肥料中海藻酸含量测定 分光光度法DB37／T 3314-2018.pdf

ICS 71.040.40 G20 DB37 山东省 地 方 标 准 DB 37/T 3314 2018 肥料中海藻酸含量测定 分光光度法 Determination of Alginic Acid in Fertilizer-Spectrophotometric 2018-06-12 发布 2018-07-12 实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 3314 2018 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出 的规则起 草。本标准由山 东省质量 技术监督 局提出。本标准由山 东化工标 准化技术 委员会归 口。本标准起草 单位：山东 省产品质 量检验研 究院、青 岛海大生 物集团有 限公司、青岛海力 源 生物科技有限公司、山 东洁晶集 团股份有 限公司、济南阿波 罗甲壳素 肥业有限 公司、济 南高新区 阿 波罗甲壳素 工程技术研究 中 心。本标准主要 起草人：刘 金凤、焦毅、王景超、于 晓菲、齐云、刘鹏飞、赵丽芳、商 姗姗、于军、张娟、单俊伟、张守福、林成彬、刘有利。DB37/T 3314 2018 1 肥料中海藻酸含量测定 分光光度法 1 范围 本标准规定 了采用硫 酸-咔唑 分光光 度法和间 羟基联 苯分光光 度法测定 肥料中 海藻酸含 量 的试验方法。本标准适用 于以海藻 为原料加 工制造的 海藻酸肥 料。硫酸咔唑显 色法不适 用于含硝 酸根、葡萄 糖等中性 糖类物质 及其它在 比色过程 中产生干 扰 的海藻酸肥料。间羟基联苯 显色法不 适用于含 硝酸根、腐植酸类 物质及其 它在比色 过程中产 生干扰的 海 藻酸肥料。2 规范性引用 文件 下 列文件对 于本文件 的应用是 必不可少 的。凡是注 日期的引 用文件，仅所注日 期的版本 适 用于本文件。凡是不 注日期的 引用文件，其最新 版本（包 括所有的 修改单）适用于本 文件。GB/T 6682 分析实验 室用水规 格和试验 方法 HG/T 2843 化肥产品 化学分析 常用标准 滴定溶液、标准溶 液、试剂 溶液和指 示剂溶液 3 硫酸咔唑显 色法 3.1 方法原理 海藻 酸在 强 酸条 件下 水 解为 甘露 糖 醛酸 和古 罗 糖醛 酸,这 两种 糖醛 酸 可在 强酸 中 与咔 唑 缩合 反应成为紫红色 化合物，在550 nm 处测 定其吸光 度，在 一定浓度 范围内，该化合物 的吸光度 与 糖醛酸浓度 成正比例 关系，由此可 以用分光 光度法测 定。3.2 试剂或材料 本标准中所 用试剂、水和溶液 的配制，在未注明 规格和配 制方法时，应符合HG/T 2843 的 规定。3.2.1 浓硫酸：分 析纯。3.2.2 无水乙醇：分析纯。3.2.3 咔唑-乙醇溶 液：（C12H9N）=2 g/L。称取 0.20 g 咔唑(准确至 0.0002 g)，溶于 100 mL 无水乙醇中。3.2.4 海藻酸钠标 准品，纯 度 99.9%。3.2.5 海藻酸钠标 准 贮备 溶 液：（海藻酸钠）=1.000 g/L。准 确称取海 藻酸钠标 准样品 0.1 g（准确至 0.0002 g），置于 100 mL 烧杯 中，用少 量水溶解 后，全部 转移到 100 mL 容 量瓶中，用蒸馏水 定容至刻度。3.3 仪器设备 3.3.1 分光光度计，带有光 程为 1 cm 的吸收池，可在 550 nm 处 测量。3.3.2 分析天平：感量精度为 0.0001 g。DB37/T 3314 2018 2 3.3.3 恒温水浴。3.4 分析步骤 3.4.1 试样的制备 固体样品缩 分至约100 g，将其 迅速研磨 至全部通 过0.50 mm 孔径试验 筛（如样 品潮湿，可 通过1.00 mm试验筛），混合 均匀，置于洁净、干燥 容器中；液体样 品经多次 摇动后，迅速取 出约100 mL，置于洁净、干燥容 器中。3.4.2 试样溶液的 制备 称取约0.1 0.5 g（精 确至0.0002 g）样 品，置于100 mL 容 量瓶中，加 水定容 至刻度，混 匀，必要时干过滤，得 试样溶 液A。3.4.3 标准曲线的 绘制 取6 个25 mL 刻度试 管，准确 移取0.0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL 海 藻 酸钠标准溶液（3.2.5），然后 再分别准 确加入3.0 mL、2.8 mL、2.6 mL、2.4 mL、2.2 mL、2.0 mL 蒸馏水至3 mL混匀，配成 一系列含 海藻酸钠 分别为0 mg、0.2 mg、0.4 mg、0.6 mg、0.8 mg、1.0 mg 的 标准工作溶 液。放入 冰 水浴 中，边振 荡边缓 慢加入浓 硫酸（3.2.1）10 mL（开 始要慢，约每秒1滴，待 加 入一半酸后 可增加至每秒2 滴），放 入沸水浴 中加热20 分钟，取 出刻度试 管，待温 度降至80 C，加入咔 唑-乙醇溶液0.3 mL，摇匀，室温下放 置45 min，在波长550 nm处，用1 cm 比色皿，以试剂空 白为参比 液，测其吸光 值，拟定标准曲 线方程。3.4.4 试样的测定 3.4.4.1 准确移取适 量试样溶液 A（如海藻酸 含量较高 可适当稀 释）置 25 mL 刻度 试管中，加蒸馏 水定容至 3mL，后续 步骤从“放入 冰 水 浴中，”与 标准系列（3.4.3）同样处 理。3.4.4.2 由于一般的 海藻酸样 品有颜色 干扰，对 于这种样 品需进行 空白试 验，去除颜 色干扰，方 法为除显色阶段用 0.3 mL 无水乙醇 代替咔唑 乙醇溶液 外，其余 操作同试 样溶液。3.4.5 空白试验 除不加试样 外，其他 步骤同试 样溶液。4 间羟基联苯 显色法 4.1 方法原理 海藻酸经含 四硼酸钠-硫酸作用 后，可 与间羟基 联苯反应 形成 紫红 色化合物，在 波长520 nm 处测定其吸光度。在 一定浓度 范围内，该化合物 的吸光度 与海藻酸 含量呈线 性关系，由此可以 用 分光光度法 测定。4.2 试剂和溶液 4.2.1 四硼酸钠-硫酸 溶液：0.0125 mol/L 四硼 酸钠的浓 硫酸溶液。准确称 取十水合 四硼酸钠 0.478 g，置于 100 mL 烧杯中，用 50 mL 浓硫酸溶 解后转移到 100 mL 容量瓶中，用浓硫 酸洗涤烧 杯 内壁，并如 容量瓶中重复 洗涤 2 次，最后用 浓硫酸定 容至 100 mL。DB37/T 3314 2018 3 4.2.2 氢氧化钠溶 液：（NaOH）=5 g/L。称取 5 g 氢 氧化钠，用蒸馏水 稀释至 1 L。4.2.3 间羟基联苯：（C12H10O）=1.5 g/L。称取间羟 联苯 0.15 g，溶于 100 mL 氢氧化钠溶 液（4.2.2）中，置于棕 色瓶中，阴暗处保 存。4.2.4 海藻酸钠标 准品：同 3.2.4。4.2.5 海藻酸标准 溶液：（海藻酸 钠）=0.100 mg/mL。准确 吸取 海藻酸标 准 贮备溶液（3.2.5）5.00 mL 至 50 mL 容量瓶中，用 蒸馏水定 容至刻度。使用前 配置。4.3 仪器和设备 4.3.1 分光光度计，带有光 程为 1 cm 的吸收池，可在 520 nm 处 测量。4.3.2 分析天平：感量 精度为 0.0001 g。4.3.3 恒温水浴。4.3.4 恒温振荡器。4.4 分析步骤 4.4.1 试样的制备 同3.4.1。4.4.2 试样溶液的 制备 同3.4.2。4.4.3 标准曲线的 绘制 取海藻酸钠 标准溶 液（4.2.5）0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL 于试 管 中，用蒸馏水补加至 0.5 mL。冰浴预冷 后加入3.0 mL 四硼 酸钠-硫 酸试液，配成一系 列含 海藻 酸 钠 分别为0 mg、0.01 mg、0.02 mg、0.03 mg、0.04 mg、0.05 mg 的标准工 作溶液。振摇混合，沸水浴5 min，以冰浴 冷却至室温后，加入50 L 间 羟基联苯（4.2.3），混匀，室温 放置10 min 后，在520 nm 波 长处，用1 cm比色皿，以 试剂空白 为参比液，测其吸 光值，拟 定标准曲 线方程。4.4.4 试样溶液的 测定 4.4.4.1 准确移取适 量试样溶液 A（如海藻酸 含量较高 可适当稀 释），与标 准系列（4.4.3）同 时 同样处理。4.4.4.2 由于一般的 海藻酸样 品有颜色 干扰，对 于这种样 品需进行 试验空白，去除颜 色干扰，方 法为除显色阶段用 50 L 氢氧化钠 溶液代替 间羟联苯 溶液外，其余操作 同试样溶 液。4.4.5 空白试验 除不加试样 外，其他 步骤同试 样溶液。5 结果的表述：以质量分数 表示的海 藻酸含量 错 误！未找到 引用源。数值以%表示，按式（1）计算：100 8839.01000100)m(0 1 V mm.(1)式中：DB37/T 3314 2018 4 m1 从标准 曲线查得 试样溶液 中海藻酸 质量的准 确数值，单位为毫 克（mg）；m0 空白中 海藻酸质 量的准确 数值，单 位为毫克（mg）；m 试样质 量，单位 为克（g）；V 移取试 样 溶液A 的体积，单位为毫 升（mL）；1000 毫克 转换为 克 的系数；0.8839 海藻酸钠 换算为海 藻酸的系 数。6 允许差 平行测定结 果和不同 实验室测 定结果的 允许差应 符合表1要求 表1 平行测定结 果和不同 实验室测 定结果的 允许差 海藻酸 含量，%平行结 果测 定的 绝对 差值，%不同实 验室 测定 结果 的绝 对差 值，%2.0 0.2 0.4 2.0 5.0 0.5 1.0 5.0 1 0.0 1.0 2.0 10.0 2.0 4.0 _