异齿裂腹鱼DB54/T 0332-2024.pdf

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ICS 65.150CCS B 5254西 藏 自 治 区 地 方 标 准DB54/T 03322024 异齿裂腹鱼 2024-04-09发布 2024-05-09实施西藏自治区市场监督管理局发 布DB54/T 03322024I目 次前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 术语和定义.14 主要形态结构特征.14.1 外部形态特征.14.2 内部结构特征.35 生长与繁殖.35.1 生长.35.2 繁殖.46 遗传学特性.56.1 细胞遗传学特性.56.2 生化遗传学特性.67 检测方法.67.1 抽样.67.2 性状测定.67.3 年龄鉴定.67.4 染色体检测.67.5 血清乳酸脱氢酶(LDH)检测.78 检验规则与结果判定.7附录A(资料性)生长方程、体长与体重关系式.8附录B(规范性)同工酶试剂的配制.9B.1 凝胶制备.9B.2 加样指示剂.9B.3 电极缓冲液.9B.4 染色液的配制.9DB54/T 03322024II前 言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由西藏自治区农业农村厅提出。本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会归口。本文件起草单位:中国水产科学研究院长江水产研究所、华中农业大学、西藏自治区畜牧总站、四川律贝生物技术有限公司。本文件主要起草人:马宝珊、覃剑晖、邵俭、林少卿、谢从新、马徐发、杨斐、霍斌、次仁卓嘎、拉巴次仁、央珍、边巴卓玛、程方方、杨君辉、格桑达瓦、尼玛次仁、苏中华、党发发、马娇林、袁齐涛、孙锋博、于航、乐地、郭荣明、王润锦、吴海彬、石彬、邹雨婷、孙建春、达娃罗布、张鑫崴、胡程鹏。DB54/T 033220241异齿裂腹鱼1范围本文件给出了异齿裂腹鱼(Schizothorax oconnori)的主要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特征、检测方法和检验规则。本文件适用于异齿裂腹鱼的种质检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分:抽样方法GB/T 18654.3 养殖鱼类种质检验 第3部分:性状测定GB/T 18654.4 养殖鱼类种质检验 第4部分:年龄与生长的测定GB/T 18654.6 养殖鱼类种质检验 第6部分:繁殖性能的测定GB/T 18654.12 养殖鱼类种质检验 第12部分:染色体组型分析GB/T 18654.13 养殖鱼类种质检验 第13部分:同工酶电泳分析3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1学名异齿裂腹鱼(Schizothorax oconnori)。3.2地方名棒棒鱼。3.3分类位置硬骨鱼纲(Osteichthyes),鲤形目(Cypriniformes),鲤科(Cyprinidae),裂腹鱼亚科(Schizothoracinae),裂腹鱼属(Schizothorax)。4主要形态结构特征4.1外部形态特征4.1.1外形体延长,略侧扁,背腹缘均隆起。头锥形。吻圆钝。口下位,横裂。吻钝圆。下颌具锐利角质前缘,其内侧角质亦较发达。唇发达,下唇完整,其游离缘略内凹,呈弧形;表面具发达乳突。唇后沟连续。DB54/T 033220242须两对,较短,口角须稍长于吻须,其长度为眼径的1/2倍2/3倍。吻须末端后伸约达鼻孔后缘之垂直下方。口角须末端后伸达眼中部之垂直下方。体被细鳞,排列不整齐,自峡部后之胸腹部具明显鳞片。侧线完全。背鳍最后一根不分枝鳍条粗硬,其后缘下1/24/5部分每侧具11枚20枚强壮锯齿;背鳍起点至吻端之距离大于其至尾鳍基部之距离。腹鳍起点位于背鳍基部起点之前的下方,其末端后伸达腹鳍起点至臀鳍起点的2/3处。胸鳍末端后伸达胸鳍起点至腹鳍起点之间距离的1/22/3处。尾鳍叉形,上下叶末端均钝。腹部银白色,背侧青灰色,体侧、背鳍、尾鳍有黑色斑点。异齿裂腹鱼的外形见图1。图1异齿裂腹鱼外形图4.1.2可数性状4.1.2.1背鳍鳍式D.iii-78。4.1.2.2臀鳍鳍式A.iii-5。4.1.2.3鳞式9021281722112。4.1.2.4第一鳃弓鳃耙数外侧鳃耙数:24枚35枚;内侧鳃耙数:35枚44枚。4.1.3可量性状可量性状变动值见表1。表1异齿裂腹鱼可量性状比例值比例性状 平均值(范围)比例性状 平均值(范围)体长/体高 4.8(3.95.7)头长/吻长 3.2(2.5-3.5)体长/头长 4.8(4.45.4)头长/眼径 6.2(4.26.8)体长/尾柄长 6.2(5.07.5)头长/眼间距 2.2(2.02.7)DB54/T 033220243体长/尾柄高 8.7(8.310.0)尾柄长/尾柄高 1.5(1.22.0)4.2内部结构特征4.2.1鳔鳔分两室。后室长于前室。4.2.2下咽齿下咽齿4行,1234/4321。下咽骨宽阔,咽齿顶端呈斜截状。4.2.3脊椎骨脊椎骨总数42枚43枚。4.2.4腹膜腹膜为黑色。5生长与繁殖5.1生长雌鱼最大年龄50龄,雄鱼最大年龄40龄。主要年龄组的体长和体重实测值见表2。表2不同年龄组的鱼体长和体重实测值雌鱼 雄鱼年龄体长(平均 标准差)mm体重(平均 标准差)g体长(平均 标准差)mm体重(平均 标准差)g3 179 78.6 178 68.74 196.823.1 105.336.1 218.817.4 145.525.35 243.026.0 214.467.8 244.322.8 202.363.16 274.430.7 291.4102.0 272.430.1 281.593.07 304.232.8 403.1147.5 292.431.0 356.6115.48 336.237.9 549.2175.7 322.424.9 482.6114.99 366.635.0 714.5214.6 340.629.8 570.1159.510 396.037.7 919.9271.8 353.425.1 647.3169.511 417.228.2 1095.0259.3 360.430.5 684.3181.412 425.634.2 1130.8290.4 375.429.1 783.1264.713 442.231.2 1278.8307.6 380.329.5 800.6180.314 438.633.4 1253.4323.4 394.615.7 888.072.315 430.331.1 1214.0266.4 391.816.3 767.9124.616 446.836.9 1303.2309.2 399.330.7 913.1161.6DB54/T 03322024417 461.022.9 1420.8283.1 399.59.7 921.065.518 465.525.2 1527.7268.9 401.718.8 948.1152.819 451.626.2 1363.9295.6 411.028.1 955.2182.620 464.134.1 1478.0279.0 405.021.9 1024.0253.621 453.030.9 1393.5343.2 405.810.8 981.0122.922 471.322.7 1483.9247.8 406.024.7 987.6209.523 456.015.9 1394.2178.2 409.515.2 979.4123.024 463.527.1 1540.5577.6 399.415.9 931.4121.525 454.921.7 1392.8284.4 386.513.4 834.258.326 454.330.5 1409.3305.8 398 930.627 474.235.0 1670.5576.5 411.331.6 991.7153.628 477.534.4 1667.6571.5 399.313.6 964.5105.029 449.418.8 1283.2160.630 467.232.3 1511.5301.9 444 1252.431 460.035.4 1531.4502.632 464 1294.4 454 1306.933 463.513.4 1327.736.7 431 1012.334 463.719.0 1357.7198.935 466.624.2 1506.1226.836 476.536.1 1354.8177.937 447.530.4 1315.1334.138 457 1342.239 402 1028.840 448 1317.5 422 1023.942 457 1421.949 479 1516.450 480 1604.45.2繁殖5.2.1性成熟年龄雌鱼为10龄,雄鱼为8龄。5.2.2产类类型性腺一年成熟一次,一次产出。DB54/T 0332202455.2.3繁殖期繁殖高峰期为3月4月。5.2.4怀卵量不同年龄组个体怀卵量见表3。表3异齿裂腹鱼不同年龄组的个体怀卵量年龄年体重范围g怀卵量(均值标准差)粒/尾相对怀卵量(均值标准差)粒/g10 1188.21289.8 14193.58336.1 11.77.411 1036.11472.4 20092.75202.1 16.72.612 1172.01550.9 20474.83359.8 15.91.913 1047.31777.3 19523.05625.9 14.33.614 1326.91873.5 22666.99028.8 14.24.715 870.11379.7 15400.83401.0 13.83.616 1495.02621.7 29892.57273.2 15.53.317 1242.61606.6 18927.86164.7 13.13.818 1452.01945.1 25162.08855.5 15.14.419 1245.81440.4 15735.02480.5 11.70.620 1478.61927.9 20923.08575.3 12.44.121 1223.62040.4 26668.28619.5 16.62.722 1140.81652.8 21327.23654.4 15.32.523 1206.61456.7 18514.44798.0 14.52.624 1263.1 12403 9.825 1100.11604.4 19745.54780.5 142.626 1168.81582.9 20984.83385 14.81.627 1302.52475.4 24984.011230.6 14.11.328 1256.82982.6 20519.94708.1 12.32.229 1041.51409.5 18648.02987.0 150.730 1398.11442.9 23027.5218.5 16.30.231 1395.62329.4 23028.011244.7 12.336遗传学特性6.1细胞遗传学特性染色体数:2n=92,核型公式:30m+26sm+20st+16t;臂数(NF):148。染色体核型见图2。DB54/T 033220246图2异齿裂腹鱼核型图6.2生化遗传学特性血清乳酸脱氢酶(LDH)酶电泳图谱见图3。图3异齿裂腹鱼血清 LDH 酶电泳图谱扫描图7检测方法7.1抽样按GB/T 18654.2的规定执行。7.2性状测定按GB/T 18654.3的规定执行。7.3年龄鉴定采用耳石鉴定年龄。方法按GB/T 18654.4的规定执行。7.4染色体检测按GB/T 18654.13的规定执行。DB54/T 0332202477.5血清乳酸脱氢酶(LDH)检测7.5.1试剂及配制方法同工酶各种试剂的配制见附录A。7.5.2样品的采集与制备血清制备,从尾静脉抽取2mL血,于4、1000r/min离心6min,取上清备用。7.5.3制胶现将混匀的6.5%分离胶液倒入模板约3/4高度,注入双蒸水,置于36左右30min。待凝胶聚合好以后,倒掉上面的水,将混匀的3.0%浓缩胶倒入模板,插好梳子,置于36左右30min,待凝胶聚合好以后,置于冰箱中备用。7.5.4点样点样量为20L。吸取20L样与2L3L加样指示剂混匀,一起加到样孔中。7.5.5电泳分离1)采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳。分离胶浓度6.5%,浓缩胶浓度3.0%。2)电极缓冲液:pH为8.3的Tris-甘氨酸。3)电泳:稳压280V(起始电流约18A24A)电泳0.5h后,将电压调到220V,继续电泳5h6h(溴酚蓝跑出胶后2h以上)。4)染色:电泳结束,放入预先配好并在37恒温箱中保温的同工酶染色液中染色。8检验规则与结果判定按GB/T 18654.1的规定执行。DB54/T 033220248A A 附 录 A(资料性)生长方程、体长与体重关系式A.1体长和体重生长方程雌性和雄性群体的体长和体重生长方程见式(A.1)、(A.2)、(A3)和(A.4):雌性:Lt=576.9(1 e0.081(t+0.946)(A.1)Wt=2666.2(1e0.081(t+0.946)2.94(A.2)雄性:Lt=499.7(1e0.095(t+0.896)(A.3)Wt=1748.1(1e0.095(t+0.896)2.94(A.4)式中:Ltt 龄时鱼体体长,mm;Wtt龄时鱼体体重,g;e自然对数;t鱼的年龄。A.2体长与体重关系式雌性、雄性和种群总体的体长与体重关系式见(A.5)、(A.6)和(A.7):雌性:W=8.897 106 SL 3.080(A.5)雄性:W=8.327 106 SL 3.090(A.6)总体:W=2.034 105 SL 2.940(A.7)式中:W鱼体体重,g;L鱼体体长,mm。DB54/T 033220249B B 附 录 B(规范性)同工酶试剂的配制B.1凝胶制备B.1.1凝胶制备溶液配制各种凝胶制备溶液的配方及配制方法见表 B.1。表B.1 各种凝胶制备溶液配方溶 液 配 制 方 法凝胶缓冲液取 Tris 56.75g加 200mL蒸馏水,用浓盐酸调 pH 为 8.9,加蒸馏水到 250mL。4贮存。凝胶储液取丙烯酰胺 33.3g,N,N亚甲基双丙烯酰胺 0.9g,四甲基乙二胺(TEMED)338L溶于蒸馏水中定容到 150mL。4贮存。AP 取过硫酸铵 1.5mg溶解到 100mL蒸馏水水中。4贮存。B.1.2分离胶和浓缩胶的制备用 6.5%分离胶和 3.0%浓缩胶制成聚丙烯酰胺垂直板凝胶,该凝胶液配方见表 B.2。表B.2 凝胶制备配方6.5%分离胶 3.0浓缩胶凝胶缓冲液,mL 1.5 凝胶缓冲液,mL 0.5凝胶储液,mL 7.3 凝胶储液,mL 1.2AP,mL 1.5 AP,mL 0.5TEMED,L TEMED,L 4.0纯水,mL 14.7 纯水,mL 6.8总体积,mL 25 总体积,mL 9.0B.2加样指示剂0.15溴酚蓝-50甘油:称取 0.15g溴酚蓝溶于 50mL蒸馏水,再加 50mL甘油混匀。B.3电极缓冲液取甘氨酸 28.80g溶于 800 mL水,用约 4.00g的 Tris调 pH至 8.3,加蒸馏水到 1000mL。电泳时稀释 10倍使用。B.4染色液的配制B.4.1染色用各溶液配制见表B.3。DB54/T 0332202410表B.3 染色用溶液配方溶 液 配 制 方 法氯化硝基四氮唑蓝(NBT)250mg辅酶 1(NAD)500mg吩嗪甲酯硫酸盐(PMS)20mg氯化钠(NaCl)290mgA水(H2O)200 mL乳酸钠 30mL B乳酸钠 水(H2O)170 mLC0.5mol/L Tris-HCl染色缓冲液(pH=7.1)取 Tris60.5g 溶于 800mL 蒸馏水中,用盐酸调节 pH 至 7.1,加蒸馏水到 1000mL。B.4.2染色液配方取A液10 mL,B液10 mL,C液18 mL,H2O 62 mL,混合均匀。
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