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ICS 65.020 B 66 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 29372017 霍山铁皮石斛枫斗质量检测技术规程 Technical regulation for the quality inspection of Dendrobium officinale Fengdou from Dendrobium officinale Kimura et Migo growing in Huoshan 文稿版次选择 2017-09-15发布 2017-10-15实施安徽省质量技术监督局发布 DB34/T 29372017 I 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由皖西学院提出。本标准由安徽省林业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：皖西学院、霍山县石斛（灵芝）产业发展办公室、九仙尊霍山石斛股份有限公司、霍山县天下泽雨生物科技发展有限公司、霍山县长冲中药材开发有限公司、安徽省霍山县益生源生态农业开发有限公司、霍山地道石斛农民专业合作社、中国中药霍山石斛科技有限公司、安徽斛生记生物科技有限公司、金寨永惠康有机农业科技有限公司、六安正元中药材科技有限公司、安徽霍山县亿康中药材科技发展有限公司、安徽颂褀生物科技开发有限公司、金寨县金泽石斛种植专业合作社。本标准起草人：陈乃东、张莉、陈乃富、陈存武、韩邦兴、姚厚军、戴军、张珍林、吴进东、谷仿丽、赵群、宋向文、臧永军、陈艳君、李名海、方绣程、李世海、何祥林、张军、汪海、孙大学、张远国、戴亚峰、周武、李俊、李义鹏、储蓄、张家泽、张质彬、戴任、姚皖湘、邓辉。DB34/T 29372017 1 霍山铁皮石斛枫斗质量检测技术规程 1 范围 本标准规定了霍山铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo growing in huoshan）枫斗质量检测的术语和定义、质量要求和质量检测方法。本标准适用于霍山铁皮石斛枫斗的质量检测。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 5009.11 食品安全国家标准 食品中总砷及无机砷的测定 GB 5009.12 食品安全国家标准 食品中铅的测定 GB 5009.13 食品安全国家标准 食品中铜的测定 GB 5009.15 食品安全国家标准 食品中镉的测定 GB 5009.17 食品安全国家标准 食品中总汞及有机汞的测定 GB 5009.22 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定 中国药典（2015年版）3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 霍山铁皮石斛 Dendrobium officinale Kimura et Migo growing in Huoshan 原产于霍山及其邻近金寨、岳西等大别山区的铁皮石斛。3.2 霍山铁皮石斛枫斗 Dendrobium officinale Fengdou from Dendrobium officinale Kimura et Migo growing in Huoshan 以霍山铁皮石斛茎为原料，经分拣、清洗、炒制、揉搓、绕条、烘焙、整形、复火等工序制成的螺旋状或弹簧状干品。4 质量要求 4.1 感官指标 感官指标见表1。DB34/T 29372017 2 表1 霍山铁皮石斛枫斗外观等级标准 等级 标准 特级 大小、色泽一致。表面呈黄绿色、灰绿色或略带金黄色，紧凑螺旋状或弹簧状，环绕紧密，嚼之有浓厚粘滞感，清香。一级 大小、色泽基本一致。表面呈黄绿色、灰绿色或略带金黄色，紧凑螺旋状或弹簧状，环绕紧密，嚼之有浓厚粘滞感，清香。二级 大小、色泽相近。表面呈黄绿色、灰绿色或略带金黄色紧凑螺旋状或弹簧状，环绕紧密，嚼之有粘滞感，香味清淡。4.2 理化指标 理化指标见表2。表2 霍山铁皮石斛枫斗理化指标 项目 铁皮枫斗 水分（）12 总多糖（以葡萄糖计）（）25 总生物碱（）0.02 甘露糖（）1338 甘露糖与葡萄糖含量比 2.48.0 铅（mg/kg）5.0 镉（mg/kg）0.3 砷（mg/kg）2.0 汞（mg/kg）0.2 铜（mg/kg）20.0 黄曲霉素B1（g/kg）5 5 质量检测方法 5.1 抽样方法 随机取样，3 次重复，每次重复至少含有 30 个霍山铁皮石斛枫斗。5.2 感官评价方法 观测每次样品中枫斗的色泽，外形；咀嚼品尝，对抽检样品进行感官评价，按表3 标准判定枫斗等级。表3 霍山铁皮石斛枫斗质量感官评价标准 色泽均一度 口感 味 等级 色泽不一致枫斗检出率5 咀嚼胶粘感强 自然清香 特级 色泽不一致枫斗检出率15 咀嚼胶粘感较强 清香无异味 一级 色泽不一致枫斗检出率25 咀嚼有胶粘感 无异味 二级 DB34/T 29372017 3 5.3 规格检测方法 测定每次样品中每个枫斗重量、环数，按表4 指标判定枫斗等级。表4 霍山铁皮石斛枫斗规格检测标准 称重 环数一致性 等级 重量差10 环数一致性96 特级 重量差20 环数一致性93 一级 重量差30 环数一致性93 二级 5.4 等级判定 感官、规格中以最低等级指标评定等级。理化指标中有一项不符合本标准要求即为不合格。5.5 理化指标测定 5.5.1 水分检测 按中国药典（2015版）第四部 通则 0832 水分测定第二法的规定执行。5.5.2 多糖的检测 按附录A 的规定执行。5.5.3 生物碱的检测 按附录B 的规定执行。5.5.4 甘露糖的含量的检测 按附录C 的规定执行。5.5.5 甘露糖与葡萄糖峰面积比检测 按附录D 的规定执行。5.5.6 铅的测定 按 GB 5009.12 的规定执行。5.5.7 镉的测定 按 GB 5009.15 的规定执行。5.5.8 砷的测定 按 GB 5009.11 的规定执行。5.5.9 汞的测定 按 GB 5009.17 的规定执行。5.5.10 铜的测定 DB34/T 29372017 4 按 GB 5009.13 的规定执行。5.5.11 黄曲霉毒素的检测 按 GB 5009.22 的规定执行。DB34/T 29372017 5 A A 附 录 A（规范性附录）霍山铁皮石斛枫斗多糖含量测定方法 A.1 仪器 紫外可见分光光度计 A.2 试剂 葡萄糖标准品 苯酚 硫酸 无水乙醇（分析纯）A.3 方法 A.3.1 标准品溶液的制备 取 105干燥至恒重的无水葡萄糖标准品适量，精密称定，加水溶解并定量制成每 1.0 mL 中含 90 g 葡萄糖的溶液，即得。A.3.2 标准曲线的制备 量取对照品溶液 0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL 0.8 mL、1.0 mL，分别置 10.0 mL 具塞试管中，各加水补至 1.0 mL，精密加入 5苯酚溶液 l.0 mL(临用配制），摇匀，再精密加硫酸 5.0 mL，摇匀，置沸水浴中加热 20 分钟，取出，置冰浴中冷却 5 分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（通则 0401)，在 488 nm 的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。A.3.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约 0.3 g，精密称定，加水 200 mL，加热回流 2 小时，放冷，转移至 250 mL 量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并人同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 2.0 mL，置 15 mL 离心管中，精密加入无水乙醇 10.0 mL，摇匀，冷藏 1 小时，取出，离心(转速为每分钟 4000 转）20 分钟，弃去上清液（必要时滤过），沉淀加 80乙醇洗涤 2 次，每次 8.0 mL，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至 25 mL 量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。A.3.4 测定法 量取供试品溶液 1.0 mL，置 10.0 mL 具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入 5苯酚溶液 l.0 mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量，计算，即得以葡萄糖计多糖含量。DB34/T 29372017 6 B B 附 录 B（规范性附录）霍山铁皮石斛枫斗生物碱含量测定方法 B.1 仪器 紫外可见分光光度计 B.2 试剂 pH 4.5 缓冲液：0.2 mol/L pH=4 的邻苯二甲酸氢钾，用 0.2 mol/L 调至 pH=4.5。0.04溴甲酚氯溶液：溴甲酚氯 40.0 mg，加 100 mL pH 4.5 缓冲液，过滤。氯仿（分析纯）氢氧化钠 无水乙醇（分析纯）氨水 B.3 方法 B.3.1 标准曲线的制备 称取石斛碱对照品 1.0 mg，置 100 mL 容量瓶，加氯仿至刻度。精取 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分别置于分液漏斗中，用氯仿稀释至 10.0 mL，加入 pH 4.5 缓冲液 5.0 mL 和 0.04溴甲酚氯溶液 2.0 mL，振摇 3 分钟，静置 30 分钟，氯仿层通过经氯仿浸泡处理并干燥的药棉滤过。取续滤液 5.0 mL，加 0.01 mol/L 氢氧化钠无水乙醇溶液 1.0 mL，摇匀。以氯仿 10.0 mL，同法操作，作为空白对照，于 620 nm 处测得吸光度。B.3.2 样品的测定 称取霍山石斛枫斗粗粉 0.5 g，用适量氨水湿润，密封放置 30 分钟，精密加入氯仿 10.0 mL，置水浴上加热回流 2 小时，冷却后称重，补足失重，过滤。精取续滤液 2.0 mL 于分液漏斗中，加氯仿液 8.0 mL（稀释 5 倍），作为样品液。将样品液按标准曲线项同法操作。同时精密量取石斛碱对照品溶液 2.0 mL置分液漏斗中，同法操作，测得吸光度，代入标准曲线，计算总生物碱含量。DB34/T 29372017 7 C C 附 录 C（规范性附录）霍山铁皮石斛枫斗甘露糖含量测定的方法 C.1 仪器 高效液相色谱仪 C.2 试剂 乙腈（色谱级）盐酸氨基葡萄糖 甘露糖标准品 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 三氯甲烷(分析级)C.3 方法 C.3.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.02 mol/L 的乙酸铵溶液（20:80)为流动相；检测波长为 250 nm。理论板数按甘露糖峰计算应不低于 4000。C.3.2 校正因子测定 取盐酸氨基葡萄糖适量，精密称定，加水制成每 l.0 mL 含 12.0 mg 的溶液，作为内标溶液。另取甘露糖对照品约 10.0 mg，精密称定，置 100 mL 量瓶中，精密加入内标溶液 l mL，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取 400 l，加 5.0 mol/L 的 PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）甲醇溶液与 0.3 mol/L的氢氧化钠溶液各 400 l，混匀，70水浴反应 100 分钟。再加 0.3 mol/L 的盐酸溶液 500 l，混匀，用三氯甲烷洗涤 3 次，每次 2 mL，弃去三氯甲烷液，水层离心后，取上清液 10 l，注入液相色谱仪，测定，计算校正因子。C.3.3 测定法 取铁皮石斛枫斗粉末（过三号筛）约 0.12 g，精密称定，置索氏提取器中，加 80乙醇适量，加热回流提取 4 小时，弃去乙醇液，药渣挥干乙醇，滤纸筒拆开置于烧杯中，加水 100 mL，再加入内标溶液 2.0 mL，煎煮 1 小时并时时搅拌，放冷，加水补至约 100 mL，混匀，离心，吸取上清液 1.0 mL，置安瓿瓶或顶空瓶中，加 3.0 mol/L 的盐酸溶液 0.5 mL，封口，混匀，110水解 1 小时，放冷，用 3.0 mol/L 的氢氧化钠溶液调节 pH 值至中性，吸取 400 l，照校正因子测定方法，自“加 0.5 mol/L 的 PMP 甲醇溶液”起，依法操作，取上清液注入液相色谱仪，测定，即得。C.4 计算 DB34/T 29372017 8 按公式（C.1）计算铁皮石斛枫斗样品甘露糖含量：AsMs Ai f甘露糖含量（）.(C.1)式中：f 为甘露糖含量测试的校正因子,f=(As/ms)/(Ar/mr)；As 和 Ar 分别为内标物和对照品的峰面积或峰高；Ms 和 mr 分别为加入内标物和对照品的量；Ai 和 As 分别为供试品和内标物的峰面积或峰高；Ms 为加入内标物的量。注：示量折算成为标示量的百分含量，或根据稀释倍数和取样量折算成百分含量。DB34/T 29372017 9 D D 附 录 D（规范性附录）比较霍山铁皮石斛枫斗甘露糖与葡萄糖含量的方法 D.1 仪器 高效液相色谱仪 D.2 试剂 乙腈（色谱级）盐酸氨基葡萄糖 甘露糖标准品 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 三氯甲烷(分析级)D.3 方法 取葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每 l.0 mL 含 50 l 的溶液，作为对照品溶液。精密吸取 0.4 mL，按(附录C 甘露糖含量的测定方法)甘露糖项下方法依法测定。在供试品色谱图中比较甘露糖和葡萄糖的峰面积的比值。_
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