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I C S 6 5.0 2 0.3 0C C S B 4 121辽 宁 省 地 方 标 准D B 2 1/T 3 8 8 0 2 0 2 3规 模 猪 场 环 境 中 蚊 蝇 携 带 主 要 病 毒 监 测 技术 规 范T e c h n i c a l s p e c i f i c a t i o n s f o r m o n i t o r i n g t h e m a i n v i r u s e s c a r r i e d b y m o s q u i t o e s a n df l i e s i n t h e e n v i r o n m e n t o f l a r g e-s c a l e p i g f a r m sX X X X-X X-X X 发 布 X X X X-X X-X X 实 施辽 宁 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布D B 2 1/T 3 8 8 0 2 0 2 3I前 言本 文 件 按 照 G B/T 1.1 2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分：标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定起 草。请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利。本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 专 利 的 责 任。本 文 件 由 辽 宁 省 农 业 农 村 厅 提 出 并 归 口。本 文 件 起 草 单 位：沈 阳 农 业 大 学、辽 宁 伟 嘉 农 牧 生 态 食 品 有 限 公 司。本 文 件 主 要 起 草 人：刘 金 玲、张 欢、魏 澍、冯 寿 华、张 敏、房 乃 君、吴 长 德、王 海 龙、杨 作 丰、赵宝 凯、杜 方 原、魏 园 园、张 皓 淳、邓 文 超、耿 庆 华。本 文 件 发 布 实 施 后，任 何 单 位 和 个 人 如 有 问 题 和 意 见 建 议，均 可 以 通 过 来 电 和 来 函 等 方 式 进 行 反 馈，我 们 将 及 时 答 复 并 认 真 处 理，根 据 实 际 情 况 依 法 进 行 评 估 及 复 审。归 口 管 理 部 门 通 讯 地 址：辽 宁 省 农 业 农 村 厅（沈 阳 市 和 平 区 太 原 北 街 2 号），联 系 电 话：0 2 4-2 3 4 4 7 8 6 2。文 件 起 草 单 位 通 讯 地 址：沈 阳 农 业 大 学（沈 阳 市 沈 河 区 东 陵 路 1 2 0 号），联 系 电 话：0 2 4-8 8 4 8 7 0 5 4。D B 2 1/T 3 8 8 0 2 0 2 31规 模 猪 场 环 境 中 蚊 蝇 携 带 主 要 病 毒 监 测 技 术 规 范1 范 围本 文 件 规 定 了 对 规 模 猪 场 环 境 中 蚊 蝇 携 带 主 要 病 毒 进 行 监 测 的 技 术 要 求。本 文 件 适 用 于 规 模 猪 场 环 境 中 蚊 蝇 携 带 主 要 病 毒 的 监 测，其 他 猪 场 参 照 使 用。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款。其 中，注 日 期 的 引 用 文 件，仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件；不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本（包 括 所 有 的 修 改 单）适 用 于 本文 件。G B/T 1 6 5 5 1 猪 瘟 诊 断 技 术G B/T 1 8 6 4 1 伪 狂 犬 病 诊 断 方 法G B/T 1 8 6 4 8 非 洲 猪 瘟 诊 断 技 术G B 1 9 4 8 9 实 验 室 生 物 安 全 通 用 要 求G B/T 2 1 6 7 4 猪 圆 环 病 毒 聚 合 酶 链 反 应 试 验 方 法G B/T 2 2 3 3 3 日 本 乙 型 脑 炎 病 毒 反 转 录 聚 合 酶 链 反 应 试 验 方 法G B/T 2 7 5 1 7 鉴 别 猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征 病 毒 高 致 病 性 与 经 典 毒 株 复 合 R T-P C R 方 法N Y/T 5 4 1 兽 医 诊 断 样 品 采 集、保 存 与 运 输 技 术 规 范N Y/T 4 1 3 7 猪 细 小 病 毒 病 诊 断 技 术3 术 语 和 定 义本 文 件 没 有 需 要 界 定 的 术 语 和 定 义。4 缩 略 语下 列 缩 略 语 适 用 于 本 文 件。D E P C：焦 碳 酸 二 乙 酯（D i e t h y l p y r o c a r b o n a t e）5 样 本 采 集5.1 采 样 人 员采 样 人 员 应 符 合 N Y/T 5 4 1 中 的 规 定。5.2 采 样 时 间蚊 子 样 本 5 月 1 0 月 采 集，苍 蝇 样 本 每 年 4 月 1 0 月 采 集。每 年 应 至 少 监 测 1 次，并 根 据 猪 场周 边 环 境 及 疫 情 状 况 调 整 采 样 频 率。5.3 采 样 地 点D B 2 1/T 3 8 8 0 2 0 2 32根 据 猪 场 布 局，在 猪 舍、饲 料 库、粪 便 堆 积 场、污 水 处 理 井 等 场 所 设 置 采 样 点，采 样 点 数 量 应 根 据猪 场 规 模 确 定。5.4 采 样 方 法5.4.1 蚊 子 样 本 采 用 灯 诱 法 采 集。室 外 应 选 择 远 离 干 扰 光 源，背 风 场 所 作 为 诱 蚊 灯 悬 挂 点，在 离 地 1.5m 处 挂 灯，日 落 后 2 0 m i n 开 灯，连 续 诱 捕 蚊 子 2 h 关 灯。室 内 安 装 时 不 应 靠 近 门 和 能 开 启 的 窗，应 与照 明 光 源 靠 近 安 装。5.4.2 苍 蝇 样 本 采 用 笼 诱 法 采 集。将 捕 蝇 笼 分 别 放 置 在 诱 捕 地 点，天 凉 时 应 放 在 较 暖 及 背 风 地 方，炎热 天 气 应 放 在 阴 凉 的 地 方。诱 饵 宜 使 用 糖 醋 水、腐 鱼 等 有 强 烈 气 味 的 饵 料。5.5 样 本 选 择每 个 蚊 子 采 样 点 应 至 少 选 取 3 0 只 腹 部 饱 满 蚊 子 放 入 1 个 灭 菌 自 封 袋，每 个 苍 蝇 采 样 点 应 至 少 选 取1 0 只 苍 蝇 放 入 1 个 灭 菌 自 封 袋，标 记 信 息 备 用。剩 余 苍 蝇、蚊 子 集 中 无 害 化 处 理。5.6 样 本 管 理5.6.1 样 本 保 存 和 运 输5.6.1.1 采 集 的 样 本 应 采 用 保 温 容 器 加 冰 袋 或 干 冰 密 封，应 在 8 h 之 内 运 送 到 实 验 室。5.6.1.2 样 本 生 物 安 全 标 识 和 运 送 流 程 应 按 照 N Y/T 5 4 1 确 定 的 要 求 执 行。5.6.1.3 样 品 到 达 实 验 室 后，在 2 8 条 件 下 保 存 应 2 4 h。若 需 长 期 保 存，应 放 置 于 超 低 温 冰箱（7 0），避 免 反 复 冻 融。5.6.2 样 本 信 息 记 录完 整、准 确 填 写 采 样 信 息 登 记 表，并 归 档 备 查。6 病 原 监 测6.1 生 物 安 全 措 施样 本 处 理 及 检 测 操 作 的 生 物 安 全 措 施 应 符 合 G B 1 9 4 8 9 中 的 要 求。6.2 样 本 前 处 理按 每 个 采 样 点 灭 菌 自 封 袋 中 蚊 子、苍 蝇 样 本 分 别 合 样 制 样，先 在 生 理 盐 水 中 漂 洗 1 次 2 次，置于 无 菌 研 钵 中，加 入 适 量 D E P C-H2O 研 磨 匀 浆，将 匀 浆 液 置 于 无 菌 离 心 管 中，于 4 条 件 下 1 2 0 0 0 r/m i n离 心 1 0 m i n，取 上 清 液 备 用。6.3 监 测 项 目重 点 开 展 非 洲 猪 瘟、猪 瘟、猪 繁 殖 与 呼 吸 综 合 征、猪 伪 狂 犬 病、猪 圆 环 病 毒 病 等 病 原 监 测，其 它 病种 可 根 据 猪 场 疫 病 状 况 和 防 控 需 要 选 择，如 猪 细 小 病 毒 感 染、日 本 脑 炎 等。6.4 病 原 检 测 依 据 标 准病 原 检 测 依 据 标 准 见 表 1。D B 2 1/T 3 8 8 0 2 0 2 33表 1 病 原 检 测 依 据 标 准疫病名称 依据标准非洲猪瘟 G B/T 1 8 6 4 8猪瘟 G B/T 1 6 5 5 1猪繁殖与呼吸综合征 G B/T 2 7 5 1 7猪伪狂犬病 G B/T 1 8 6 4 1猪圆环病毒病 G B/T 2 1 6 7 4猪细小病毒感染 N Y/T 4 1 3 7日本脑炎 G B/T 2 2 3 3 36.5 结 果 记 录 与 分 析6.5.1 样 本 检 测 完 毕，应 完 整、准 确 记 录 检 测 结 果 备 查。6.5.2 对 于 检 测 结 果 阳 性 的，宜 进 一 步 测 定 毒 株 关 键 基 因 序 列，分 析 毒 株 基 因 遗 传 变 异 情 况，为 猪 场采 取 疫 病 风 险 评 估、免 疫、消 毒、无 害 化 处 理 等 针 对 性 防 控 措 施 提 供 技 术 依 据。7 样 本 留 存样 本 留 存 应 符 合 G B 1 9 4 8 9 中 的 要 求。8 废 弃 物 处 置废 弃 物 处 置 应 符 合 G B 1 9 4 8 9 中 的 要 求。
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