渔业水体水和底泥中阿维菌素和伊维菌素的测定 液相色谱-串联质谱法DB43／T 2792-2023.pdf

ICS 65.150 CCS B50 43 湖南省地方标准 DB 43/T 27922023 渔业水体水和底泥中阿维菌素和伊维菌素的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of avermectin and ivermectin in water and sediment from fishery waters by liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2023-11-09 发布 2024-02-09 实施 湖南省市场监督管理局 发 布 DB 43/T 27922023 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规 范性 引用 文件.1 3 术 语和 定义.1 4 方法 原理.1 5 试 剂与 材料.1 6 仪 器与 设备.2 7 样品.2 8 测定 步骤.3 9 结 果计 算和 表述.5 10 检测 方法 的灵 敏度、准 确度 和精 密度.6 附录A（资 料性）阿维 菌素 和伊 维菌 素标准 溶 液特 征离 子质 量色 谱图.7 DB 43/T 27922023 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.12020 标准 化工 作导则 第1 部 分：标准 化文 件的 结构 和起 草规 则的 规定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能 涉及 专利。本 文件的 发布 机构 不承 担识 别专 利的 责任。本文件 由湖 南省 农业 农村 厅提 出。本文件 由湖 南省 农业 标准 化技 术委 员会 归口。本文件 起草 单位：湖南 省水 产科 学研 究所、农业农 村部 渔业 产品质 量监 督检 验测 试中心（长沙）、衡阳市 畜牧 水产 事务 中心、澧 县农 产品 质量 安全检 测中 心。本 文 件主 要起 草人：万译 文、杨 霄、李 小玲、曾 春 芳、谢仲 桂、张 光洁、陈湘 艺、索 纹纹、刘 伶 俐、雷琴、洪波、崔 先锋、何 咏、黄华 伟、肖维、尹升 福、黄向 荣、谢玉 昆。DB 43/T 27922023 1 渔业水体水和底泥中阿维菌素和伊维菌素的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本文件 规定 了渔 业水 体中 阿维 菌素 和伊 维菌 素的液 相色 谱-串联 质谱 测定 方法。本文件 适用 于渔 业水 体水、底 泥中 阿维 菌素 和伊维 菌素 的测 定。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的 规范 性引 用而 构成本 文件 必不 可少 的条 款。其 中，注日 期的 引用文 件，仅 该 日期 对应 的版 本适 用于 本文 件；不注 日期 的 引用 文件，其 最新 版本（包 括所 有的 修改 单）适用 于本文件。GB/T 6682 分析 实验 室用 水规 格和 试验 方法 GB 17378.5 海洋 监测 规范 第5 部 分：沉积 物分析 HJ 494 水质 采样 技术 指导 SL 187 水质 采样 技术 规程 3 术语和 定义 本文件 没有 需要 界定 的术 语和 定义。4 方法原 理 水试样 中的 目标 物经HLB 固相 萃取 柱富 集和 净化，底泥 试样 中的 目标 物经 氨化 乙腈 提取，PSA 和C18吸附剂 净化。净 化后 的溶 液用 带有 电喷 雾离 子源的 液相 色谱-串联 质谱 仪测 定，外标 法 定量。5 试剂与 材料 除另有 规定 外，所有 试剂 均为 分析 纯；水应 为符合GB/T 6682 规定 的一 级水。试剂 5.1.1 甲醇（CH3OH）：色谱 纯。5.1.2 乙腈（CH3CN）：色谱 纯。5.1.3 乙酸铵（CH3COONH4）：色谱 纯。5.1.4 甲酸（HCOOH）：色谱 纯。5.1.5 氯化钠（NaCl）。5.1.6 氨水（NH3 H2O）。溶液配 制 5.2.1 5 mmol/L 乙酸 铵溶 液：取乙 酸铵 0.19 g，用 水 溶解 并稀 释至 500 mL。DB 43/T 27922023 2 5.2.2 70%乙腈 水溶 液：取乙 腈70 mL，用水 稀释至 100 mL。5.2.3 0.2%氨化 乙腈：取 氨水 1 mL，用 乙腈 稀释至 500 mL。标准品 5.3.1 阿维菌 素B1a（Avermectin B1a,C48H72O14,CAS 号：65195-55-3），含量 95.0%。5.3.2 伊维菌 素B1a（Ivermectin B1a,C48H74O14,CAS 号：71827-03-7），含量 95.0%。标准溶 液配 制 5.4.1 标准储 备液（100 g/mL）：取 阿维 菌素、伊维 菌 素标 准品 各约 10 mg，精密 称定，用乙腈 溶 解并稀释 定容 至100 mL，配 制成 浓度 均为100 g/mL 的 标准 储备 液。-18 避光 保存，有效 期 6 个 月。5.4.2 混合标 准中 间液（1.0 g/mL）：分别 精密量 取 阿维 菌素、伊 维菌 素标 准储 备液 各 1 mL，于100 mL 容量 瓶中，用 乙腈 稀释 定容 至刻 度，配制成 浓度 为 1.0 g/mL 的 混合 标准 中间液。-18 避光保存，有效 期1 个 月。材料 5.5.1 HLB 固相 萃取 柱：500 mg/6 mL。5.5.2 PSA（N-丙基 乙二 胺）吸附 剂：粒径40 m 63 m 或相 当者。5.5.3 C18 吸附 剂：粒径40 m 63 m 或 相当 者。5.5.4 微孔滤 膜：0.45 m 玻璃 纤维 滤膜 和0.22 m 聚四 氟乙 烯滤 膜。6 仪器与 设备 液相色 谱-串联 质谱 仪，配有 电喷 雾离 子源。分析天 平：感量0.01 g 和0.00001 g。冷冻干 燥机。涡旋混 合器。高速离 心机：转 速10000 r/min。超声波 清洗 器。固相萃 取装 置。氮吹仪。旋转蒸 发仪。pH 计。7 样品 样品采 集 水样采 集应 符合SL 187 的要 求。底泥 样品采 集 应符 合HJ 494 的要 求。试样制 备 采集的 水样 经0.45 m 玻 璃纤 维滤 膜过 滤后，置于 样品 瓶中，在0 4避 光保 存。采集 的 底泥样品经 冷冻 干燥 机冷 冻干 燥后，剔 除石 块和 植物体 等异 物，用研 钵研 磨后 过60 目（孔径 0.25 mm）网筛，在0 4避 光保 存。DB 43/T 27922023 3 空白试 样制 备 选取不 含阿 维菌 素和 伊维 菌素 的同 类样 品，按照7.2 的方 法制 备。8 测定步 骤 提取 8.1.1 水 量取20 mL（准 确至 0.1 mL）试 样，置于50 mL 离心 管中，用 甲酸 调节 pH 至4.0（0.2），混合均匀。无 需提 取，待净 化。8.1.2 底泥 称取 5 g（准确 至0.02 g）试样于 50 mL 离心管中，加入 3 mL 水润湿，加入0.2%氨 化乙腈 11 mL，涡旋混 合1 min，超声 提取 10 min，加 入氯化 钠 2 g，涡 旋混 合 1 min，8000 r/min 离心 5 min，取 上清液并 转移 至25 mL 比色 管中，残 渣用10 mL 0.2%氨化 乙腈 重复 提取 一次，合 并上 清液，用乙 腈定 容至25 mL，混匀，备 用。净化 8.2.1 水 HLB 固相 萃取 柱依 次用 5 mL 甲 醇、5 mL 水活 化。取 水样 过柱，控 制流 速不 超过 1 mL/min。待水 样全部通 过小 柱后，用5 mL 水淋 洗，减压 抽 干，用6 mL 甲 醇洗 脱。收集 洗脱 液，40下 氮 气吹 至近 干。用1.00 mL 70%乙腈 水溶 液溶 解残 渣，过0.22 m 聚四 氟乙 烯滤 膜，供液 相色 谱-串 联质 谱仪测 定。8.2.2 底泥 移取10.00 mL 上述 备用 液至25 mL 茄形 瓶中，40 下减 压浓 缩至 近干，用2.00 mL 70%乙腈 水溶液溶解 残渣，加 入PSA 吸附 剂 100 mg，C18 吸附 剂 40 mg，涡旋 振荡 30 s，10000 r/min 离心 5 min，取上清液 过0.22 m 聚 四氟 乙烯 滤膜，供 液相色 谱-串联 质谱 仪测 定。底泥试 样含 水率 测定 应符合GB 17378.5 的要 求。标准曲 线制 备 8.4.1 水 精密量 取混 合标 准中 间液 适量，用70%乙腈 水溶液 配制 成阿 维菌 素和 伊维 菌素 浓度 为 1 g/L、2 g/L、5 g/L、10 g/L、20 g/L、50 g/L 和100 g/L 的 系列 混合 标准 工作 液，供液相 色谱-串联质谱 仪测 定。以测 得特 征离 子质 量色 谱峰 峰面积 为纵 坐标、对应 的标 准溶 液浓 度为 横 坐标，绘 制标 准曲线，求得 回归 方程 和相 关系 数。8.4.2 底泥 精密量 取混 合标 准中 间液 适量，用7 份经 提取 和 净化 处理 的空 白试 样基 质溶 液溶 解稀 释，配制 成阿维菌素 和伊 维菌 素浓 度为1 g/L、2 g/L、5 g/L、10 g/L、20 g/L、50 g/L 和100 g/L 的系DB 43/T 27922023 4 列基质 匹配 混合 标准 工作 液，过0.22 m 聚四 氟 乙烯 滤膜，供 液相 色谱-串联 质谱 仪测定。以测 得特 征离子质 量色 谱峰 峰面 积为 纵坐 标、对应 的标 准溶液 浓度 为横 坐标，绘制 标准 曲线，求 得 回归方 程和 相关系数。测定 8.5.1 液相色 谱参 考条 件 液相色 谱参 考条 件如 下：a)色谱柱：C18(1002.1 mm,粒径 2.6 m)，或相当 者；b)流动相：A 为乙 腈，B 为5 mmol/L 乙酸 铵溶 液，梯 度洗 脱条 件见 表1；c)进样量：5 L；d)流速：0.35 mL/min；e)柱温：40。表1 流动相 梯度 洗脱 条件 时间 min A%B%0 10 90 0.5 10 90 3.0 95 5 6.0 95 5 6.1 10 90 75 10 90 8.5.2 质谱参 考条 件 质谱参 考条 件如 下：a)离子源：电 喷雾 离子 源；b)扫描方 式：正离 子扫 描；c)检测方 式：多反 应监 测（MRM）；d)喷雾电 压：5.5 kV；e)脱溶剂 气温 度：400；f)多反应 监测 母离 子、子离 子、去簇 电压 和碰 撞能量 见表2。表2 多反应 监测 母离 子、子离 子、去簇 电压 和碰 撞能量 化合物名称 母离子 m/z 子离子 m/z 去簇电压 V 碰撞能量 eV 阿维菌素 890.4 305.2a 100 35 567.3 100 18 表2 多反 应监 测母 离子、子 离子、去 簇电压 和 碰撞 能量（续）DB 43/T 27922023 5 化合物名称 母离子 m/z 子离子 m/z 去簇电压 V 碰撞能量 eV 伊维菌素 892.4 569.3 a 95 23 307.0 95 36 a 定量离子。8.5.3 定性测 定 在相 同测试条件 下，试样中 待测物的保 留时间与 标准工作液 中待测物的 保留时间一 致，偏差 在2.5%以内，且 试样中待测物 定性离子的 相对丰度 与浓度相当的 标准溶液对 应的定性离子的相 对丰度一致。其 允许 偏差 应符 合表3 的要 求。表3 定性确 证时 相对 离子 丰度 的最 大允 许偏 差 相对离子丰度/%50 2050 1020 10 允许的相对偏差/%20 25 30 50 8.5.4 定量测 定 按8.5.1 和8.5.2 设 定仪 器条 件，取标 准工 作溶液、试 样溶 液、空白 试样 溶液 等体 积进 样测定，外标法定 量。标准 工作 溶液 和试 样溶 液中 目标 物的响 应值 均应 在仪 器检 测线 性范 围内。阿 维菌素 和伊 维菌素标准 溶液 特征 离子 质量 色谱 图见 附录A。空白实 验 按照与 上述 测定 步骤 相同 的条 件进 行空 白试 样（见7.3）的 测定。9 结果计 算和 表述 水中待 测物 含量 按式（1）计 算。计算 结果须 扣 除空 白值，保 留两 位有 效数 字。1=0(1)式中：1试样 中待 测物 的含 量，单位 为微 克每 升（g/L）；从 标准 工作 曲线 得到 的待 测物 溶液 浓度，单位 为微 克每 升（g/L）；试样 最终 定容 体积，单 位为 毫升（mL）；0试样 体积，单 位为 毫升（mL）；底泥中 待测 物含 量按 式（2）计 算。计算 结 果须扣 除空 白值，保 留两 位有 效数 字。2=1 2(1)(2)式中：2试样 中待 测物 的含 量，单位 为微 克每 千克（g/kg）；1试样 提取 液体 积，单位 为毫 升（mL）；2准确 移取 的备 用液 体积，单 位为 毫升（mL）；试样 质量，单 位为 克（g）；试样 含水 率，单位 为质 量分 数（%）。DB 43/T 27922023 6 10 检测方 法的 灵敏 度、准确 度和 精密 度 灵敏度 本方法 在渔 业水 体水 中阿 维菌 素和 伊维 菌素 的检出 限均 为0.02 g/L，定 量限 均为0.05 g/L；在渔业水 体底 泥中 阿维 菌素 和伊 维菌 素的 检出 限均为0.3 g/kg，定 量限 均为1.0 g/kg。准确度 本方法 水在0.05 g/L 5 g/L 添加浓度 水 平上的 回收 率为60%110%；底 泥 在 1 g/kg 100 g/kg添加浓 度水 平上 的回 收率 为70%110%。精密度 本方法 的批 内相 对标 准偏 差10%，批 间相对 标 准偏 差15%。DB 43/T 27922023 7 A A 附录A（资料 性）阿维菌 素和 伊维 菌素 标准 溶液 特征 离子 质量 色谱图 阿维菌 素和 伊维 菌素 标准 溶液 特征 离子 质量 色谱图 见图A.1。图A.1 阿维 菌素 和伊 维菌 素标 准溶 液特 征离 子质量 色 谱图（10 g/L）