辣椒细菌性斑点病抗病性鉴定技术规程DB21／T 3949-2024.pdf

I C S 6 5.0 2 0.2 0C C S B 3 121辽 宁 省 地 方 标 准D B 2 1/T 3 9 4 9 2 0 2 4辣 椒 细 菌 性 斑 点 病 抗 病 性 鉴 定 技 术 规 程T e c h n i c a l r e g u l a t i o n f o r e v a l u a t i o n o f p e p p e r r e s i s t a n c e t o b a c t e r i a l l e a f s p o t2 0 2 4-0 4-3 0 发 布 2 0 2 4-0 5-3 0 实 施辽 宁 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布D B 2 1/T 3 9 4 9 2 0 2 4I前 言本 文 件 按 照 G B/T 1.1 2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分：标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定起 草。请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利。本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 专 利 的 责 任。本 文 件 由 辽 宁 省 农 业 农 村 厅 提 出 并 归 口。本 文 件 起 草 单 位：辽 宁 省 农 业 科 学 院、辽 宁 省 农 业 发 展 服 务 中 心、新 民 市 乡 村 振 兴 发 展 中 心、桓 仁满 族 自 治 县 市 场 监 管 事 务 服 务 中 心、大 连 市 现 代 农 业 生 产 发 展 服 务 中 心、铁 岭 市 农 业 科 学 院、喀 左 县 老爷 庙 镇 蔬 菜 技 术 服 务 站、喀 左 县 公 营 子 镇 蔬 菜 站、喀 左 县 草 场 乡 蔬 菜 技 术 服 务 站、喀 左 县 林 业 和 草 原 事务 服 务 中 心、北 票 市 农 业 综 合 行 政 执 法 队、北 票 市 农 业 发 展 服 务 中 心、北 票 市 龙 城 区 农 业 农 村 局、北 票市 龙 潭 乡 林 业 站本 文 件 主 要 起 草 人：王 辉、刘 丽、于 舒 怡、邹 春 蕾、李 柏 宏、关 天 舒、刘 长 远、张 曦、鲁 旭 鹏、宋露、郑 丽 娇、樊 琳 琳、王 延 安、刘 震、王 德 峰、暴 国 兴、陶 成 东、茹 威、时 春 利、梁 健、吕 丽 英、杨 永胜、张 国 辉。本 文 件 发 布 实 施 后，任 何 单 位 和 个 人 如 有 问 题 和 意 见 建 议，均 可 以 通 过 来 电 和 来 函 等 方 式 进 行 反 馈，我 们 将 及 时 答 复 并 认 真 处 理，根 据 实 际 情 况 依 法 进 行 评 估 及 复 审。归 口 管 理 部 门 通 讯 地 址：辽 宁 省 农 业 农 村 厅（沈 阳 市 和 平 区 太 原 北 街 2 号），联 系 电 话：0 2 4-2 3 4 4 7 8 6 2。文 件 起 草 单 位 通 讯 地 址：辽 宁 省 农 业 科 学 院（沈 阳 市 沈 河 区 东 陵 路 8 4 号），联 系 电 话：0 2 4-8 8 4 1 9 8 9 5。D B 2 1/T 3 9 4 9 2 0 2 41辣 椒 细 菌 性 斑 点 病 抗 病 性 鉴 定 技 术 规 程1 范 围本 文 件 规 定 了 辣 椒 细 菌 性 斑 点 病(X a n t h o m o n a s c a m p e s t r i s p v.v e s i c a t o r i a(D o i d g e)D y e 抗 病 性 鉴定 过 程 的 准 备、接 种、调 查 和 评 价 等 技 术 内 容。本 文 件 适 用 于 辣 椒（C a p s i c u m a n n u u m L.）品 种 或 种 质 资 源 对 细 菌 性 斑 点 病 抗 性 的 室 内 鉴 定 及 评 价。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款。其 中，注 日 期 的 引 用 文 件，仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件；不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本文 件。G B/T 3 6 8 5 1 辣 椒 细 菌 性 斑 点 病 菌 检 疫 鉴 定 方 法S N/T 1 5 3 8.1 培 养 基 制 备 指 南 第 1 部 分：实 验 室 培 养 基 制 备 质 量 保 证 通 则3 术 语 和 定 义本 文 件 没 有 需 要 界 定 的 术 语 和 定 义。4 准 备4.1 培 养 基 制 备肉 汁 胨 培 养 基（N A）：牛 肉 浸 膏 3.0 g，酵 母 浸 膏 1.0 g，蛋 白 胨 5.0 g，葡 萄 糖（或 蔗 糖）1 0.0 g，琼脂 粉 1 0.0 g，蒸 馏 水 1 0 0 0 m L，p H 6.8 7.0，高 压 灭 菌 1 2 1 2 0 m i n。酵 母 膏 葡 萄 糖 培 养 基：酵 母 浸 膏 1 0.0 g，D-葡 萄 糖 2 0.0 g，碳 酸 钙 2 0.0 g，琼 脂 粉 1 0.0 g，蒸 馏 水 1 0 0 0m L，除 碳 酸 钙 外，先 将 其 他 成 分 加 热 溶 解，然 后 加 碳 酸 钙，将 p H 值 调 到 7.2，再 高 压 灭 菌 1 2 1 2 0 m i n。4.2 接 种 体 制 备4.2.1 病 原 物 分 离从 发 病 植 株 叶 片 的 典 型 病 斑 上 采 集 病 样，采 用 平 板 划 线 法 或 稀 释 平 板 法 进 行 分 离，挑 取 单 个 菌 落 进行 纯 化 培 养，经 柯 赫 氏 证 病 法 则 测 定 后，对 纯 化 的 分 离 物 进 行 形 态 学、分 子 学 鉴 定 等，确 定 为 辣 椒 细 菌D B 2 1/T 3 9 4 9 2 0 2 42性 斑 点 病 病 原 菌，并 将 该 病 菌 4 保 存 备 用。病 原 物 的 分 离 与 鉴 定 符 合 G B/T 3 6 8 5 1 的 规 定 和 附 录 A的 要 求。4.2.2 接 种 体 制 备将 获 得 的 病 原 菌 在 N A 平 板 培 养 基 上 进 行 纯 培 养，2 8 恒 温 培 养 3 6 h 4 8 h，用 接 种 环 刮 取 病 原 菌，将 其 放 入 装 有 适 量 无 菌 水 的 三 角 瓶 中，充 分 搅 拌 均 匀，用 稀 释 平 板 计 数 法 或 血 球 计 数 板 计 数 法 测 定 菌 悬液 浓 度，配 制 成 3 1 06c f u/m L 病 菌 悬 浮 液，供 接 种 使 用。4.2.3 菌 种 保 存4.2.3.1 斜 面 保 存将 纯 化 的 病 原 物 划 线 转 接 到 试 管 斜 面 培 养 基 上，2 8 恒 温 培 养 3 6 h 4 8 h，待 病 菌 长 满 斜 面 后 放 4 条 件 下 冷 藏 保 存，保 存 期 为 1 周 1 0 周。4.2.3.2 超 低 温 甘 油 保 存将 获 得 的 病 原 菌 在 N A 平 板 培 养 基 上 培 养，2 8 恒 温 培 养 3 6 h 4 8 h，用 接 种 环 挑 取 病 原 菌 放 入 装 有灭 菌 的 甘 油（甘 油:水=1:4）冻 存 管 中 混 匀，放 于-8 0 超 低 温 冰 箱 下 长 期 保 存。4.3 鉴 定 对 照 品 种 选 择抗 病 性 鉴 定 时 选 择“e a r l y c a l w o n d e r”（甜 椒 品 种）为 感 病 对 照 品 种。4.4 鉴 定 设 计鉴 定 材 料 随 机 排 列，每 份 材 料 重 复 3 次，每 次 重 复 1 0 株 苗。4.5 鉴 定 材 料 育 苗选 择 颗 粒 饱 满、无 病 虫 害 的 辣 椒 种 子，将 其 放 入 高 锰 酸 钾 溶 液 中 浸 泡 1 0 m i n 1 5 m i n，捞 出 放 入 温水 中 浸 泡 8 h 1 2 h，取 出 用 湿 毛 巾 包 裹 放 于 恒 温 箱 内 进 行 催 芽，温 度 保 持 在 2 5 3 0，待 种 子 露 白 后即 可 进 行 播 种。将 种 子 均 匀 地 撒 在 育 苗 盘 上，覆 盖 一 层 薄 土，覆 地 膜 保 湿，夏 季 需 遮 阴。育 苗 期 间 保 持温 度 在 2 0 3 0，当 辣 椒 苗 长 出 6 片 1 0 片 真 叶 时，在 接 种 室 接 种 病 原 菌 进 行 抗 病 性 鉴 定。4.6 接 种 室 与 鉴 定 室 设 置4.6.1 接 种 室 设 置接 种 室 又 称 无 菌 室，是 分 离 和 移 接 菌 种 的 小 房 间，应 包 括 接 种 间 和 缓 冲 间。接 种 室 的 地 板、墙 壁、天 花 板 要 平 整 光 滑，以 便 擦 洗 消 毒。门 窗 应 密 闭，关 闭 后 应 与 外 界 隔 绝 空 气 流 通，房 间 应 设 有 工 作 台，D B 2 1/T 3 9 4 9 2 0 2 43以 便 放 置 酒 精 灯、常 用 接 种 工 具，工 作 台 上 方 和 缓 冲 间 天 花 板 上 应 安 装 能 任 意 升 降 的 紫 外 线 杀 菌 灯 和 日光 灯。4.6.2 鉴 定 室 设 置人 工 接 种 室 内 应 具 备 人 工 调 节 温 度、湿 度 及 稳 定 的 光 照 条 件；亦 可 使 用 恒 温 光 照 箱，温 度 设 定 2 5 2 7，光 暗 交 替 1 2 h，光 照 6 0 0 0 L x，内 部 空 间 保 持 相 对 湿 度 9 0%1 0 0%。5 接 种5.1 接 种 期抗 性 鉴 定 接 种 期 为 6 片 1 0 片 真 叶 期。5.2 接 种 浓 度接 种 用 病 原 物 菌 悬 浮 液 浓 度 为 3 1 06c f u/m L。5.3 接 种 方 法通 常 采 用 喷 雾 接 种 法 或 涂 抹 法。喷 雾 接 种 法：用 小 型 手 持 喷 雾 器 将 准 备 好 接 种 的 病 原 物 菌 悬 浮 液 均 匀 地 喷 雾 到 每 片 叶 片 的 正 反面，以 不 流 水 滴 为 宜。涂 抹 接 种 法：用 毛 笔 蘸 取 接 种 用 病 原 物 菌 悬 浮 液 涂 抹 于 叶 片 正 反 面，以 不 流 水 滴 为 宜。5.4 接 种 后 管 理接 种 后 将 植 株 置 于 鉴 定 室 或 恒 温 保 藏 箱 内，温 度 设 定 2 5 2 7，光 暗 交 替 1 2 h，光 照 6 0 0 0 L x，覆 盖 塑 料 薄 膜 保 湿，湿 度 保 持 9 0%1 0 0%。6 调 查6.1 调 查 时 间病 情 调 查 于 接 种 后 2 0 d 2 5 d 进 行，对 发 病 情 况 进 行 调 查 并 记 录。6.2 调 查 方 法 与 病 指 计 算根 据 病 害 分 级 标 准，逐 份 调 查 植 株 叶 片 发 病 情 况，记 载 接 种 的 调 查 总 叶 数、各 病 情 级 别 的 叶 片 数、病 情 级 别，计 算 出 病 情 指 数（D I）。病 情 指 数（D I）按 下 列 公 式 计 算：（s n）D I=1 0 0D B 2 1/T 3 9 4 9 2 0 2 44S N式 中：D I 病 情 指 数；s 各 级 代 表 值；n 各 级 叶 片 数；S 发 病 最 高 代 表 值；N 调 查 总 叶 数。6.3 病 情 分 级病 情 分 级 及 其 对 应 的 症 状 描 述 见 表 1。表 1 辣 椒 细 菌 性 斑 点 病 鉴 定 病 情 级 别 划 分 指 标病情级别 病害症状描述0 全叶无病斑1 病斑占叶面积的 5%以下2 病斑占叶面积的 6%1 0%3 病斑占叶面积的 1 1%2 5%4 病斑占叶面积 2 6%5 0%5 病斑占叶面积的 5 1%以上7 抗 病 性 评 价7.1 鉴 定 有 效 性 判 别当 感 病 对 照 材 料 达 到 感 病 程 度（S 级）时，该 批 次 材 料 抗 细 菌 性 斑 点 病 鉴 定 视 为 有 效（表 2）。7.2 评 价 标 准依 据 鉴 定 材 料 的 病 情 指 数 确 定 其 抗 性 水 平，划 分 标 准 见 表 2。表 2 辣 椒 细 菌 性 斑 点 病 抗 病 性 划 分 指 标病情指数（D I）抗病性评价D I=0 免疫 I m m u n e（I）0 D I 1 5 抗病 R e s i s t a n t（R）1 5 D I 3 0 中抗 M o d e r a t e l y r e s i s t a n t（M R）3 0 D I 4 0 感病 S u s c e p t i b l e（S）4 0 D I 1 0 0 高感 H i g h l y s u s c e p t i b l e（H S）D B 2 1/T 3 9 4 9 2 0 2 457.3 鉴 定 记 载 表 格辣 椒 细 菌 性 斑 点 病 抗 病 性 鉴 定 结 果 记 载 表 格 见 图 1。A图 1 辣 椒 细 菌 性 斑 点 病 抗 病 性 鉴 定 结 果 记 载 表 样 式 图A B BD B 2 1/T 3 9 4 9 2 0 2 46附 录 A（资 料 性）辣 椒 细 菌 性 斑 点 病A.1 病 名 和 症 状 描 述A.1.1 病 名辣 椒 细 菌 性 斑 点 病 B a c t e r i a l s p o t d i s e a s e o f p e p p e r，又 称 细 菌 性 疮 痂 病。A.1.2 田 间 症 状细 菌 性 斑 点 病 主 要 侵 染 辣 椒、番 茄 及 其 他 多 种 茄 科 作 物，幼 苗、叶、茎 和 果 实 均 能 发 病，但 以 叶 片发 病 较 为 普 遍。危 害 叶 片 时 病 斑 周 围 有 黄 色 晕 圈，最 初 产 生 水 渍 斑，黄 绿 色，病 斑 逐 渐 扩 大 后 病 斑 呈 圆形 或 不 规 则 形，边 缘 暗 褐 色，稍 隆 起，中 央 色 淡，稍 凹 陷，表 面 粗 糙 如 疮 痂 状，病 斑 还 可 连 成 大 型 不 规则 斑 块，严 重 时 叶 尖 和 叶 缘 变 黄 干 枯、破 裂、穿 孔、落 叶。后 期 可 造 成 叶 片 穿 孔，易 脱 落。图 A.1 辣 椒 细 菌 性 斑 点 病 田 间 症 状A.2 病 原 菌 学 名 和 形 态 描 述A.2.1 病 原 菌该 病 害 病 原 主 要 为 野 油 菜 黄 单 胞 菌 疮 痂 致 病 变 种(X a n t h o m o n a s c a m p e s t r i s p v.v e s i c a t o r i a(D o i d g e)D y e。A.2.2 形 态 描 述该 病 菌 菌 体 杆 状，单 生，革 兰 氏 染 色 阴 性，单 鞭 毛，生 长 最 适 温 度 为 2 5 3 0。在 N A 培 养 基上 菌 落 呈 黄 色，菌 体 粘 稠、凸 起、有 光 泽、不 透 明、边 缘 整 齐。D B 2 1/T 3 9 4 9 2 0 2 47图 A.2 辣 椒 细 菌 性 斑 点 病 病 菌 菌 落 形 态（N A 培 养 基）图 A.3 辣 椒 细 菌 性 斑 点 病 病 菌 革 兰 氏 染 色 及 菌 体 形 态（1 0 0 0）_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _C C