果判定按GB/T 18654.1的规定执行。DB54/T 032920248A A 附 录 A（资料性）生长方程、体长与体重关系式A.1体长和体重生长方程雌性和雄性群体的体长和体重生长方程分别见式(A.)、(A.2)、(A.3)和(A.4)：雌鱼：Lt=644.3 1 exp 0.084(t 0.247)（A.1）Wt=3291.9 1 exp 0.084(t 0.247)2.984（A.2）雄鱼：Lt=586.2 1 exp 0.084(t+2.250)（A.3）Wt=2477.9 1 exp 0.084(t+2.250)2.999（A.4）式中：Ltt 龄时鱼体体长，mm；Wtt龄时鱼体体重，g；t鱼的年龄。A.2体长与体重关系式雌性和雄性群体的体长与体重关系式见（A.5）和（A.6）：雌性：W=1.365 105 SL 2.984（A.5）雄性：W=1.238 105SL 2.999（A.6）式中：W鱼体体重，g；L鱼体体长，mm。DB54/T 032920249B B 附 录 B（规范性）同工酶各种试剂的配置B.1凝胶的制备B.1.1凝胶制备溶液配置各种凝胶制备溶液的配方及配制方法见表 B.1。表B.1 各种凝胶制备溶液配方溶 液 配 制 方 法凝胶缓冲液取 Tris 56.75g 加 200mL 蒸馏水，用浓盐酸调 pH 为 8.9，加蒸馏水到 250mL。4贮存。凝胶储液取丙烯酰胺 33.3g，N，N 亚甲基双丙烯酰胺 0.9g，四甲基乙二胺（TEMED）338L溶于蒸馏水中定容到 150mL。4贮存。AP 取过硫酸铵 1.5mg溶解到 100mL蒸馏水水中。4贮存。B.1.2分离胶和浓缩胶的制备用6.5%分离胶和3.0%浓缩胶制成聚丙烯酰胺垂直板凝胶，该凝胶液配方见表B.2。表B.2 凝胶制备配方6.5%分离胶 3.0浓缩胶凝胶缓冲液,mL 1.5 凝胶缓冲液，mL 0.5凝胶储液，mL 7.3 凝胶储液，mL 1.2AP,mL 1.5 AP,mL 0.5TEMED，L TEMED,L 4.0纯水，mL 14.7 纯水，mL 6.8总体积，mL 25 总体积，mL 9.0B.2加样指示剂0.15溴酚蓝50甘油：称取 0.15g溴酚蓝溶于 50mL蒸馏水，再加 50mL甘油混匀。B.3电极缓冲液取甘氨酸28.80g溶于800 mL水，用约4.00g的Tris调pH至8.3，加蒸馏水到1000mL。电泳时稀释10倍使。B.4染色液的配制B.4.1染色用各溶液配置见表B.3。DB54/T 0329202410表B.3 染色用溶液配方溶 液 配 制 方 法氯化硝基四氮唑蓝（NBT）250mg辅酶 1（NAD）500mg吩嗪甲酯硫酸盐（PMS）20mg氯化钠（NaCl）290mgA水（H2O）200 mL乳酸钠 30mL B乳酸钠水（H2O）170 mLC0.5mol/L Tris-HCl染色缓冲液（pH=7.1）取 Tris60.5g溶于 800mL蒸馏水中，用盐酸调节 pH至 7.1，加蒸馏水到 1000mL。B.4.2染色液配方取A液10 mL，B液10 mL，C液18 mL，H2O 62 mL，混合均匀。