玉米秸秆低温高效降解复合菌系筛选方法DB15／T 968-2016.pdf

ICS 65.020.20 B 05 备案号：49427-2016 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 968 2016 玉米秸秆 低温高效 降解复合 菌系筛选 方法 2016-03-15 发布 2016-06-15 实施 内 蒙 古 自 治 区 质 量 技 术 监 督 局 发布 DB15/T 968 2016 I 前 言 GB/T 1.1-2009 DB15/T 968 2016 1 玉米秸秆 低温高 效降解复 合菌系 筛选方法 1 范围 4 15 2 规范性 引用 文件 GB/T 6682 3 术语和 定义。3.1 纤维素 酶 cellulases 3.2 纤维素 酶活 性 cellulase activity 1 min 1 mol U/mL U/g 3.3 滤纸酶 活 性 filter paper activity 1 g 1mL 50 pH pH 4.8 pH 6.0 1 h 1 mg 1 U/g U/mL 3.4 内切-1,4-葡 聚糖 酶活 性 endoglucanases 1 g mL 50 pH pH 4.8 pH 6.0 1 h 1 mg 1 U/g U/mL 3.5 外切-1,4-葡 聚糖 酶活 性 cellobiohydrolases DB15/T 968 2016 2 1 g 1 mL 50 pH pH 4.8 pH 6.0 1 h 1 mg 1 U/g U/mL 3.6-葡 萄糖 苷酶 活性-glucosidase 1 g mL 50 pH pH 4.8 pH 6.0 1 h 1 mg 1 U/g U/mL 4 缩略语 FPA(Filter paper activity)Cx-1,4-(Endoglucanases)C1-1,4-(Cellobiohydrolases)CB-(-glucosidase)5 筛选程 序 5.1 菌源样 品的 采集 1 kg 5.2 富集培 养 10%A 15 d 20 d 5%10%4 5 5.3 继代培 养 5%10%A 25 5 5.4 低温驯 化培 养 25 1 4 5.5 产酶培 养 5%10%10 12 d 24 h 5.6 玉米 秸 秆降 解培 养 DB15/T 968 2016 3 5%10%10 15 d 5.7 玉米秸 秆低 温高 效降 解复 合菌系 初筛 0.5 U/g U/mL-1,4-1,4-1.0 U/g U/mL B 6 玉米秸 秆低 温高 效 降 解菌 系筛选 指标 1 表 1 玉米 秸秆 降解 微生 物筛选 指标 U/g U/mL-1,4-U/g U/mL-1,4-U/g U/mL-U/g U/mL%注 DB15/T 968 2016 4 A A 附 录 A（规范 性附 录）筛选 复 合细 菌 系 的试 验材 料 A.1 仪器设备 0.01(0.001 g)()(1 L)A.2 试剂和 材料 GB T 6682(C4H4KNaO6 2O)(200 g L)20.0 g 100 mL(0.1 mol L)(C6H8O7 2O)2.10 g 100 mL(0.1 mol L)(Na3C6H5O7 2O)2.94 g 100 mL pH 4.8 0.l mol/L-0.l mol/L 40 mL 0.l mol/L 60.0 mL DNS 3 5-3.15 g 500 mL 45 100 mL 91.0 g 2.50 g 2.50 g 1000 mL 7 d 6 注：DNS(1 mg/mL)105()1.000 g 1000 mL Whatman 1 50 mg mg 1%1 g 100 mL pH 4.8 0.l mol/L-0.5%0.5 g 100 mL pH 4.8 0.l mol/L-A.3 培养基 A.3.1 富集培 养基 A.3.1.1 富集 培养 基1 2.0 g/L 1.0 g/L DB15/T 968 2016 5 0.05 g/L 2.0 g/L 0.2 g/L 1 cm 5 g/L(1 cm 2 cm)1 L A.3.1.2 富集 培养 基2 5 g/L 1 g/L 5 g/L 5 g/L(1 cm 2 cm)1 cm 1 L A.3.2 继代培 养基 2.0 g/L 1.0 g/L 0.0 5g/L 2.0 g/L 0.2 g/L 5 g/L(1 cm 2 cm)1 L A.3.3 产酶培 养基 0.5 g/L 2.0 g/L 1.0 g/L 0.6 g/L 0.05 g/L 0.016 g/L 0.017 g/L 0.02 g/L 0.2 g/L 1 L A.3.4 玉米秸 秆降 解培 养基 50 g/L(1 cm 2 cm)15 g/L 3 g/L 3 g/L 0.1 g/L 5 g/L DB15/T 968 2016 6 1 g/L 0.1 g/L 0.05 g/L 0.016 g/L 0.014 g/L 0.02 g/L 1 L DB15/T 968 2016 7 B B 附 录 B（规范 性附 录）复合菌 系降 解效 果测 定方 法 B.1 复合菌 系纤 维素 酶活 性测定 B.1.1 样品的 制备 B.1.1.1 液体样 品 2 mL 5 mL 4 6000 rpm/min 10 min B.1.1.2 固体样 品 0.1 g 1.0 g 10 mL 30 min 4 6000 rpm/min 10 min B.1.2 葡萄糖 标准 曲线 绘制 9 1 mg/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 mL 3.0 mL 3,5-DNS 10 min 25 mL 540 nm OD OD 表B.1 葡萄 糖标准 曲线 绘制 1 2 3 4 5 6 7 8 9 mg/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 DNS 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 5 B.1.3 滤纸酶 活 性（FPA）测定 方 法 4 25 mL 0.2 mL pH=4.8 1.8 mL 0.2 mL pH=4.8 1.8 mL 50 60 min DNS 3 mL 10 min 25 mL 540 nm OD 4 DB15/T 968 2016 8 B.1.4 内切-1,4-葡 聚糖 酶活 性（Cx）测定 4 25 mL 0.2 mL 1.8 mL 1%0.2 mL pH=4.8 1.8 mL(50 30 min DNS 3 mL 10 min 25 mL 540 nm OD 4 B.1.5 外切-1,4-葡 聚糖 酶活 性（C1）测定 4 25 mL 0.2 mL pH=4.88 1.8 mL pH=4.8 1.8 mL 50mg(50 60 min DNS 3 mL 10 min 25 mL 540 nm OD 4 B.1.6-葡 萄糖 苷酶 活 性（CB）测定 4 25 mL 0.2 mL 1.8 mL 0.5%0.2 mL pH=4.8 1.8 mL(50 30 min DNS 3 mL 10 min 25 mL 540 nm OD 4 B.2 计算方 法 B.2.1 纤维素 酶活 性计算 X=A/(M t n B.1 X 1 min 1 mol U/mL U/g A mg M 180.2 180.2 g/moL T min 1000 1(mmol)=1000(moL)n B.2.2 秸秆降 解率 计算 D=W0-W1/W0 B.2 D(%)W0 g W1 g