大豆种质资源抗胞囊线虫病鉴定技术规程DB14／T 1613—2023.pdf

ICS 65.020.20 CCS B 05 14 山西省地方标准 DB14/T 1613 2023 代替 DB14/T 1613-2018 大豆种质 资源抗胞 囊线虫病 鉴定技术 规程 2023-11-13 发布 2024-02-13 实施 山西省市 场监督 管 理局 发 布 DB14/T 1613 2023 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 病 圃建 设.1 5 鉴 定前 准备.1 6 鉴 定方 法.2 7 鉴 定圃 管理.2 8 调查.3 9 抗 性评 价.3 附录A（资 料性）调查 用表.4 附录B（资 料性）生理 小种鉴别.5 DB14/T 1613 2023 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。本文件代 替DB14/T 1613 2018 大豆 种质 资源抗 胞囊线虫 病鉴 定技术 规程，与DB14/T 1612 2018 相 比，除结 构调 整和 编辑性 改动 外，主要 技术 变化如 下：增 加了 病圃 建设（见 第3章）；增 加了 鉴定 圃管 理（见第3 章）；增 加了 调查 人及 记载 人的信 息（见附 录A）。本文件 由山 西省 农业 农村 厅提出、组 织实 施和 监督 检查。本文件 由 山 西省 市场 监督 管理局 对标 准的 组织 实施 情况进 行监 督检 查。本文件 由 山 西省 农业 标准 化技术 委员 会（SXS/TC19）归口。本文件 起草 单位：山 西农 业大学。本文件 主要 起草 人：陈妍、张海 平、聂萌 恩。2018 年首 次发 布 为 DB14/T 1613 2018；本次为 第一 次修 订。DB14/T 1613 2023 1 大 豆种质 资源抗胞 囊线虫 病鉴定技 术规程 1 范围 本文件 规定 了大 豆种 质资 源抗胞 囊线 虫鉴 定技 术的 病圃建 设、鉴 定试 验准 备、鉴定方 法、鉴 定圃 管理和抗 性评 价标 准。本文件 适用 于大 豆种 质资 源抗胞 囊线 虫抗 性鉴 定和 抗性评 价。2 规范性 引用 文件 本文件 没有 规范 性引 用文 件。3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。胞囊线 虫病 指大豆 胞囊 线虫 病，是由 病原物 大豆 胞囊 线虫（Heterodera Glycines Ichinode）感染 引起的 土传病害，其主 要症 状为 叶片 变黄，发育 不良，植株 矮 小，开 花少，结荚 少甚 至 不结荚。大 豆根 系根 瘤数 明显减少，且 不发 达。在 感 病初期，根 系附 着白 色、黄褐色 小颗 粒，后期 根系 开始腐 烂，导致 地上 部分 枯死。生理小 种 简称为“小 种”，在 形态 上相似 而在 培养 性状、生 理、生 化、病理（致 病力）或其 他特 性上 有 差 异的生物 型或 生物 群型。鉴别寄 主 用于鉴 别病 原物 生理 小种（菌系、毒 系）的抗 病性 不同的 一套 寄主 植物 品种。4 病圃建 设 立地条 件 病圃所 在地 块应 地势 平整，形状 规正，肥 力均 匀，排灌方 便，不受 阴庇，具 有人工 灌溉 措施。面积 根据鉴 定规 模确 定病 圃面 积，但 不应 小于100 m2。5 鉴定前 准备 DB14/T 1613 2023 2 塑钵制 备 将厚度0.1 mm 的透气性 塑 料膜裁 为宽26 cm，高22.5 cm 的小块，用订 书机 将其 制成宽11 cm，高22 cm 的袋状塑料 钵。接种病 土制 备 根据试 验需 要在 病圃 取适 量的病 土（大豆 胞囊 线虫 密度30个 胞囊/100 g 风 干 土），将病 土与 无 菌20目细 沙以2:1 的 比例 充分 混匀后 制备 成试 验病 土。6 鉴定方 法 田间病 圃法 6.1.1 选择 大 豆胞 囊线 虫密 度 30 个胞 囊/100 g 风干 土 的 病圃，当气 温大 于 20 时播种。6.1.2 穴播，行 距50 cm，株距13 cm。每份 材料 播 种 10 穴。6.1.3 每穴留 苗1 株。6.1.4 每30 个材 料设1 个 感病 对 照。6.1.5 同时种 植1 套生 理小 种鉴 别材料。病土塑 钵法 6.2.1 将试验 病土 装入 塑钵 至距 钵口 1 cm 处。6.2.2 将装好 土的 塑钵 依次 装入 塑料箱 中，放于 温室。6.2.3 将塑料 钵中 土壤 浇透，待 钵内土 壤干 湿程 度适 宜后 开始播 种。每钵 留 苗 3 粒 种子，表面 覆盖 病土1 cm。6.2.4 出苗后 每钵 留 苗 2 株，每 个品 种3 个 重复。6.2.5 每30 个材 料设1 个 感病 对 照。6.2.6 同时种 植1 套生 理小 种鉴 别材料，随 机摆 放。6.2.7 温室温 度保 持 在 25 30，含 水量 控制 在 50%60%。人工接 种鉴 定法 6.3.1 试验在 温室 中进 行。将待 鉴定的 种质 在育 苗盘 中育 苗，同 时播 种小 种鉴 别材 料。6.3.2 将出苗 后子 叶展 开、根系 发达、健壮 一致 的植 株移 栽到 装 有灭 菌沙 土的 塑钵 中，每 钵 2 株，三次重复。6.3.3 每30 个材 料设1 个 感病 对 照。6.3.4 提前在 病土 中种 植感 病品 种，在 胞囊 显盛 期，将根 系上的 胞囊 冲洗 下来，制 备成浓 度 为 1 000 个/ml 的卵 悬浮 液。6.3.5 待鉴定 材料 在移 栽 后 3 天 接种卵 悬浮 液 2 mL。6.3.6 温室温 度保 持 在 25 30，含 水量 控制 在 50%60%。7 鉴定圃 管理 播种后，应 及时 补充 水分，保持 土壤 湿润。及 时中 耕除草，鉴 定期 间不 使用 杀菌剂 和除 草剂。DB14/T 1613 2023 3 8 调查 待 感 病 对照 白 色胞 囊 突破根 系 表 皮时 即 可调 查。将待 调 查 植株 根 系上 的 土轻轻 抖 掉 或用 水 冲洗 干净、晾 干，统计 其根 上的 胞囊数。鉴 定调 查表 格见 附录A。9 抗性评 价 生理小 种鉴 别 大豆胞 囊线 虫生 理小 种划 分具体 见附 录B。鉴定有 效性 评价 感病对 照品种Lee 根系上 的 胞囊数 应在30.0 个以 上，抗性级 别达 高 感，视 为该 次鉴定 有效。抗性 级 别划 分 根据 根 系平 均 胞 囊数 进行 抗性 级 别划 分，划分 依据 见表1。表1 大豆对 胞囊 线虫 的 抗 性级 别 划分 依据 抗性级别 抗性类别 胞囊数与症状 0 免疫（I）（根系胞囊数为 0，植株生长 正常）1 高抗（HR）（0 根系胞囊数，植株正 常生长）3 抗（R）（3.0 根系胞囊数，植株 生长基本正常或部分矮黄）7 感（S）（10.0 根系胞囊数，植 株矮小，叶片发黄、结实少）9 高感（HS）（根系胞囊数30.0，植株不 结实，干枯死亡）重复鉴 定 当鉴定 结果为 抗或 高抗时（抗性 级别划分 依 据见 表1），应 进行重 复鉴 定确定 其抗性。若重 复鉴 定结果有 差异，以 抗性 级别 低的结 果为 准。确定 抗性 后，将 抗性 品种 移栽。DB14/T 1613 2023 4 附录A（资料 性）调查用 表 A.1 大豆抗 胞囊 线虫 鉴定 调查 表 大豆抗 胞囊 线虫 鉴定 调查 表见表A.1。表A.1 年 大豆 抗胞 囊线虫 鉴定 调查 汇总 表 播种日期：鉴定编号 品种名称 出苗日期 调查日期 胞囊数 平均胞囊数 病情指数 抗性评价 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 调查人：记载人：DB14/T 1613 2023 5 附录B（资料 性）生理小 种鉴 别 B.1 大豆胞 囊线 虫生 理小 种的 鉴别 B.1.1 一种为 传统 的Riggs 鉴别 模 式（大豆 胞囊 线虫 生理 小 种Riggs 鉴 别模 式见 表B.1），共4份 材料，分别为Pickett、Peking、PI88788、PI90763，根 据寄 主根系 平均 胞囊 指 数 来确 定大豆 胞囊 线虫 小种。B.1.2 一种为HG 分类 系统（大豆 胞囊线 虫生理 小种HG 鉴别 模式见 表B.2），辅 助鉴别 线虫是 否变异，共7 份材 料，分别 为PI548402、PI88788、PI90763、PI437654、PI209332、PI89772、PI548316。根据 寄主根系平 均胞 囊数 计算 胞囊 指数（FI），按 照表B.1和表B.2 划分 标准 确定 生理 小 种。FI=（供试品 种胞 囊数/感病 对照 品种 胞囊 数）10 0%(B.1)表B.1 大豆胞 囊线 虫生 理小 种 Riggs 鉴 别模 式 鉴别寄主 小种类型 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Pickett-+-+-+-+-Peking-+-+-+-+-+PI88788+-+-+-+-+PI90763-+-+-+-+-+注：+表示FI大于等于10%；-表示FI小于10%。表B.2 大豆胞 囊线 虫生 理小 种 HG 鉴别模 式 鉴别寄主 HG 分型 0 1 2 3 4 5 6 7 Pickett Peking+PI88788+PI90763+PI437654+PI209332+PI89772+PI548316+注：表示大于等于 感病对照品种Lee 寄生胞囊量的10%。