黑木耳枝条菌种生产技术规程DB22／T 1583-2012.pdf

ICS 67.080.20 B 31 备案号：35057-2012 DB22 吉林省 地方标准 DB 22/T 1583 2012 黑木耳枝条菌种生产技术规程 Technical regulations of branches strains of Auricularia auricula 2012-09-15发布 2012-10-31实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T 1583 2012 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由吉林省林业厅提出并归口。本标准起草单位：吉林省林业科学研究院、吉林农业大学、九台市怡景园林绿化公司、吉林省白 河林业局。本标准主要起草人：付晓霞、刘晓龙、刘桂英、王广发、崔铁花、田恩静、齐义杰、冀瑞卿、张英 楠、孟庆刚。DB22/T 1583 2012 1 黑木耳枝条菌种生产技术规程 1 范围 本标准规定了黑木耳枝条菌种生产场地、厂房设置和布局、设 备 设 施、使用品 种、生产 工艺流程、技术 要 求 和 贮存运输 要 求。本标准 适用于 黑木耳 原 种生产。2 规范性引用文件 下列文件对于 本 文件 的 应用是必不可少 的。凡是注日期 的 引用文件，仅所注日期 的 版 本 适用于 本 文 件。凡是不注日期 的 引用文件，其最新版 本（包括所有 的 修改 单）适用于 本 文件。GB 4789.28 食品卫 生 微 生 物 学 检验 染色法 培养基 和 试剂 GB 9688 食品包装用聚丙烯成型品卫 生标准 GB/T 191 包装储运图示 标 志 NY/T 1742-2009 食用 菌菌种 通用技术 要 求 3 术语和定义 下列术语 和定义 适用于 本 文件。3.1 枝条菌种 branches strains 利用硬杂 木 短 木条 作为原材料，经过处理 并 添加其它辅料后进行高压 灭 菌、冷却接 种、恒温 培养 生 产的菌种。4 技术要求 4.1 技术人员 菌种厂 应有 与固体 菌种生产 所 需 的 相 对应 专 业 技术 人 员，专 业 技术 人 员 应 具 有 两年以上 菌种生产 经验。4.2 场地选择 地 势平坦、高 燥，通 风良好，排水畅 通，交 通 便 利；周边 300 m之内无禽畜舍，无垃圾 场，无污水和 其 他污 染 源，100 m内无 食用 菌 栽 培 场。4.3 厂房与设施 有 晾晒 场、原料 库、配 料 室、灭 菌 室、冷却室、接 种 室、培养 室、贮 藏室、检验 室等，厂房 建造从 结构 和 功能上能满足 黑木耳枝条菌种生产的 基 本 需 要。4.3.1 晾晒场 DB22/T 1583 2012 2 要 求 地 势平坦 高 燥、通 风良好、光 照 充足、空旷宽阔。4.3.2 原料库 要 求通 风干燥、防雨防晒防鼠，并 远离火源。4.3.3 配料室 要 求 在室内，有 水源 和 电源；如在室外还 应有 天棚，要 防雨防晒防鼠。并 配 有 蓄水池、天平、磅秤、搅拌机 和 分 装 设 备 等。4.3.4 灭菌室 要 求 水电方便，通 风良好，并 配 备高压 灭 菌设 备 等。4.3.5 冷却室 清洁、防尘，易散热，并 配 备 排风 扇 等 降 温 除湿 设 备。4.3.6 接种室 设置 缓冲间，防尘 换气性 好，墙 内 壁 和 屋顶 光 滑。接 种 室 安 装 空 调 设 备，并 配 备 接 种 箱或超净 工作 台 等无 菌 操 作 设 备 及常 规 接 种 工 具。4.3.7 培养室和贮藏室 培养 室 安 装通 风 设 备，墙 内 壁 和 屋顶 光 滑。培养 室 和 贮 藏室 利于 控 温 保 温。并 配 备 恒温 培养 箱、培养 架 和 保 藏 冰箱 等 设 备。4.3.8 菌种检验室 水电方便，检验 设 备 和 仪器 齐 备。4.3.9 厂房布局 按照 食用 菌 固体 菌种生产 工艺流程 合 理 安 排 布局。4.4 使用品种 4.4.1 品种 从具 有 相 应技术 资质 的 供 种单位 引进，种 性 清 楚，并 经 省 级 以上 农 作物品 种 审 定 委 员 会审 定的 品 种。4.4.2 种源质量检验 菌种生产单位 每 年在 种 源 扩 大生产 前 应进行 菌种 质量 和种 性 检验，包括 纯度、活力、菌 丝长 势 的 一 致性、菌 丝 生 长速度、菌 落 外 观 等，并 做 出耳 试验，验 证 种 性。种 源 出耳 试验 方 法 及 种 源 质量 要 求应 符合 NY/T 1742-2009中 5.4的规定。4.4.3 移植扩大 母 种 仅用于 移植扩 大 原 种，一支母 种 移植扩 大 原 种 不 超 过 6瓶（袋）；原 种 只 能 用于 栽 培。4.5 工艺流程 DB22/T 1583 2012 3 准 备 枝条 浸泡 装 袋（瓶）灭 菌 灭 菌 效果 检 查 冷却接 种 菌 丝 培养 检 查 成品 入 库 4.6 生产过程中的技术要求 4.6.1 原种容器 每批次 菌种 容器 规 格 要 一致。可 以 使用 850 ml以 下、耐 126 高 温、无 色 或近 无 色、瓶 口 直径小 于 4 cm的 近透明塑 料 瓶，或（1517）cm（28 33）cm规 格、耐 126 高 温 的 塑 料 袋，并 符合 GB 9688的规定。塑 料 袋 应使用 棉塞或 无 棉塑 料 盖封袋 口。4.6.2 培养原料 化学 试剂 类 原料 如 硫酸镁、磷酸二氢钾 等 要 使用 化学 纯级 试剂；天 然 材料 如 枝条，木 屑，麦麸、米 糠 等 要 新 鲜、无 虫螨、无 霉变，洁 净 干燥。4.6.3 枝条准备 根据当 地 原料 资 源 使用适 宜 的 培养基 配方（见附录 A.1和 A.2），严 格 掌握 常 规 培养基 的 含 水 量 和 pH值。选择 适 宜 黑木耳生 长 的 桦树、柞树、紫穗槐树、桑树 等 硬杂 木枝条 做 原料，要 求 枝条 直径 4 mm 7 mm，并 截 成 15 cm 18 cm长。也 可 选 用 这些树 种生产的 方便 筷。4.6.4 枝条处理 先将 枝条 或 方便 筷放 在 营 养 液 中 煮 1 h，然 后 在 营 养 液 中浸泡 12 h，浸泡 后 捞 出 沥 干。营 养 液 配方 为 马铃薯 200 g、蔗糖 20 g、硫酸镁 0.5 g、磷酸二氢钾 0.5 g。马铃薯煮汁 过 滤 后，添加 配方 中 其它物 质 后加 水 至 1000 ml。4.6.5 装袋（瓶）先 在 袋（瓶）底放 一 层 常 规 培养料（见附录 A.3），然 后 将 枝条 直 立 装 入袋（瓶）内，要 求 枝条 松 紧 适 度，在 最 上 层再撒 一 层 常 规 培养料后 封 好 袋（瓶）口。4.6.6 灭菌 装 袋（瓶）封 好 袋（瓶）口 后 在 4 h内 必 须 灭 菌，高压 灭 菌 0.12 Mpa 0.15 Mpa保 持 2 h。灭 菌 完毕 后 自然 降 压，不应 强制 降 压 冷却。灭 菌 时 防 止 棉塞 被 冷 凝 水 浸湿。4.6.7 效果 检 查 将 原 种 培养基经 无 菌 操 作 接 种 于 GB 4789.28中 规定的 营 养 肉汤 培养基 中，在 28 恒温 条 件下培养 48 h后检 查，无 微 生 物 长 出 为 灭 菌 合格。4.6.8 冷却 冷却室 使用 前 要 进行 清洁、除 尘 和 消毒 灭 菌 处理。将 灭 菌 后 的 料 袋（瓶）放 置 在冷却室 中 冷却 到 28 以 下。4.6.9 接种 4.6.9.1 接种室（箱）消毒 将 接 种 室（箱）打扫 干 净，搬 入母 种和 料 袋（瓶），再 用 国家 规定的 药 物进行 消毒，同时 用 紫 外 灯 照 射 30 min。DB22/T 1583 2012 4 4.6.9.2 无 菌 操作 在无 菌 室（箱）或超净 工作 台 上 严 格 按 无 菌 操 作 规 程进行 接 种。接 种 完 成后 及 时贴 好 标 签。接 种 室 每次 使用后，要 及 时 清 理 干 净，通 风 换气，台 面 用 75酒精擦拭消毒。4.6.10 培养 原 种 接 种 后 在 24 26 适 宜 培养 温 度 下进行 暗 光 培养，并 保 持 空 气 相 对 湿度 在 70 以 下，培养 室定 期通 风；培养后期 温 度降 至 20 22，并 加 强 通 风。菌 丝长 满 瓶（袋）后 继 续 培养 15 d 20 d，促进 菌 丝 向 枝条 内 部 生 长。4.6.11 检 查杂 菌 菌种 培养期 间 应 定 期检 查，及 时 拣 出 被 污 染 的 不 合格 菌种。4.6.12 标 签、标 志 出 售 的菌种 应 贴 标 签。注 明 品 种、接 种 日期、生产单位和地 址 电 话，外 包装 上 应有 防晒、防 潮、防倒 立、防 高 温、防雨、防 重 压 等 标 志，标 志应 符合 GB/T 191的规定。4.6.13 贮藏 运输 完 成培养 的菌种要 及 时 登记 入 库，低 温冷藏。要 求用 纸 箱 包装，不 能 用 塑 料 袋 包装。采 用 1 4 保 温 车 运输。4.6.14 留样待 检 枝条菌种 应 保 留样 本 备 查，每 个 批 号留样数 量 3袋（瓶），在 1 4 条 件下贮存，贮 藏 至 使用 者在 正 常 生产条 件下 该 批 菌种出 第 一 潮 耳。DB22/T 1583 2012 5 A A 附 录 A（规范性 附录）枝条原种培养 基 配方 A.1 枝条培养 基 阔 叶 树 枝条 90，阔 叶 树 木 屑 7.8，麸 皮 2，葡萄 糖 0.1，石膏粉 0.1。A.2 方 便筷 培养 基 方便 筷 90，阔 叶 树 木 屑 7.8，麸 皮 2，葡萄 糖 0.1，石膏粉 0.1。A.3 常 规木 屑 培养 基 阔 叶 树 木 屑 78，麸 皮 20，葡萄 糖 1，石膏粉 1，含 水 量 58 2，pH 66.5。