马铃薯脱毒试管苗（薯）繁育技术规程DB14／T 630-2015.pdf

I C S 65.020.20B 21DB14山 西 省 地 方 标 准D B 1 4/T 6 3 0 2 0 1 5代 替 DB14/T 630-2011马 铃 薯 脱 毒 试 管 苗（薯）繁 育 技 术 规 程2 0 1 5-1 1-3 0 发 布 2 0 1 5-1 2-3 0 实 施山 西 省 质 量 技 术 监 督 局发 布2022年10月14日确认有效DB14/T 630 201 5I目 次前 言.II1 范 围.12 规 范 性 引 用 文 件.13 术 语、定 义 和 缩 略 语.14 生 产 设 施、仪 器 设 备、试 剂 和 培 养 基.25 MS 培 养 基 和 植 物 生 长 调 节 剂 母 液 配 制.36 脱 毒 技 术.47 脱 毒 试 管 苗 扩 繁.68 试 管 薯 诱 导.7DB14/T 630 201 5I I前 言本 标 准 按 G B/T 1.1 2009 给 出 的 规 则 起 草。本 标 准 代 替 D B 14/T 630 2011 马 铃 薯 脱 毒 试 管 苗（薯）繁 育 技 术 规 程，与 D B 14/T 630 2011相 比 差 异 如 下：增 加 了 脱 毒 核 心 试 管 苗、脱 毒 基 础 试 管 苗 的 定 义，修 改 了 脱 毒 试 管 苗 的 定 义。增 加 了 风 淋 室、臭 氧 消 毒 机 等 设 施 及 仪 器 设 备。增 加 了 臭 氧 环 境 净 化 内 容，并 对 6.5 内 容 进 行 了 调 整。修 改 了 病 毒 检 测 方 法、种 性 鉴 定 方 法、污 染 苗 处 理 方 法。本 标 准 由 山 西 省 农 业 厅 提 出 并 归 口。本 标 准 起 草 单 位：山 西 省 薯 类 脱 毒 中 心、山 西 省 农 业 科 学 院 高 寒 区 作 物 研 究 所、山 西 汾 水 源 薯 业 科技 有 限 公 司。本 标 准 主 要 起 草 人：姬 青 云、杜 珍、王 拴 福、田 肉 虎、穆 艳 娥、姚 鹏、齐 海 英、柴 生 武、杜 培 兵、邓 利 爱、张 东 红、石 维 山、冀 晓 慧。本 标 准 2011 年 12 月 首 次 发 布，本 次 为 第 一 次 修 订。DB14/T 630 201 51马 铃 薯 脱 毒 试 管 苗（薯）繁 育 技 术 规 程1 范 围本 标 准 规 定 了 马 铃 薯 脱 毒 试 管 苗（薯）繁 育 的 术 语、定 义 和 缩 略 语，生 产 设 施、仪 器 设 备、试 剂 和培 养 基，M S 培 养 基 和 植 物 生 长 调 节 剂 母 液 的 配 制，脱 毒 技 术，试 管 苗 扩 繁 和 试 管 薯 诱 导 等 内 容。本 标 准 适 用 于 山 西 省 马 铃 薯 脱 毒 试 管 苗（薯）的 繁 育。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本 文 件。G B 7331 马 铃 薯 种 薯 产 地 检 疫 规 程G B 18133 马 铃 薯 种 薯G B 20464 农 作 物 种 子 标 签 通 则G B/T 28660 马 铃 薯 种 薯 真 实 性 和 纯 度 鉴 定 SSR 分 子 标 记N Y/T 401 脱 毒 马 铃 薯 种 薯（苗）病 毒 检 测 技 术 规 程N Y/T 1962 马 铃 薯 纺 锤 块 茎 类 病 毒 检 测N Y/T 1963 马 铃 薯 品 种 鉴 定N Y/T 2678 马 铃 薯 6 种 病 毒 的 检 测 R T P C RN Y/T 2744 马 铃 薯 纺 锤 块 茎 类 病 毒 检 测 技 术 核 酸 斑 点 杂 交 法3 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件。3.1试 管 苗 plantl et应 用 植 物 组 织 培 养 技 术 在 封 闭 容 器 内 繁 殖 的 种 苗。3.2脱 毒 核 心 试 管 苗 core plantlet应 用 茎 尖 分 生 组 织 培 养 技 术 获 得 的，不 带 P V X、P V Y、P V S、P V A、P V M、P L R V 和 P S T V d，经鉴 定 具 有 原 品 种 特 征 特 性 的 试 管 苗。3.3脱 毒 基 础 试 管 苗 basic plantlet由 脱 毒 核 心 试 管 苗 繁 殖 的、用 于 保 存 和 大 量 扩 繁 的 无 病 毒 试 管 苗。DB14/T 630 201 523.4脱 毒 试 管 苗 in-vitro Virus free plantl et由 脱 毒 基 础 试 管 苗 大 量 扩 繁 的、用 于 繁 育 试 管 薯 和 原 原 种 的 无 病 毒 试 管 苗。3.5脱 毒 试 管 薯 Microtub er无 菌 条 件 下，在 封 闭 培 养 容 器 内 用 脱 毒 试 管 苗 诱 导 形 成 的 小 块 茎。3.6原 原 种 pre-el ite用 脱 毒 试 管 苗 或 脱 毒 试 管 薯 在 防 虫 网 室（棚）等 严 格 隔 离 条 件 下，采 用 无 土 栽 培 技 术 生 产 的、经 质量 检 测 达 到 G B 18133 相 应 要 求，用 于 原 种 生 产 的 微 型 薯。4 缩 略 语下 列 缩 略 语 适 用 于 本 文 件。P V X：马 铃 薯 X 病 毒（P ot a t o v i r us X）P V Y：马 铃 薯 Y 病 毒（P ot a t o v i r us Y）P V S：马 铃 薯 S 病 毒（P o t a t o v i r u s S）P V M：马 铃 薯 M 病 毒（P o t a t o v i r u s M）P V A：马 铃 薯 A 病 毒（P ot a t o v i r us A）P L R V：马 铃 薯 卷 叶 病 毒（P ot a t o l e a f r o l l v i r u s）P S T V d：马 铃 薯 纺 锤 块 茎 类 病 毒（P ot a t o s p i n dl e t ube r v i r o i d）D A S-E L I S A：双 抗 体 夹 心 酶 联 免 疫 吸 附 测 定（D o ubl e A nt i body S a n dw i c h E L I S A）R-P A G E：双 向 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 法（R e t ur n P o l ya c r y l a m i de G e l E l e c t r o phor e s i s）R T-P C R：反 转 录-聚 合 酶 链 式 反 应（R e ve r s e T r a n s c r i p t i on-P C R）N A S H：核 酸 斑 点 杂 交（N u c l e i c A c i d S p ot H y br i d i z a t i o n）M S：M S 培 养 基（M u r a s h i ge&S ko og(1962)）6-B A：6-苄 胺 基 嘌 呤（6-B e n z yl a m i nopur i n e）C C C：矮 壮 素（C hl or m e qu a t C hl or i d e）I B A：吲 哚 丁 酸（I ndol e-3-B u t yr i c A c i d）K T：激 动 素（K i n e t i n）I A A：吲 哚 乙 酸（I ndol e-3-A c e t i c A c i d）B 9：丁酰 肼（D a m i no z i de）A R：分 析 纯（A na l y t i c a l R e a g e nt）5 生 产 设 施、仪 器 设 备、试 剂 和 培 养 基5.1 生 产 设 施风 淋 室、更 衣 室、洗 涤 室、配 制 室、灭 菌 室、仪 器 室、接 种 室（无 菌 操 作 室）、组 培 室、检 测 室。DB14/T 630 201 535.2 仪 器 设 备 配 置5.2.1 更 衣 室：紫 外 线 灯、更 衣 柜、消 毒 柜、洗 手 池、工 作 服、接 种 服、工 作 帽、口 罩、拖 鞋 或 鞋 套等。5.2.2 洗 涤 室：紫 外 线 灯、试 验 台、洗 涤 池、洗 瓶 机、晾 瓶 架、蒸 馏 水 器、洗 涤 用 具、周 转 箱 等。5.2.3 配 制 室：试 验 台、电 子 天 平、p H 计、磁 力 搅 拌 器、电 冰 箱、蒸 煮 锅、培 养 基 制 备 机、定 量 灌 装机、紫 外 线 灯、烧 杯、量 筒、移 液 管、玻 璃 搅 拌 棒、容 量 瓶、试 剂 瓶、分 注 器 等。5.2.4 灭 菌 室：鼓 风 干 燥 箱、压 力 蒸 汽 灭 菌 器、微 波 炉、紫 外 线 灯 等。5.2.5 仪 器 室：光 照 培 养 箱、人 工 气 候 箱、冰 箱 等。5.2.6 接 种 室：臭 氧 消 毒 机、移 动 式 空 气 自 净 器、空 调、超 净 工 作 台、体 视 显 微 镜（双 筒 解 剖 镜）、数 显 接 种 器 械 灭 菌 器、白 瓷 盘、酒 精 灯、培 养 皿、解 剖 刀（手 术 刀）、解 剖 针、接 种 针、长 柄 枪 型 镊、弯 尖 手 术 剪、手 持 喷 雾 器、过 滤 灭 菌 器、紫 外 线 灯 或 紫 外 线 消 毒 器、送 物 手 推 车、座 椅 等。5.2.7 组 培 室：臭 氧 消 毒 机、紫 外 线 灯、光 照 培 养 架、空 调、照 度 计、自 动 控 时 器、温 湿 度 计、试 管、培 养 瓶 等。5.2.8 检 测 室：酶 标 仪、高 速 冷 冻 离 心 机、电 泳 仪、电 泳 槽、PCR 仪、微 量 移 液 器、紫 外 线 灯 等。5.3 试 剂75%乙 醇、95%乙 醇、40%甲 醛、H g C l 2、漂 白 粉 饱 和 溶 液、K T、I A A、I B A、6-B A、B 9、配 制 M S培 养 基 的 各 种 化 合 物（见 表 1）等 化 学 试 剂。5.4 培 养 基试 管 苗 扩 繁 选 用 M S 培 养 基（M u r a s h i ge&S koo g(1962)）。6 M S 培 养 基 和 植 物 生 长 调 节 剂 母 液 配 制6.1 M S 培 养 基 配 制M S 培 养 基 按 表 1配 制。配 制 母 液 A 时，最 后 加 入 氯 化 钙；配 制 母 液 B 时，分 别 将 两 种 试 剂 单 独 加 热，待 溶 解 后 进 行 混 合，再 将 混 合 溶 液 继 续 加 热 使 其 充 分 螯 合 至 产 生 深 黄 色 溶 液，冷 却 后 进 行 定 容，装 入 棕色 试 剂 瓶。各 母 液 均 放 置 在 冰 箱 中 于 4 条 件 下 保 存，使 用 时 再 根 据 需 要 浓 度 配 成 M S 培 养 基，p H 值 用8.3 m l/L 的 H C l 和 4.0 g/L 的 N a O H 调 整 到 5.8。表 1 M S 培 养 基 配 制 表母 液 化 合 物数 量（g）蒸 馏 水 定 容 量（ml）配 制 1L 培 养 基 需 母 液 量（ml）AN H 4 N O 3 16.51 000 100K N O 3 19.0K H 2 P O 4 1.7M g S O 4.7H 2 O 3.7C a C l 2。2H 2 O 4.4DB14/T 630 201 54BF e S O 4 0.557100 5N a 2-E D T A 0.754CK I 0.083100 1N a 2 M o O 4.2H 2 O 0.025C o C l 2。6H 2 O 0.002 5C u S O 4.5H 2 O 0.002 5M n S O 4.4H 2 O 2.23Z nS O 4.7H 2 O 0.86H 3 B O 3 0.62D V B 1 0.004 100 10E V B 6 0.005 100 10F 甘 氨 酸 0.02 100 10G 烟 酸 0.005 100 10H肌 醇 1.0 100 10蔗 糖 30.0直 接 加 入琼 脂 7.0注 1：A 为 大 量 元 素；B 为 铁 盐；C 为 微 量 元 素；D H 为 有 机 成 分；注 2：化 学 试 剂 规 格 选 用 A R。6.2 植 物 生 长 调 节 剂 母 液 配 制植 物 生 长 调 节 剂 通 常 配 成 浓 度 为 1 m g/m L 的 母 液。I A A、I B A 用 95%乙 醇 溶 解，K T、6-B A 用 82.5 m l/L的 H C l 溶 解，配 制 母 液 时 先 用 1 m L 2 m L 的 相 应 溶 剂 溶 解，再 用 无 菌 蒸 馏 水 定 容 至 所 需 浓 度，摇 匀 后 贮于 棕 色 试 剂 瓶 中，置 于 4 冰 箱 中 保 存。B 9 与 C C C 可 以 不 配 制 母 液，用 时 直 接 称 取，再 用 热 水 溶 解。7 脱 毒 技 术7.1 取 材 及 处 理7.1.1 品 种生 产 推 广 选 用 通 过 国 家 农 作 物 品 种 审 定 委 员 会 或 山 西 省 农 作 物 品 种 审 定 委 员 会 审 定 的 适 宜 本 区 域种 植 的 品 种。7.1.2 材 料 选 择在 通 过 G B 7331 检 疫 的 产 地 选 择 脱 毒 材 料，应 在 肥 力 中 等 或 施 肥 量 中 等 的 地 块 上 选 择 单 株。生 长 期间，经 苗 期、花 期 和 收 获 前 三 次 田 间 检 查，选 择 具 有 品 种 典 型 特 征 特 性、生 长 势 强、目 测 无 类 病 毒 和 病毒 病 症 状 的 优 良 单 株 做 标 记，收 获 时 结 合 块 茎 特 征 及 产 量 情 况 进 行 复 选，获 得 相 应 植 株 的 典 型 块 茎 单 收单 贮。7.1.3 类 病 毒 检 测按 照 N Y/T 1962、N Y/T 2744 对 所 选 块 茎 采 用 R-P A G E、R T-P C R、N A S H 方 法 进 行 检 测，筛 选 出无 P S T V d 的 块 茎。7.1.4 种 芽 培 养DB14/T 630 201 55将 所 选 的 无 P S T V d 且 芽 眼 萌 动 的 块 茎 冲 洗 干 净，放 置 在 光 照 培 养 箱 或 人 工 气 候 箱 进 行 热 处 理 和 培 养，温 度 36，光 照 时 间 16 h/d，经 3 4 周 使 种 芽 长 至 2 c m 3 c m。7.2 种 芽 灭 菌从 块 茎 上 切 取 2 c m 左 右 的 芽 若 干 个 放 入 烧 杯，用 纱 布 封 口，在 自 来 水 下 冲 洗 30 m i n 60 m i n，然 后移 到 超 净 工 作 台 上，先 用 75%乙 醇 浸 润 10 s 30 s，在 漂 白 粉 饱 和 上 清 液 或 5%10%的 N a C l O 溶 液 中 浸泡 10 m i n 15 m i n，或 在 0.1%的 H g C l 2 溶 液 中 浸 泡 5 m i n 10 m i n，之 后 用 无 菌 水 冲 洗 4 5 次，再 用 无 菌滤 纸 吸 去 表 面 水 分，置 于 无 菌 培 养 皿 中 备 用。7.3 培 养 容 器 及 接 种 器 械 的 清 洗7.3.1 培 养 容 器 可 选 用 180 mm 18 mm 试 管 或 50 mL 三 角 瓶。新 容 器 使 用 时，直 接 放 在 加 入 洗 洁 剂 的热 水 中 浸 泡，浸 泡 时 间 应 不 少 于 6 h，一 般 过 夜，之 后 用 试 管 刷 或 瓶 刷 清 洗 培 养 容 器 内 外，再 用 自 来 水冲 洗 3 5 次，然 后 倒 置 在 晾 瓶 架 上 沥 水 后 备 用。7.3.2 使 用 过 的 培 养 容 器 要 立 即 清 除 残 留 物，放 在 加 入 洗 洁 剂 的 热 水 中 浸 泡，按 新 培 养 容 器 清 洗 方 法洗 干 净 后 晾 干 备 用。7.3.3 接 种 器 械 的 清 洗 同 培 养 容 器。7.4 茎 尖 组 织 培 养 基 制 备茎 尖 组 织 培 养 基 可 选 用 M S（其 中 蔗 糖 20 g/L，琼 脂 6 g/L）+I A A 1 m g/L 30 m g/L+K T 0.05 m g/L 1.0 m g/L，p H 5.8，配 好 后 放 入 蒸 煮 锅 或 制 备 机 内 煮 开，分 装 于 试 管 或 三 角 瓶 中，每 管（瓶）10 m L，用纱 布 棉 球 纸 帽 或 封 口 膜（盖）封 口，放 入 高 压 蒸 汽 灭 菌 器 内 进 行 灭 菌。灭 菌 的 工 作 压 力 应 稳 定 在 1.1 k g/c m2(0.105 M P a),温 度 为 121，时 间 为 20 m i n。灭 菌 后 置 于 试 管 架 或 存 放 架 上 冷 却 待 用。I A A 应 采 用 过 滤灭 菌 器 灭 菌。7.5 环 境 净 化 及 器 械 灭 菌7.5.1 环 境 净 化7.5.1.1 所 有 人 员 需 通 过 风 淋 室 进 入 工 作 区 域。7.5.1.2 接 种 前 30 min 开 启 室 内 和 超 净 工 作 台 紫 外 线 灯，照 射 消 毒 20 min，关 灯 后 10 min 人 员 方 可进 入 室 内 操 作。7.5.1.3 室 内 空 气 悬 浮 物 和 气 体 成 份 超 标 时，应 根 据 情 况 通 风、用 75%乙 醇 或 1%苯 扎 溴 铵 溶 液 喷 雾 降尘，开 启 空 气 自 净 器，使 空 气 净 化 率 达 到 99.97%以 上、空 气 质 量 达 到 相 应 要 求。7.5.1.4 每 天 工 作 结 束 后，清 理 地 面，可 用 有 效 氯 含 量 5%6%的 NaClO 溶 液 500 mg/L 1 000 mg/L，或 将 27 g/L 33 g/L 苯 扎 溴 铵 溶 液 用 无 菌 蒸 馏 水 稀 释 10 倍，或 50%多 菌 灵 400 倍 等 溶 液 交 替 进 行 地 面消 毒。7.5.1.5 每 天 20 时 开 启 接 种 室 臭 氧 消 毒 机 20 min，组 培 室 等 区 域 环 境 每 周 臭 氧 消 毒 一 次。7.5.2 器 械 灭 菌7.5.2.1 操 作 所 用 的 镊 子、解 剖 刀、解 剖 针、培 养 皿 均 需 用 纱 布 包 裹 后，经 过 高 压 蒸 汽 灭 菌，培 养 皿以 及 滤 纸 可 用 纸 包 好 置 于 鼓 风 干 燥 箱 内 200 下 灭 菌 2 h。DB14/T 630 201 567.5.2.2 接 种 服、工 作 帽、口 罩、拖 鞋 在 消 毒 柜 中 消 毒 或 用 紫 外 线 灯 照 射 消 毒。7.6 无 菌 操 作工 作 人 员 进 入 接 种 室 前，用 肥 皂 清 洗 手 臂，在 更 衣 室 穿 戴 好 消 毒 的 接 种 服、工 作 帽、口 罩 和 拖 鞋（鞋套）。操 作 时 用 75%乙 醇 仔 细 擦 拭 双 手、超 净 工 作 台 台 面。每 人 备 2 3套 剪 刀、镊 子 等 接 种 工 具，将 接种 工 具 浸 泡 在 95%乙 醇 中，使 用 前，在 数 显 接 种 器 械 灭 菌 器 或 酒 精 灯 外 焰 上 灼 烧 灭 菌，放 在 器 具 搁 置 架上 冷 却 后 待 用，之 后 在 每 次 操 作 中 多 套 工 具 交 替 使 用，重 复 进 行 灭 菌。7.7 茎 尖 剥 离将 消 过 毒 的 种 芽 置 于 40 倍 体 视 显 微 镜 下，用 解 剖 针 逐 次 去 掉 幼 叶，直 至 露 出 光 滑 的 茎 尖，用 解 剖 刀切 取 带 1 2 个 叶 原 基(0.1 m m 0.3 m m)的 生 长 点，用 接 种 针 将 生 长 点 移 至 试 管 或 三 角 瓶 内 培 养，每 个容 器 接 种 一 个 生 长 点，酒 精 灯 上 烘 烤 试 管（瓶）口 和 纱 布 棉 球 纸 帽 或 封 口 膜（盖）后 封 口，在 管（瓶）壁 上 注 明 品 种、编 号 和 接 种 日 期 等 内 容。7.8 茎 尖 苗 培 养把 接 种 后 的 试 管 或 三 角 瓶 放 置 于 组 培 室 内 的 光 照 培 养 架 上 进 行 培 养。培 养 条 件 为 温 度 23 2、光 照 强 度 2 000 L x 3 000 L x、光 照 时 间 16 h/d，一 般 培 养 30 40d 看 到 茎 尖 明 显 伸 长 且 呈 绿 色，有 小 叶发 生 时 将 小 茎 芽 转 入 装 有 普 通 M S 培 养 基 的 试 管 内 进 行 培 养，继 续 生 长 并 形 成 根 系，经 4 5 个 月 可 发 育成 4 5 个 叶 片 的 小 植 株。随 后 将 茎 尖 苗 按 单 节 切 段，用 M S 培 养 基 进 行 培 养 而 形 成 株 系。7.9 病 毒 检 测按 株 系 随 机 抽 取 部 分 茎 尖 苗 进 行 病 毒 检 测。按 6.1.3 进 行 P S T V d 复 检，按 照 N Y/T 2678、N Y/T 40 1采 用 D A S-E L I S A、R T-P C R 方 法 进 行 P V X、P V Y、P V S、P V A、P V M、P L R V 检 测；无 阳 性 反 应 的 再 用指 示 植 物 方 法 鉴 定，最 后 选 留 达 到 G B 18133 要 求，无 P S T V d、P V X、P V Y、P V S、P V A、P V M、P L R V的 株 系 作 为 脱 毒 试 管 苗。7.10 种 性 鉴 定利 用 脱 毒 试 管 苗 生 产 少 量 原 原 种，按 N Y/T 1963 或 G B/T 28660 进 行 田 间 或 室 内 品 种 鉴 定。经 鉴 定，未 发 生 变 异 的 株 系 作 为 脱 毒 核 心 试 管 苗。7.11 脱 毒 基 础 试 管 苗 保 存脱 毒 核 心 试 管 苗 经 扩 繁 后 形 成 脱 毒 基 础 试 管 苗。保 存 脱 毒 基 础 试 管 苗 用 M S 培 养 基 作 为 基 础 培 养 基，试 管 口 用 铝 箔 等 材 料 封 口，保 存 条 件 为 温 度 10、光 照 强 度 500 L x 1 000 L x。在 M S 培 养 基 中 加 入 4%5%甘 露 醇，可 保 存 11 个 月 以 上；在 M S 培 养 基 中 加 入 50 m g/L B 9 可 保 存 近 2 年 时 间。基 础 苗 保 存 时，标 签应 符 合 G B 20464 的 要 求。8 脱 毒 试 管 苗 扩 繁8.1 材 料经 病 毒 复 检 合 格 的 脱 毒 基 础 试 管 苗。8.2 培 养 基 制 备DB14/T 630 201 578.2.1 固 体 培 养 基选 用 M S 培 养 基。按 5.1 配 方 将 配 制 好 的 M S 培 养 基 分 装 于 培 养 瓶 中，220 m L 的 培 养 瓶 可 装 入 20 m L,采 用 透 气 盖 时 可 适 当 增 量，然 后 按 6.4 的 要 求 进 行 高 压 蒸 汽 灭 菌。8.2.2 液 体 培 养 基扩 繁 定 植 苗 时，可 采 用 不 含 琼 脂 的 M S 液 体 培 养 基，用 量 较 固 体 培 养 基 适 当 减 少，瓶 内 放 入 方 形 滤纸 架 桥，然 后 按 6.4 的 要 求 进 行 高 压 蒸 汽 灭 菌。8.3 扩 繁 准 备操 作 环 境 净 化 消 毒 及 器 械 灭 菌 按 6.5 的 方 法 进 行，无 菌 操 作 按 6.6 的 规 定 执 行。操 作 前，将 基 础 苗 瓶表 面 用 75%乙 醇 纱 布 擦 拭 后，放 置 于 超 净 工 作 台 上。8.4 试 管 苗 扩 繁打 开 脱 毒 基 础 试 管 苗 瓶，用 弯 尖 手 术 剪 按 单 节（1个 腋 芽、1 个 叶 节）切 段，转 移 到 培 养 瓶 中，用 长柄 枪 型 镊 扦 插 或 平 铺 到 培 养 基 上，220 m L、直 径（胴 径）62 m m 的 培 养 瓶 可 扦 插 20 25段。封 口 后，在瓶 外 壁 上 注 明 品 种、日 期 及 其 它 信 息。将 培 养 瓶 放 置 于 光 照 培 养 架 上，培 养 条 件 按 6.8 执 行，培 养 20 30d 即 可。8.5 污 染 苗 处 理经 常 检 查 组 培 室，发 现 污 染 苗 应 拧 紧 瓶 盖，立 即 移 出 组 培 室 外 按 6.4 的 规 定 进 行 高 压 蒸 汽 灭 菌 处 理。灭 菌 后,按 6.3.2 清 洗 培 养 容 器。9 试 管 薯 诱 导9.1 生 产 条 件仪 器 设 备、试 剂 按 第 4章 准 备，M S 液 体 培 养 基 按 7.2.2 配 制。9.2 壮 苗 培 养在 超 净 工 作 台 上，将 试 管 苗 的 顶 芽 和 基 部 剪 去，剪 成 带 有 4 6 个 叶 片（茎 节）的 茎 段，平 铺 于 培 养容 器 中 的 M S 液 体 培 养 基 纸 桥 上，每 瓶 4 5 个 茎 段。在 昼 间 温 度 23 2、夜 间 温 度 16 20 和光 照 强 度 2 000 L x 3 000 L x、光 照 时 间 16 h/d 的 条 件 下 静 置 培 养，3 4 周 可 长 成 壮 苗。同 时 将 剪 去 的 顶芽 转 接 到 另 外 装 有 M S 固 体 培 养 基 的 培 养 瓶 中，培 养 成 试 管 苗。9.3 试 管 薯 诱 导在 超 净 工 作 台 上，将 培 养 容 器 中 多 余 的 液 体 培 养 基 用 吸 管 吸 出 后，加 入 诱 导 结 薯 的 液 体 培 养 基。选用 M S 液 体 培 养 基（其 中 蔗 糖 80 g/L）+6-B A 5 m l/L+C C C 500 m g/L+活 性 炭 5 g/L，220 m L 培 养 瓶 可 装 入30 m L 培 养 基，置 于 温 度 18 20，光 照 强 度 2 000 L x 3 000 L x、光 照 时 间 8 h/d 或 24 h/d 黑 暗 条 件 下诱 导 结 薯。1 2 周 后，植 株 上 陆 续 形 成 小 块 茎。9.4 收 获 及 贮 藏将 诱 导 的 小 块 茎 继 续 培 养 5 6 周 后 即 可 收 获 试 管 薯。试 管 薯 用 自 来 水 冲 洗 干 净，放 在 阴 凉、通 风 处晾 干，装 入 保 鲜 袋，在 3 4 条 件 下 贮 藏，内 外 标 签 应 符 合 G B 20464 的 要 求。DB14/T 630 201 58_ _ _ _ _